全 文 ：中华肾脏病杂志 0 0 0 2年 6月第 1 6卷第 3期 h Ci nJ N e ph or l, J u n e 2 0 0 0 , v o l 里久坦些 3
· 钧七著
汉防己甲素 、川芍嗓和苦杏仁试对
人肾成纤维细胞的影响
屈腿林 方勤 陈高翔 王志惠
[摘要】 目的 观察汉防己甲素 、 川芍嗓和苦杏仁贰 3 种中药成分对人肾成纤维细胞 ( KF B) 的
影响 。 方法 采用 E l SA 法 、 四甲基偶氮哇蓝 ( M竹 )法 、 流式细胞仪 、 免疫组织化学法分别检测汉防
己 甲素 、 川芍嗓 、 苦杏仁贰对人 KF B 分泌的 I型胶原酶活性 、 人 K F B 增殖 、 凋亡 、 I 型胶原表达的影
响 。 结果 汉防己甲素 、川芍嗦 、苦杏仁贰 3 种中药提取成分在各 自的最佳浓度范围和作用时间内均
能提高人胎 KF B 分泌的 I型胶原酶活性 、 抑制人胎 K F B增殖和 I型胶原的表达 、 促进人胎 K F B 凋
亡 。 结论 汉防己甲素 、川芍嗦 、苦杏仁贰在预防及逆转肾间质纤维化中起重要作用 。
【关键词】 汉防己甲素 川芍嗦 苦杏仁贰 肾成纤维细胞 纤维化
E n沁c t s o f t e t r a n d ir n e , t e tr a m e t hy l Py ar z in e a n d am y g d a li n o n h um a n k id n ey n b
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[A玩t r ac t ] o bj e e t i v e T。 s t u d y t h e e fe e t s o f t e t r a n d五n e , t e t r a m e th y lp y ar z i n e a n a a叫g d a l in o n
a e t iv i yt Of e o l la罗 n a s e s e e r e t e d b y h u m a n k id n e y if bor b la s t s ( K F B ) , p or li fe r at i o n , a p o p t o s is an d e x p er s s io n o f
t即 e I e o l la g e n of h u m a n K FB . M e t h o d s A e t i v it y o f ty p e I e o ll a g e n a s e s e e er t e d b y K FB , a p o p t o s i s ,
p or li fe
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叩 o p t o s i s . C o n c l u s i o n eT tar n d r i n e , t e t ar m e thy l p y ar z in e a n d am y g d al i n m a y p l a y im p o rt an t or le s in
Per v e n t io n a n d er v e r s i o n o f er n a l i n t e r s t it ia l if b r o s is
.
[ K e y w o r d s 】 T e tar n d d n e ; T e t r a m e th y lp y r a z i n e : Am y gd a lin ; K i d n e y if b or b l a s t : F ib or s is
肾间质纤维化是各种原因造成的肾小管及间
质病变的最终结果 , 也是导致终末期肾功能衰竭的
重要原因之一 川 。 肾间质纤维化的主要原因是肾
成纤维细胞 ( K FB) 增生及细胞外基质 ( E C M )过度堆
积 ` 2 1。 K FB 增生与细胞增殖活跃而凋亡减少有关 ;
E C M 堆积与 E C M 产生及分解失衡相关 。 研究表明 ,
汉防己甲素 、川芍嚓 、苦杏仁贰 3 种中药提取成分对
肺 、 肝纤维化等疾病有一定的疗效 〔3 一 ” , 但对肾间质
纤维化的作用却未见报道 。 我们观察了这 3 种药物
对人胎 K F B 分泌的胶原酶活性 、 K FB 增殖 、 凋亡及
胶原表达的影响 , 为临床预防及逆转肾间质纤维化
寻找有效药物 ,并为其提供实验依据 。
材料与方法
一 、药品和试剂
作者单位 : 61 0 41 成都 , 华西 医科大学附属第一 医院肾内科
〔屈隧林 (现在华西医科大学附属第三医院肾内科 ) 、 王 志惠 」; 四川
省人民医院肾内科 (方勤 ) ;无锡市第三人民医 院肾内科 (陈高翔 )
M E M
一
F
1 2
( G I B C O 公司 ) , 鼠抗人 I型胶原单克隆
抗体 ,人 I型胶原 ,胰蛋白酶抑制剂 ( S i g m a 公司 ) ,亲
和素生物素复合物 ( A B )C 试剂盒 ( V ec ot r 公司 ) , 辣
根过氧化物酶 ( H R )P 标记的羊抗鼠 n抗 (华美公
司 ) ,二甲亚矾 (M er ck 公司 ) ,灭活新生小牛血清 (四
川洪雅力生生化厂 ) , 胰蛋白酶 (DI FCO 公司 ) , 青霉
素 、 链霉素 (华北制药厂 ) , O P D (西安化学试剂厂 ) ,
MT (上海华顺生物试剂厂 ) , 多聚赖氨酸 (中山公
司 ) 。
二 、方法
1
.
