全 文 ：［收稿日期］ 20130529(001)
［基金项目］ 贵州省科学技术基金项目(20112289) ;贵阳市中
药现代化项目(2010-1-中-9) ;贵州省省中医药管
理局项目(QZYY2010-92)
［第一作者］ 刘俊宏，博士，讲师，从事中药质量控制及天然产
物研究，E-mail:liujunhong84517@ 126． com
［通讯作者］ * 王爱民，教授，硕士生导师，从事中药质量评价
与新药研究，Tel:0851-6908468，E-mail:gywam100
@ 163． com
UPLC测定云实皮中二氢红花菜豆酸苷和原苏木素 B的含量
刘俊宏1，2，刘佳1，刘丽娜1，2，谭安菊1，李勇军1，2，刘童1，2，王爱民1，2*
( 1. 贵阳医学院药学院 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵阳 550004;
2. 贵州省药物制剂重点实验室，贵阳 550004)
［摘要］ 目的:建立 UPLC测定云实皮中二氢红花菜豆酸苷和(±)原苏木素 B含量的方法。方法:采用 ACQUITY UPLC
BEH C18色谱柱(2. 1 mm × 150 mm，1. 7 μm) ，以乙腈-0. 1%甲酸水溶液梯度洗脱，流速 0. 3 mL·min
－1，检测波长 266 nm，柱温
45 ℃。结果:二氢红花菜豆酸苷、(±)原苏木素 B分别在 0. 497 ～ 79. 6 mg·L －1(0. 999 8) ，1. 50 ～ 240 mg·L －1(0. 999 9)有良
好的线性关系;平均加样回收率为 100. 9%(ＲSD 1. 9%) ，99. 89%(ＲSD 1. 8%)。结论:该方法简便、准确，可用于评价云实皮
药材的质量。
［关键词］ 云实皮;二氢红花菜豆酸苷; (±)原苏木素 B;超高液相色谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)20-0077-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013200077
Determination of Two Components Content in Caesalpinia decapetala by UPLC
LIU Jun-hong1，2，LIU Jia1，LIU Li-na1，2，TAN An-ju1，LI Yong-jun1，2，LIU Tong1，2，WANG Ai-min1，2*
(1． School of Pharmacy，Guiyang Medical College，Engineering Ｒesearch Center for the Development and
Application of ethnic Medicines and TCM，Ministry of Education，Guiyang 550004，China;
2. Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics in Guizhou Province，Guiyang 550004，China)
［Abstract］ Objective:To establish UPLC method for the determination of two components in Caesalpinia
decapetala． Method:Separation was performed at 45 ℃，on a ACQUITY UPLC BEH C18 column (2. 1 mm ×150
mm，1. 7 μm)with a gradient solvent system of acetonitrile-0. 1% aqueous formic acid as the mobile phase． The
flow rate was 0. 3 mL·min －1 and the detection wavelength was 266 nm． Ｒesult:The linear response ranges of
(1Ｒ，3S，5Ｒ，8S，2E，4E)-dihydrophaseic acid-3-O-β-D-glucopyranoside and (±)Protosappanin B were
0. 497-79. 6 mg·L －1 (r = 0. 999 8) ，1. 50-240 mg·L －1 (r = 0. 999 9) ，respectively． The mean recoveries of the
two components were 100. 9% (ＲSD 1. 9%) ，99. 89% (ＲSD 1. 8%)． Conclusion:The method is simple and
accurate，and is suitable for evaluating the quality of Caesalpinia decapetala．
［Key words］ Caesalpinia decapetala; (1Ｒ，3S，5Ｒ，8S，2E，4E)-dihydrophaseic acid-3-O-β-D-
glucopyranoside; (±)protosappanin B;UPLC
