全 文 ：植物资源与环境学报　2008, 17(2):79-80　　　　　　　
JournalofPlantResourcesandEnvironment　　　　　
　　　 白背三七叶中吡咯里西啶生物碱的 LC-MSn检测
李丽梅 1 , 张涵庆 1 , 吕　寒 1 , 李维林 1, ① , 徐德然 2 , 郭巧生 3
〔1.江苏省·中国科学院植物研究所(南京中山植物园), 江苏南京 210014;
2.中国药科大学中药学院 , 江苏 南京 210038;3.南京农业大学中药材研究所 , 江苏南京 210095〕
DetectionofpyrrolizidinealkaloidsfromleafofGynuradivaricatabyLC-MSn　LILi-mei1 , ZHANGHan-qing1 , L
Han1 , LIWei-lin1, ① , XUDe-ran2 , GUOQiao-sheng3(1.InstituteofBotany, JiangsuProvinceandtheChineseAcademy
ofSciences, Nanjing210014, China;2.CollegeofTraditionalChineseMedicine, ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038, China;3.InstituteofTraditionalChineseMaterials, NanjingAgriculturalUniversity, Nanjing210095,
China), J.PlantResour.＆Environ.2008, 17(2):79-80
Abstract:Thepyrrolizidinealkaloids(PAs)inleafofGynuradivaricata(L.)DC.wasanalyzedbyLC-MSntechnique.Theresultshowsthattwohepatotoxicpyrrolizidinealkaloids(HPAs)aredetectedfromthemethanolextractofG.
divaricataleaf, withrelativemolecularweightof335 and365, respectivelyandlowercontent.Theconstituentwithrelativemolecularweight335 isaretronecine-typealkaloid, andidentifiedasintegerrimine;anotherconstituentwithrelative
molecularweight365 isanotonecine-typealkaloid, speculatedtobeisomerofusaramineor18-hydroxyinterrimine.
关键词:白背三七;吡咯里西啶生物碱;全缘千里光碱;液相色谱与多级质谱联用法(LC-MSn)Keywords:Gynuradivaricata(L.)DC.;pyrrolizidinealkaloids;integerrimine;LC-MSn
中图分类号:Q946.88;R284.2　　文献标志码:A　　文章编号:1004-0978(2008)02-0079-02
　　广泛分布于植物中的吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine
alkaloids, PAs)由具有双稠吡咯啶环的氨基醇与不同有机酸
缩合而成 , 醇部分为裂碱 (necine), 酸部分为裂酸 (necic
acid)。以裂碱的结构可划分为 2种类型 , 即倒千里光裂碱型
(retronecine-type, RET型)和奥托千里光裂碱型(otonecine-
type, OTO型)。 肝毒性吡咯里西啶生物碱 (hepatotoxic
pyrolizidinealkaloids, HPAs)是吡咯里西啶生物碱中的一大
类 , 急性中毒症状表现为肝脏细胞的静脉闭塞症 , 慢性中毒
的临床表现为肝巨红细胞症和肝的纤维化坏死 ,吡咯里西啶
生物碱由于上述毒性而受到国际医药界的广泛关注 [ 1] 。
吡咯里西啶生物碱的紫外吸收不强 ,用 HPLC-UV法检
测的灵敏度低 , 若缺乏对照品则难以准确判断样品中是否含
有该成分。液相色谱与多级质谱联用技术(LC-MSn)将高
效的色谱分离技术与高灵敏度的质谱检测技术相结合 , 对液
相色谱系统分离的成分进行定性检测和分子量测定 , 并经过
碰撞诱导解离过程得到分子离子(或称产物离子)。离子阱
质谱可重复此过程 , 实现多级质谱(MSn), 利用其提供的特
征碎片离子信息 , 可获得供试成分的结构信息 [ 1] 。