K F B 培养及鉴定 : ( 1 ) K FB 的培养 : 干净胎肾
髓质组织 , 剪成约 l m耐 的碎块 , 加人 0 . 1% ( w / v )
胶原酶 W 1 m l 消化组织 , 用 2 0 0 目的细胞筛过滤消
化液 , 收集滤液于离心管中 , 1 0 0 : / m in 离心 5
m in
, 然后用 P B S 洗涤 3 次 , 用 D M E M 一1F 2 洗涤 1
次 。 洗涤完后加人含 20 % 灭活 的新生小牛血清的
D M EM
一
1F
2 培养基 ,悬浮细胞 ,用苔盼蓝染色计数 ,成
活率为 % % 。 将细胞悬液接种于 75 C时 培养瓶中
中华肾脏病杂志 2 0 0 0 年 6 月第 16 卷第 3 期 C h i n J N e p h or l . J u n e 2 0 0 0 , V o l 16 . N o . 3
表 1 汉防己甲素 、川芍嗓 、苦杏仁贰对 K F B 分泌的 I型胶原酶活性的影响 ( A 值 , 牙 士 , , n = 3)
浓度 (协g / m l )
对照
5
.
0 0 0
.
10 0 0 士 0
.
0 0 7 1
△ △△ 0
.
18 5 0 士 0 . 0 15 0 △ 0 . 19 6 7 士 0
.
0 2 0 8 △
2
.
5 0 0
.
0 9 5 0 士 0 . 0 0 5 0 △ △△ 0
.
2 60 0 士 0
.
0 3 0 0 0
.
2 2 0 0 士 0 0 10 0
1
.
2 5 0
.
15 0 0 士 0
.
2 0 0
△ △
0
.
24 5 0 土 0 . 0 15 0 0
.
2 1 67 士 0
.
0 0 5 8
10 0
.
0 0 0
.
3 4 6 7 士 0 . 0 1 15 △ △ 0 . 25 0 0 士 0
.
0 3 00 0
.
3 30 0 士 0 . 0 1 7 3 △ △ △
8 0
.
0 0 0
.
2 10 0 土 0 . 0 3 0 0 △ △ 0
.
23 0 0 士 0
.
0 14 1 0
.
16 6 7 士 0 . 0 2 0 8 △ △
5 0
.
0 0 0
.
2 3 0 0 土 0 . 0 17 3 0
.
13 3 3 士 0 . 0 20 8△ △ 0
.
15 0 0 士 0
.
0 1 00
△ △ △
10 0
.
0 0 0
.
2 5 3 3 士 0
.
0 2 5 2 0
.
3 8 6 7 士 0
.
0 35 1
△ △ 0
.
2 0 0 0 士 0
.
0 1 7 3
△
8 0
.
0 0 0
.
2 8 0 0 士 0
.
0 2 6 5 0
.
16 6 7 士 0
.
0 2 89
△ △
0
.
19 6 7 土 0 . 0 15 3 △
5 0
.
0 0 0
.
2 4 3 3 士 0 . 0 3 0 6 0
.
2 0 6 7 士 0 . 0 3 2 1 0 . 2 10 0 士 0 . 0 10 0
一一一一一一一一一一一一一一一一一卫匹巫迎~ 全口卫 ) SQ 口 2 3 0 0 土 0 . 0 0 0 0 . … _
_
_ . ~ 0
.
2 3 0 0 奔q:. 9」卫(L一一一
注 : “汉 ”表示汉防己甲素 ; “川 ” 表示川芍嚓 ; “ 苦 ” 表示苦杏仁贰 ;下表同 ;与对照组相比 , △ p < 0 . 05 , △ △ p < 0 . 0 1 , △ △ △ 尸 < 0 . 0 01
表 2 汉防己甲素 、 川芍嗦 、苦杏仁贰对 K FB 增殖的影响 ( A 值 , x 土 : , n 二 3)
浓度 (协 g / m l )
5
.