云实皮又称阎王刺，为豆科植物云实的干燥根 或根皮，收载于 2003 年版《贵州省中药材、民族药材
质量标准》中，具有祛风除湿、解毒消肿的功效，用
于感冒发热、咳嗽、咽喉肿痛等症［1］，主要分布于贵
州、广西、云南等地区［2］。目前仅见一些关于云实
皮极性较小的化学成分研究［3-5］，未见对云实皮药
材的药理活性和质量控制方面的文献报道，本课题
根据云实皮用于感冒发热、咳嗽、咽喉肿痛等症，采
用抗炎模型对其活性部位进行筛选，对活性部位进
行系统化学成分研究，从中首次分离得到具有代表
性和专属性的化学成分二氢红花菜豆酸苷 ［(1Ｒ，
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3S，5Ｒ，8S，2E，4E)-dihydrophaseic acid-3-O-β-
D-glucopyranoside］［6］和(±)原苏木素 B［7-8］作为对
照品，并参考文献［9］建立超高效液相色谱法测定云
实皮药材中这 2 种成分的含量，该方法可用于评价
云实皮药材的质量。
1 材料
超高液相色谱系统(ACQUITY UPLC，美国沃特
世公司，包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、
柱温箱、二极管阵列检测器、Empower 2 工作站) ，
AE240 型 1 /10 万电子天平(梅特勒-托利多仪器上
海有限公司) ，超纯水机(四川沃特尔科技发展有限
公司)。
二氢红花菜豆酸苷，(±)原苏木素 B(本实验
室自制，经 HPLC 检查，用峰面积归一化法计算，纯
度 ＜ 98%) ;乙腈和甲酸为色谱纯，屈臣氏纯净水。
实验用 32 批云实皮药材采收于贵州省，经贵阳医学
院药用植物与生药学教研室龙庆德副教授鉴定为豆
科植物云实 Caesalpinia decapetala (Ｒoxb．)Alston
的干燥根茎。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH C18 柱
(2. 1 mm ×150 mm，1. 7 μm)色谱柱，流动相乙腈
(A)-0. 1%甲酸 /水(B) ，梯度洗脱，(0 ～ 12 min，5%
A;13 ～ 30 min，5% ～ 14% A) ，流速 0. 3 mL·min －1，
柱温 45 ℃;检测器为阵列二极管检测器(PDA) ，检
测波长为 266 nm，进样 1 μL。二氢红花菜豆酸苷，
(±)原苏木素 B 对照品溶液及云实皮药材提取液
供试品溶液 UPLC图，见图 1。
A．混合对照品;B．供试品;
1. 二氢红花菜豆酸苷;2. (±)原苏木素 B
图 1 云实皮供试品 UPLC
2. 2 对照品溶液制备 分别精密称取二氢红花菜
豆酸苷和(±)原苏木素 B适量，用 50%甲醇配置成
质量浓度分别为 0. 796 0，2. 400 g·L －1混合对照品
储备液，备用。
2. 3 供试品溶液制备 取云实皮药材粉末(过 40
目筛)约 2 g，精密称定，精密加入 70%甲醇 25 mL，
加热回流提取 2 h，放冷，用 70%甲醇补足减失的质
量，滤过，滤液置 10 000 r·min －1离心 10 min，取上清
液，即得。
2. 4 线性关系考察 精密吸取上述混合对照品储
备液 1 mL，置 10 mL 量瓶中，用 50%甲醇稀释至刻
度，摇匀，得混合对照品溶液①。精密量取 5 mL 混
合对照品储备液①，置 10 mL 量瓶中，加 50%甲醇
稀释至刻度，摇匀，得混合对照品溶液②，依次等比
稀释，分别得系列混合对照品溶液③，④，⑤。再精
密量取 1 mL混合对照品溶液⑤，置 10 mL 量瓶，加
50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得混合对照品溶液⑥。
分别精密吸取各混合对照品溶液 1 μL，按拟定的色
谱条件，注入液相色谱仪中，以峰面积(Y)为纵坐
标，进样浓度(X)为横坐标，绘制工作曲线计算二氢
红花菜豆酸苷和(±)原苏木素 B，回归方程分别为
Y = 6. 00 × 106 X － 2. 96 × 103(r = 0. 999 8) ，Y =
7. 99 ×106X －1. 09 ×104(r = 0. 999 9) ，结果表明二氢
红花菜豆酸苷在0. 497 ～79. 6 mg·L －1，(±)原苏木素
B在 1. 50 ～240 mg·L －1有良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 取同一供试品溶液，按 2. 1 项下
的色谱条件，精密吸取供试品溶液 1 μL，连续进样 6
次，测定二氢红花菜豆酸苷和(±)原苏木素 B 色谱
峰峰面积的 ＲSD 分别为 0. 7%，0. 3%，表明仪器精
密度良好。
2. 6 重复性试验 取同一批号云实皮药材，精密称定
6份，按 2. 3项下方法制备成供试品溶液，平行测定，计
算二氢红花菜豆酸苷平均含量 0. 128 8 mg·g －1，ＲSD
0. 9%;(±)原苏木素 B 平均含量 0. 892 9 mg·g －1，
ＲSD 0. 5%，表明该方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 取同一供试品溶液，于室温下
