全 文 ：橄 生 物 学 通 报 1 9 9 3年 20(l )
生长的作用图 , 因此吐甘牛乳培养基加上薄层
液体培养技术就可以培养出发育良好的厚膜泡
子 。 本方法与困体培养基比较 , 有操作方便 ,结
果明确的优点 .
. 专 文 献
1
. 肠 n n o t t. E H e t a l . : M a n u a l o f e l in i e a l m i c r o bio lo盯 .
3 r d de
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a s h i n g t o n D C : A m e r i e . n Soc
o f 面 e r o b i o l o g y s
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5石8一 ,` 9 , 1 , 8 0 .
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W a . h i n乎 o n J A : L a b o r: t o r , P r o e e d u r .e 1. e l i n i e a l
面 e r o b i o log y . N e w Y o r k : S P r in g e r一 V e r l a g , P . 4 2 8一
4 2 ,
, 19 8 1
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( 1 9 9 2
一 ` 一咭收稿 )
狗尾草旋抱腔菌单子囊抱子分离技术
郭 慧
(北京农业大学 ,北京 1 0 0 0 9 4 )
摘要 通过分离工具的改进 ,分离时间的选择 , 抱子成熟度的识别和培养基的选择 , 提高了狗尾草
旋抱腔菌单于班抱子的分离成活率 。
关锐词 狗尾草旋抱腔菌 ;单子囊抱子 ;分离
对狗尾草旋抱腔菌 [ C o ` h l`o b o l二 , , 。 t a r 奋a , (三 ) 成熟子 . 壳 ,子班及子 . 抱子的识别
l( ot et K盯 ib . ) D er hc sl . l 杂交后代进行四分 成熟的子囊壳一般较大 、黑色 、具嚎 。 成熟
体分析 ,需在挑取单个子囊内 8 个子襄抱子 , 并 的子囊内抱子丰满 、 充实 。 成熟的子襄抱子略
保证其全部成活的基础上进行 。 本文报道的狗 带橄榄绿色 。
尾草旋抱腔菌单子囊抱子分离技术 , 通过分离 (四 ) 分离用培并甚
工具的改进 , 分离时间的选择及抱子成熟度的 先在 4务 水琼脂培养基上分离 。 因 4务水 —识别和培养基的选择 , 提高了该菌单子囊抱子 琼脂较硬 , 便于操作 。 挑取后的单子囊抱子立
的分离速度和分离后的成活率。 即转移到完全培养基琼脂块上 , 完全培养基营
(一 ) 玻琅针的栩 . 养丰富 , 有利于抱子萌发 、 生长 。
取直径为 L ,一 Zm m 的细玻璃棒 , 在酒精 (五 ) 单子 . 抱子的分离
灯上烧红后 , 均匀用力向两侧平拉 , 直至拉断 。 用接种针挑取成熟的子囊壳放在无菌载玻
玻璃针分为剥离针和挑取针两种 。 剥离针拉断 片上 ,加盖无菌盖玻片后 , 用接种针柄轻轻敲击
后 ,需在酒精灯火焰内快速沾一下 ,使其针端略 盖玻片 , 直至子囊壳破碎 。
变 回钝 , 以减少在剥离过程中对子囊抱子壁的 将沾有压碎的子襄壳内含物的 盖 玻 片 取
机械损伤 。 挑取针则要求针端细长 ,便于挑取。 下 , 放在置于无菌载玻片上的 4务 水琼脂块上
(二 ) 分离时向的选择 (图 l) 轻轻按压 , 使盖玻片上的子囊 , 子囊抱子
在诱导狗尾草旋抱腔菌有性世 代 常 用 的 转移至水琼脂块上 。 将水琼脂块置于显微镜下 —
s ac h 培养基上接种后 , 培养 25 一 30 天 , 为最佳 观察 , 寻找完整的或稍有破裂的 , 但子囊抱子