0 0
2
.
5 0
1
.
2 5
1 0 0
.
0 0
8 0
.
0 0
5 0
.
0 0
1 0 0
.
0 0
80
.
0 0
5 0
.
0 0
对照
0
.
2 50 0 士 0 . 0 10 0
0
.
2 3 33 士 0
.
0 0 5 8
0
.
2 5 0 0 士 0
.
0 10 0
0
.
2 6 6 7 上 0
.
0 2 0 8
0
.
2 7 0 0 土 0 . 0 10 0
0
.
2 7 0 0 士 0
.
0 10 0
0
.
2 80 0 士 0
.
0 2 0 0
0
.
3 0 0 0 士 0
.
0 2 0 0
0
.
3 0 0 0 士 0
.
0 3 6 1
0
.
2 7 3 3 士 0
.
0 1 15
0
.
0 6 6 7 土 0 . 0 2 8 9 △ △
0
.
2 6 6 7 土 0
.
0 5 7 7
△ △
0
.
4 1 6 5 土 0 . 0 2 8 9 △ △
0
.
5 5 0 0 士 0
.
0 8 6 6
△
0
.
6 6 6 7 士 0 . 0 5 7 7
0
.
6 8 3 3 士 0 . 0 2 8 9
0
.
3 00 0 士 0 . 0 8 6 5 △
0
.
4 50 0 士 0 . 0 50 0 △
0
.
5 8 3 3 土 0 . 0 2 8 9 △
0
.
7 3 3 3 士 0 . 0 2 8 9
0
.
5 6 6 7 土 0 . 0 2 8 9 △ △
0
.
7 3 3 3 士 0
.
02 89
△ △
0
.
86 6 7 土 0
.
0 2 89
0
.
8 16 7 士 0 . 10 4 1
0
.
8 0 0 0 士 0 . 0 5 0 0
0
.
8 3 3 3 土 0 . 0 7 6 4
0
.
6 0 0 0 土 0
.
0 5 0 0
△
0
.
5 5 0 0 士 0
.
0 0 0 0 △
0
.
6 6 6 7 士 0
.
0 2 8 9
△
与对照组相比 , △ 尸 < 0 . 05 , △ △ 尸 < 0 . 01
(密度为 2 x 10 6 / 瓶 ) , 于 3 7℃ 、 5% C O: 孵箱中孵
育 。 次 日换液 , 待细胞生长为单层后 ,用 0 . 25 % 的胰
蛋白酶于室温消化 3 m in 后用含 20 % 的小牛血清的
DM E M
一
F
t : 悬浮细胞行 l : 2 扩增传代 。 ( 2 ) K FB 的鉴
定 : 培养的细胞经相差显微镜 、 透射电镜及免疫学
鉴定证实为人胎 K FB 。
2
. 汉防己甲素 、 力I芍嗓 、 苦杏仁贰对人 K F B 表
达 I型胶原酶活性的影响 : 参照文献 〔6] 的方法检测
胶原酶的活性 ,并加以改进 。
3
. 汉防己甲素 、 川芍嗦 、 苦杏仁贰对人 K FB 增
殖的影响 :参照文献【7] 的方法检测 K F B 的增殖 。
4
. 汉防己甲素 、 川芍嗦 、 苦杏仁贰对人 K FB 凋
亡的影响 :参照文献【7] 的方法检测 K F B 的凋亡 。
5
. 汉防己甲素 、 川芍嗓 、 苦杏仁贰对人 K F B I
型胶原表达的影响 : 参照文献 f 7] 的方法检测 K F B I
型胶原的表达并将切片做图像分析 。
6
. 统计分析 : 汉防己甲素 、川芍嗦 、 苦杏仁贰对
人 K FB 分泌的 I型胶原酶活性 、 人 K F B 增殖的影响
用 t 检验 ; 药物对人 K FB 凋亡的影响用 x Z 检验 ; 药
物对人 K FB 胶原表达的影响用医用图像分析仪相
应的统计软件进行统计分析 。
结 果
一 、 汉防己甲素 、 川芍嗦 、 苦杏仁贰对 KF B 分泌
的 I型胶原酶活性的影响
我们的研究发现 , 汉防己甲素 5 林g / ml 作用于
K F B 2 4 一 7 2 h 及 1 . 2 5 一 2 . 5 林g / m l 作用于 KF B 2 4