0，2，4，6，8，12，24 h 进样，测定和(±)原苏木素 B
色谱峰峰面积，计算 ＲSD分别为 1. 1%，1. 6%，表明
样品在 24 h稳定。
2. 8 回收率试验 称取已测定含量(二氢红花菜
豆酸苷为 0. 128 8 mg·g －1，(±)原苏木素 B 为
0. 892 9 mg·g －1)的云实皮药材 6 份，每份约 1 g，精
密称定，分别加入精密加入二氢红花菜豆酸苷和
(±)原苏木素 B对照品适量，照 2. 3 项方法制备供
试品溶液，按 2. 1 项色谱条件测定，计算回收率，结
果见表 1。
2. 9 样品测定 取 32 批不同产地的云实皮药材粉
末各 2 g，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，在上述
色谱条件下进行分析，对超过线性范围的样品，稀释
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表 1 云实皮药材加样回收率试验(n = 6)
化合物 称样量 / g 样品中量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
二氢红花菜豆酸苷 1. 001 6 0. 129 0 0. 124 4 0. 255 1 101. 37 100. 9 1. 9
1. 000 8 0. 128 9 0. 124 4 0. 251 3 98. 39
1. 002 3 0. 129 1 0. 124 4 0. 256 9 102. 73
1. 008 5 0. 129 9 0. 124 4 0. 256 8 102. 01
1. 001 6 0. 129 0 0. 124 4 0. 251 7 98. 63
1. 008 5 0. 129 9 0. 124 4 0. 256 9 102. 09
(±)原苏木素 B 1. 001 6 0. 894 3 0. 850 0 1. 742 6 99. 80 99. 89 1. 8
1. 000 8 0. 893 6 0. 850 0 1. 736 8 99. 20
1. 002 3 0. 895 0 0. 850 0 1. 765 7 102. 44
1. 008 5 0. 900 5 0. 850 0 1. 736 5 98. 35
1. 001 6 0. 894 3 0. 850 0 1. 757 3 101. 53
1. 008 5 0. 900 5 0. 850 0 1. 733 5 98. 00
后进样测定，测定结果见表 2。
表 2 32 批药材含量测定 mg·g － 1
产地 批号
二氢红花
菜豆酸苷
(±)原苏
木素 B
总量
贵州贵阳 2011031501 0. 128 8 0. 892 9 1. 021 7
贵州从江县 2011041501 0. 064 2 0. 232 3 0. 296 5
贵州从江县 2011041502 0. 121 7 0. 175 1 0. 296 8
贵州贵阳药用植物园2011041503 0. 096 4 0. 042 9 0. 139 3
贵州贵阳药用植物园2011061201 0. 071 8 0. 031 8 0. 103 6
贵州贵阳 2011062601 0. 100 5 0. 511 1 0. 611 6
贵州关岭 2012010201 0. 130 1 1. 230 3 1. 360 4
贵州镇宁 2012010202 0. 182 1 0. 493 3 0. 675 4
贵州关岭 2012010203 0. 195 2 0. 962 6 1. 157 8
贵州兴义 2012010204 0. 127 1 3. 417 5 3. 544 6
贵州镇宁 2012010205 0. 209 0 0. 347 2 0. 556 2
贵州关岭 2012010206 0. 175 6 1. 218 6 1. 394 2
贵州贵阳 2012010207 0. 102 7 0. 502 5 0. 605 2
贵州镇宁 2012010209 0. 176 1 0. 474 0 0. 650 1
贵州从江县 2012010210 0. 092 5 0. 335 1 0. 427 6
贵州从江县 2012010211 0. 076 6 0. 350 0 0. 426 6
贵州贵阳 2012031101 0. 097 6 0. 330 3 0. 427 9
贵关兴义 2012031102 0. 140 7 1. 577 1 1. 717 8
贵州孟关 2012031103 0. 098 1 0. 811 6 0. 909 7
贵州兴义 2012031104 0. 100 2 1. 696 5 1. 796 7
贵州镇宁 2012031105 0. 197 2 0. 375 5 0. 572 7
贵州镇宁 2012031106 0. 091 6 0. 564 5 0. 656 1
贵州关岭 2012031107 0. 174 2 2. 053 8 2. 228 0
续表 2
产地 批号
二氢红花
菜豆酸苷
(±)原苏
木素 B
总量
贵州贵阳 2012031108 0. 049 9 0. 488 6 0. 538 5
贵州关岭 2012031109 0. 149 5 1. 703 1 1. 852 6