分离时间 。 过早则由于抱子不成熟 ,萌芽率低 。 未损失的子囊。 用剥离针轻轻将子囊挑破后 ,
过晚则由于成熟过度 , 不易获得含 8 个子囊抱 加一小滴无菌水 ,在无菌水的作用下 , 子囊壳内
子的完整子囊 。 缠在一起的子囊抱子会漂浮 , 分散 。 必要时可
DOI : 10. 13344 /j . mi crobi ol . chi na . 1993. 01. 015
一 s, 3 年 2 0 ( l ) 微 生 物 学 通 报
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图 l 水琼脂及完全培养基琼脂块放置的位里
用剥离针帮助缠在一起的抱子分散开 。 待抱子
分散后 ,换用挑取针一一挑取 , 分别转移至载玻
片另一端放置的 8 块完全培养基上 (图 l ) 。 然
后将 8 块带有单子囊抱子的琼脂块转移至完全
培养基上培养。
(六 ) 结果与讨论
在狗尾草旋抱腔菌单子囊抱子的最初分离
中 , 由于机械损伤及其它原因造成分离后的抱
子萌发成活率低 , 很难进行完整的四分体分析 ,
经采用上述方法后 , 所分离 的单子囊抱子萌发
成活率可达到 90 拓以上。 使在该菌中进行四
分体分析得到了技术上的保障。
单子囊抱子的萌发成活率除受其成熟度的
影响外 , 自子囊中逐一分离挑取过程中避免机
械损伤是十分重要的一个环节。
( 1 99 2
一
3
一
7 收稿 )
匕
气相色谱检出和鉴定厌氧菌方法的改进
陈立茵 周 方 朱厚础
,
(军事医学科学院微生物流行病研究所 ,北京 10 0 0 7 1)
摘典 用程序升温毛细管气相色谱法分析厌氧菌代谢产物中的有机酸丁醋 , 有可能代替常规方法
中的两步色谱分析 ,简化了实验程序 ,缩短了时间 ,初步验证结果表明改进方法的可行性 。
关镇词 毛细管气相色谱法 ; 厌氧菌
卜一
` 祖
. , 川户 . . 巨
气相色谱检出和鉴定厌氧菌的方法已被许
多实验室采用 “ , ” , 但目前常用的程序是两步色
谱法 , 即直接分析挥发性有机酸 , 非挥发有机酸
需经甲醋化之后再行色谱分析 3[] 。 这种方法适
用简易价廉的色谱仪 , 但培养物用量较大 , 费
时 , 且不利于结果的计算机 自动解 析 。 我 们
在 M O s 等报告的有机酸丁醋分析方法 基 础
上 .t ” , 将常用两步法改用一步法 , 通过对水肿
梭菌 、 生抱梭菌和破伤风梭菌等培养物的分析 ,
初步验证了改进方法的可行性 。
材 料 和 方 法
(一 ) 混合有机欲今考试荆
用 ” 种已知有机酸参考试剂配制混 合 有
机酸参考试剂 , 其中包括丙酸 ( q 。 ) 、 异丁酸
( IC
、 : 。
)
、 丁酸 ( C ; : 。 ) 、 异戊 酸 ( I C , : 。 ) 、 戊 酸
( C
, : 0
)
、 异 己酸 ( I C。 : 0 ) 、 己酸 ( C` : 0 ) 、 庚酸
( 7C
: 。
)
、 苯乙酸 、苯丙酸浓度为 o污 m e q八 0 0 m l ;
甲酸 ( cl : 。 ) 、 乙酸 ( Cz : 。 ) 、 苯甲酸 、 丁二酸 、 丙
酮酸 、 戊二酸 、 己二酸 、对经基苯甲酸浓度为 1 . 0
m e q八 o o m l ; 乳酸浓度为 2 . o m e q八 o o m l 。
(二 ) 实验菌种及培养物
由中国医学细菌菌种保藏管理中心提供的
参考菌种为 水肿梭 菌 ( c l o ; r r i d i “ 。 o o d e o a -
r滚e 。 , ) , 生抱梭菌 ( C l o , r r id i u o s P o r o 窟。 , 。 , ) 和
破伤风梭菌 ( C l o s r r id i“ m r e r a n i )。 培养物制
备和处理的详细方法见气性坏疽病原菌特征代
谢物 的检测 6[] 。
(三 ) 有机酸丁 . 衍生物的制备
取上述混合有机酸参考试剂 l . Om l , 酸化