h 能显著提高 K F B 分泌的 I型胶原酶活性 。 川芍嗓
10 0 林g / m l 作用 于 K F B 2 4 h 及 7 2 h 能显著抑制
K F B 分泌的 I型胶原酶活性 ; 川芍嗦 80 林g / ml 作用
于 K F B 2 4 h 及 7 2 h 及 5 0 林g / m l 作用于 K F B 4 8 -
72 h 能显著促进 K FB 分泌的 I 型胶原酶活性 。苦杏
仁贰 10 0 林g / m l 作用于 K F B 4 5 一 7 2 h 能显著抑制
K F B 分泌的 I 型胶原酶活性 , 而 80 林g / ml 作用于
K F B 4 8 ~ 72 h 能显著促进 K F B 分泌的 I型胶原酶
活性 (表 1 ) 。
二 、汉防己甲素 、 川芍嗓 、 苦杏仁贰对人 K FB 增
殖的影响
汉防 己甲素 1 . 25 一 5 林g / ml 作用 于人 K FB 后
4 8 h
,
2
.
5 一 5 林g / m l 作用于人 K r B 后 7 2 h 能明显
表 3 汉防己甲素 、 川芍嗦 、 苦杏仁贰对人 K F B 凋亡率
(% )的影响
组别 浓度伽 g / m l ) 2 4 h 4 8 h
汉 2 . 5 3 . 4 1 5 . 6么
川 8 0 . 0 3 . 6 △ 1 5 . 2△
苦 8 0 . 0 5 . 8 △ 2 5 . 0△
对服旧… _ __ . 鑫旦 -一一互卫一一一` 一与对照组相 比 , △ 尸 < 0 . 05表 4 汉防己甲素 、 川芍嗓 、 苦杏仁贰对人 K F B 表达 I
型胶原的影响 (牙士 : , n = or )
组别 浓度伽 g / m l ) 灰度值 、 面积恤m , )
汉 2 . 5 2 2 0 2 . 6 0 士 17 . 2 5 △
川 8 0 . 0 2 3 4 7 . 5 8 士 5 4 . 4 0 △
苦 8 0 . 0 2 4 0 5 . 89 土 7 1 . 5 4 △
对照 ._… _ ~ 二 1丝生旦些立红丝一一与对照组相比 , △ 尸 < 0 . 05
抑制人 K FB 增殖且呈明显的浓度依赖性 。 川芍嗦
10 0 协g / m l 作用 于 K FB 4 8 h 对 K F B 有明显的抑制
作用 。 苦杏仁贰 5 0 一 10 0 林g / m l 作用于人 K F B 4 5 -
72 h 对 K F B 的抑制作用明显高于对照组 , 其中 48 h
对 K FB 的抑制作用具有明显的浓度依赖性 (表 2 ) 。
三 、 汉防己甲素 、 川芍嗓 、 苦杏仁贰对人 K FB 凋
亡的影响
汉防己甲素 2 . 5 协g / ml 作用 于人 K FB 48 h 能
显著促进人 K FB 凋亡 ;) l!芍嗓 80 林g / ml 、 苦杏仁贰
8 0 林g / m l 作用 于人 K FB 2 4 一 4 8 h 均能显著促进人
K F B 凋亡 (表 3 ) 。
四 、 汉防己甲素 、 川芍嗓 、 苦杏仁贰对人 K F B 表
达 I型胶原的影响
汉防己甲素 2 . 5 _ 林g / m l 、 川芍嗦 8 0 林 g / m l 、苦杏
仁贰 80 林g / ml 作用于人 K F B 48 h 能明显抑制 I 型
胶原表达 (表 4 ) 。
讨 论
l型胶原是肾间质纤维化时的主要胶原 , 因此 ,
促进肾间质中过度堆积的 I型胶原降解及减轻 I型
胶原表达对阻止甚至逆转纤维化起至关重要的作
用 。 K FB 大量增殖是肾间质纤维化的特征之一 ,也是
大量分泌 E C M 的基础 。 细胞凋亡在逆转肾脏纤维化
中起重要作用 , 其原因为只有凋亡才能使已大量增
殖的 K F B 数量减少 ,从而减轻纤维化 ` 8」。 因此 ,我们
从人 K F B 分泌的胶原酶活性 、 细胞增殖 、 凋亡及胶