贵州兴义 2012031110 0. 066 6 1. 899 1 1. 965 7
贵州镇宁 2012031111 0. 059 4 0. 450 4 0. 509 8
贵州兴义 2012031112 0. 190 2 2. 500 7 2. 690 9
贵州关岭 2012031114 0. 129 1 1. 034 6 1. 163 7
贵州贵阳 2011121001 0. 094 2 0. 651 5 0. 745 7
贵州贵阳 2012040901 0. 068 5 0. 820 9 0. 889 4
贵州贵阳 2012042601 0. 097 4 1. 645 8 1. 743 2
3 讨论
样品溶液制备方法分别以甲醇(100%，70%，
50%，30%)、乙醇为溶剂，用索氏提取法、回流提取
法和超声提取法进行提取，并对提取时间进行考察，
结果 70%甲醇回流提取 2 h效率最高。
采用 PDA在 190 ～ 400 nm 对待测成分进行紫
外扫描，2 个化合物在 266 nm处均有较大吸收。经
试验研究，在 266 nm进样测定，基线平稳，图谱分离
较好，且峰形好，故选择 266 nm作为检测波长。
本研究从云实药材的主产区贵州收集了 32 批
药材，含量测定结果显示，32 批药材中均含有二氢
红花菜豆酸苷和(±)原苏木素 B，说明上述 2 种化
学成分是云实皮药材的共有成分。本研究建立的含
量测定方法简便、准确，可为云实药材的质量评价和
控制提供依据。
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刘俊宏，等:UPLC测定云实皮中二氢红花菜豆酸苷和原苏木素 B的含量
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［4］ 张琼，刘雪婷，梁敬钰，等．云实的化学成分［J］．中国
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［8］ 陈玉平，毕丹，屠鹏飞． 苏木的质量标准研究［J］． 中
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［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20130506(025)
［基金项目］ 卫生部科学研究基金项目(WKJ2010-2-019) ;浙江省中医药科学研究基金计划项目(2012ZB032)
［第一作者］ 樊玲玲，硕士研究生，从事中药活性成分及质量标准研究，Tel:18268160694，E-mail:yichun2424@ 163． com
［通讯作者］ * 丛晓东，硕士生导师，从事中药活性成分与新药创制研究，Tel:0571-87195886，E-mail:congxiaodong199@ yahoo． cn
近红外光谱法快速检测玉竹酒基提取液中多糖的含量
樊玲玲1，2，张雯雯1，2，丛晓东1，2* ，蔡宝昌1，钱建华3，方小民3，彭美仙3
( 1. 浙江中医药大学中药炮制技术研究中心，杭州 310053;
2. 浙江省省级药学类工程实践教学基地，杭州 310053;
3. 浙江致中和实业有限公司，浙江 建德 311607)
［摘要］ 目的:建立测定玉竹酒基提取液中多糖含量的近红外光谱(NIＲ)快速分析方法。方法:采用苯酚-硫酸法测定
73 批玉竹酒基提取液中多糖含量，采用傅里叶变换近红外透射光谱技术采集玉竹酒基多糖提取液的近红外光谱，结合偏最小
二乘法(PLS)建立多糖的定量校正模型。结果:玉竹酒基提取液多糖校正模型校正集的相关系数(Ｒ)、内部交叉验证均方差
(ＲMSECV)分别为 0. 970 3，0. 771，经外部验证，预测值与实测值的相关系数为 0. 969 2，预测均方差(ＲMSEP)为 0. 624。结论:
该方法快速方便、准确可靠，可用于玉竹酒基提取液多糖含量的快速测定。
［关键词］ 在线近红外光谱;定量分析;多糖;快速检测
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)20-0080-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013200080
Ｒapid Determination of the Polysaccharide Content in Polygonatum Wine
Matrix Extract by Near Infrared Ｒeflectance Spectroscopy
FAN Ling-ling1，2，ZHANG Wen-wen1，2，CONG Xiao-dong1，2* ，CAI Bao-chang1，
QIAN Jian-hua3，FANG Xiao-min3，PENG Mei-xian3
(1. Zhejiang Chinese Medical University，Ｒesearch Center of Traditional Chinese Medicine
Processing Technology，Hangzhou 310053，China;
·08·
第 19 卷第 20 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 20
Oct．，2013