原表达 4 方面研究了 3 种中药提取成分对人 K F B 的
影响 , 为临床寻找有效的防治肾间质纤维化的药
物 。
汉防己甲素 , 又名粉防己碱 , 是从防己科植物粉
防己等根中提取的一种双节基异喳琳衍生物 。 汉防
己 甲素具有降血压 、 抗炎等作用 , 这些作用主要与其
钙通道阻滞剂及钙调蛋白拮抗剂的作用相关 。 近年
的研究表明 , 汉防己甲素对纤维化疾病有一定作用 ,
它通过抑制肺泡巨噬细胞分泌白细胞介素 ( I)L 一 1及
肿瘤坏死因子 ( T N r) 而抑制胶原产生 , 发挥抗矽肺
作用 。 范列英等 ! 9 ’发现 ,汉防己甲素能明显抑制肝细
胞 、 贮脂细胞内 D N A 及胶原合成 , 且抑制程度与药
物浓度 、 作用时间呈正相关 。 还有学者报道 ,汉防己
甲素能抑制体外培养的人皮肤 K FB 增殖 , 并能阻断
T GF
一
p 的促皮肤疤痕胶原基质收缩的作用 t `“ 〕。 我们
的研究发现 , 汉防己甲素在其最佳浓度和时间范围
内能提高人 K FB 分泌 的 I型胶原酶活性 , 抑制人
K FB 增殖及 I型胶原表达 ,促进人 K F B 凋亡 ,从而在
防治肾间质纤维化方面发挥一定作用 。
川芍嗓 , 又名四甲基毗嗓 , 是从伞形科植物川
芍根茎中提取分离的生物碱单体 , 具有改善微循
环 、 抗氧化 、 拮抗钙离子及抗纤维化等作用 。 唐利
龙等「川发现 , 川芍嚓具有抑制血管内皮细胞及平滑
肌细胞的作用 , 并能抑制平滑肌细胞 I 、 1 型前胶
原基因转录 。 近几年来 , 有学者报道静脉滴注川芍
嗓能有效提高慢性肾功能衰竭患者肌配清除率 , 改
善贫血 。 这可能与川芍嗓能抑制肾系膜细胞增殖有
关 「` 21 。 我们发现 , 川芍嗦在其最佳浓度和时间范
围内能提高人 K F B 分泌 的 I型胶原酶活性 , 抑制人
K FB 增殖及 I型胶原表达 , 促进人 K F B 凋亡 。
苦杏仁贰又称扁桃贰 , 是蔷薇科植物桃 、 李 、 杏
等核仁的提取物 。 苦杏仁贰能提高肝组织胶原酶活
性和抑制肝贮脂细胞活化 , 有效抑制胶原等基质生
成及促进其分解 ”` 。 我们研究发现 ,苦杏仁贰在其最
佳浓度和时间范围内能提高人 K F B 分泌 的 I型胶
原酶活性 ,抑制人 K FB 增殖及 I型胶原表达 ,促进人
K FB 凋亡 。
本研究结果初步表明 : 汉防己甲素 、 川芍嗓 、 苦
杏仁贰能在体外有效发挥抗肾间质纤维化的作用 ,
但它们发挥抗肾间质纤维化作用 的最佳浓度范围
和作用时间各不相同 。 汉防己甲素及川芍嗓最终可
能通过钙离子阻滞及膜稳定作用来调节细胞活动 ,
发挥抗纤维化的作用 。 进一步从分子水平阐明上述
中药提取成分的作用机制 , 并进行相关的临床研究
将有助于肾间质纤维化的防治 。
中华肾脏病杂志 2 0 0 0 年 6 月第 16 卷第 3 期 e h i n J N e p h r o l , J u n e 2 0 0 0 . v o l 1 6 . N o . 3
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(收稿日期 : 19 9 9 一 0 9 一 2 2 )
(本文编辑 : 李耀荣 )
· 乡乏验交流 ·黄茂注射液治疗慢性肾小球肾炎尿蛋 白的临床观察
罗伟文 陈向前
我们于 1 99 7 年 1 月至 1 99 9 年 3 月
应用黄蔑注射液治疗慢性肾小球肾炎 ,
以探讨其治疗作用 。
材料和方法
1
. 病例选择 : 65 例本院住院或门诊
慢性肾小球 肾炎患者 , 已除外狼疮肾炎
等继发性肾炎 , 按就诊先后随机分配到
治疗组和对照组中 。 治疗组 40 例 (男 17
例 , 女 23 例 ) , 年龄 14 ~ 5 3 岁 ,其中高血
压 24 例 (60 % ) , 高胆固醇血症 3 例
( 82
.
5% )
,
4 0 例患者均有不同程度的贫
血和血尿 。 对照组 25 例 (男 H 例 ,女 14
例 ) , 年龄 1 6 ~ 5 6 岁 , 其中高血压 16 例
(6 4% )
, 高胆固醇血症 2 0 例 ( 8 0% ) , 2 5
例患者均有不同程度的贫血和血尿 。 两
组间资料匹配 , 65 例患者的血肌醉 , 血
尿素氮 (B UN) 均在正常值范围 。
2
. 治疗方法 : 对照组给予潘生丁片
2 5 m g t i d
、 复方丹参注射液 1 2 m l 加入
5% 葡萄糖注射液 2 50 ml 静脉滴注 , q d ,
用药 28 d 。 治疗组在上述基础上加用黄
表 1 治疗前后尿蛋白变化 ( g / 24 h) ( 万士 、 )
组别
对照组
治疗组
例数 治疗前
3
.
5 5 士 1
.
3 5
3
.
6 3 士 1
.
5 3
治疗后
3
.
4 2 士 1
.
24
1
.
0 2 士 0
.
84
*
一、à
2 04
与治疗前比 , * 尸 < 0 . 01
表 2 治疗前后各生化指标变化 (王士 s )
组别
治疗组
对照组
治疗前
治疗后
治疗前
治疗后
S e
r
(协m o l / L )
9 6
.
2 士 6
.
7
9 4
.
8 士 5 . 4
9 5
.
6 士 7
.
1
9 6
.
3 士 6 . 8
B U N
(m m o l / L )
5
.
4 3 士 1
.
6 5
5
.
2 6 土 1 . 3 8
5
.
3 2 土 1
.
5 7
5
.
2 8 土 1 . 4 2
A U I
,
(U )
16 士 8
15 土 6
16 士 7
15 士 7
R B C
( x 10
, 2 / L )
l
,
8 3 士 0
.
6 4
2
.
6 7 土 0
.
5 8
*
2
.
0 4 士 0
.
7 1
2
.
1 1 士 0 6 2
W B C
(
x 10
9 / L )
5
.
2 6 士 1
.
4 7
5
.
8 2 上 1
.
3 6
5 3 1 士 1 2 8
5
.
6 5 士 1 . 3 4
与治疗前比 , * 尸 < 0 . 01
作者单位 : 5 2 60 4 0 广东省肇庆市 , 端州
医院内科
蔑注射液 30 m l( 含黄蔑提取物 60 m g , 地
奥制药公司 ) , 加人 5% 葡萄糖生理盐水
2 5 0 m l静脉滴注 , q d , 用药 Zs d 。
3
. 检测指标 : ( 1 ) 24 h 尿蛋白定量 ,
每周 1 次 ; ( 2 ) 治疗前后 S e r 、 B UN 、 谷丙
转氨酶 (A LT ) 、 血红细胞 ( R B C ) 、 血白细
胞 (WB C )的变化 。
结果
见表 l ,表 2 。
讨论
不少文献报道 , 黄蔑可改善贫血 , 具
有正性肌力作用 , 能扩张血管 、 降低血压
和血小板粘附率等 ; 此外 , 黄蔑也可增强
机体非特异性免疫 , 是一良好的免疫调
节剂 , 但用黄茂注射液治疗慢性肾小球
肾炎的报道极少 。 我们的有限资料显示 ,
黄蔑可降低上述患者的尿蛋白量 , 提高
血中红细胞数 , 对肝肾功能无影响 。 这种
疗法为治疗慢性肾小球肾炎提供了一种
选择 , 且价格较低 , 易于推广 。
(收稿 日期 : 19 9 9 一 1 2 一 2 9 )
(本文编辑 :李耀荣 )