白背 三 七 〔Gynuradivaricata(L.) DC.〕为 菊 科
(Compositae)三七草属(GynuraCass.)植物 [ 2] , 民间取其叶
片治疗糖尿病。白背三七在某些地区有栽培 , 嫩茎叶可作蔬
菜食用。有文献报道白背三七中主要含有黄酮 、三萜 、甾醇
及核苷类化学成分 [ 3] 。此外 , 还含有肝毒性吡咯里西啶生物
碱 [ 4] , 因而对白背三七中的肝毒性吡咯里西啶生物碱类成分
进行分离和测定具有一定的理论意义和应用意义。为了进
一步确定白背三七叶片中 HPAs的结构类型 , 并为进一步的
毒理和药理实验提供依据 ,作者运用 LC-MSn技术对白背三
七叶中的 HPAs的结构进行了检测和分析。
1　材料和方法
1.1　材料
供试的白背三七引种自广东省 ,种植于南京中山植物园
实验苗圃 , 由江苏省·中国科学院植物研究所郭荣麟研究员
鉴定 , 凭证标本保存于江苏省·中国科学院植物研究所。采
集种植 3 a的植株叶片备用 。
所用仪器为 Agilent1100 seriesLC-MSDTrap联用系
统 , 包括二元溶剂泵 、真空脱气机 、自动进样器 、内置柱切换
阀的柱温箱 、光电二极管阵列检测器(DAD);ESI接口的离
子阱质谱检测器;AgilentRev.A.0901化学工作站。
1.2　方法
1.2.1　生物碱的提取方法　称取白背三七叶片 60.0 g, 干
燥粉碎 , 用适量甲醇在 60 ℃下超声提取 3次 , 每次 30 min,
合并提取液 , 减压浓缩得浸膏;浸膏用适量体积分数 2.5%
收稿日期:2008-02-24
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30470190);南京市科学技
术局现代农业项目(200501015)
作者简介:李丽梅(1980—), 女 , 广西南宁人 , 硕士研究生 ,研究方
向为中药资源与化学。
①通讯作者 E-mail:lwlcnbg@mail.cnbg.net
的 HCl溶液提取 3次 , 合并酸提液;酸提液用适量二氯甲烷
萃取 3次 , 经氨水碱化(pH 9 ～pH10)后 , 再用适量二氯甲烷
萃取 3次 , 合并萃取液 , 减压浓缩至干 ,用甲醇溶解并定容至
2 mL,得到白背三七叶片的生物碱提取液 ,备用。
1.2.2　LC-MSn检测条件　色谱条件:实验用色谱柱为岛
津 Shim-packVP-ODS柱(4.6mm×150 mm, 5 μm);流动
相 A为体积分数 0.1%醋酸 , 流动相 B为乙腈 , 5%至 50%梯
度洗脱 60min;进样量 10 μL;流速 1.0 mL· min-1。分流后
进入质谱的流速为 0.3 mL· min-1。
质谱条件:雾化气压力为 344.5 kPa, 干燥气流速为
10 L· min-1 , 干燥气温度 350 ℃,电离电压 3 000 V, 电喷雾
离子化(ESI), 正离子方式检测 , AutoMSn, 扫描范围(m/z)
50 ～ 1 000。
2　结果和分析
据文献 [ 5]报道 , 倒千里光裂碱型(RET型)HPAs的特
征碎片离子的质荷比(m/z)为 138、 120和 94;奥托千里光裂
碱型(OTO型)HPAs的特征碎片离子的质荷比(m/z)为 168、
150和 122。特征碎片离子可以反映这 2类肝毒性吡咯里西
啶生物碱的结构。
据文献报道 [ 1, 6] , 通过光二极管阵列监测器全波长扫描 ,
发现吡咯里西啶生物碱仅在 218 nm附近有较弱吸收 , 检测
的灵敏度不够 , 因而 , 作者使用 MS作为检测器 , 经多级 MS
对各个色谱峰进行进一步的检测 , 并对照文献 [ 5]中的质谱
裂解规律判断 HPAs的类型。
在生物碱提取液经 HPLC分离和 MS检测的总离子流色
谱(totalionchromatogram, TIC)图上未发现吡咯里西啶生物
碱峰 , 说明其在白背三七中含量较低 , HPLC法无法检出。
白背三七生物碱提取液经 LC-MSn共检测到 2个质荷
比(m/z)分别为 336和 366的分子离子 [ M+H] +, 其多级质
谱(MSn)主要碎片离子见表 1。结果表明 , LC-MSn可以检
测出白背三七叶中的肝毒性吡咯里西啶生物碱。
表 1数据表明 , 质荷比(m/z)336的分子离子 [ M+H] +
在 ESI-MSn谱上出峰时间为 17.5 ～ 17.7 min, 与其 TIC谱上
的出峰时间一致。ESI-MSn检测出特征碎片离子的质荷比
(m/z)为 138、120和 95, 结合文献 [ 5]的质谱裂解规律 , 判断
该成分为倒千里光裂碱型 HPAs。该成分的质谱裂解特征碎
片与文献 [ 4]报道的全缘千里光碱(integerrimine)一致 , 进一
步确定该成分为全缘千里光碱。
表 1　白背三七叶片生物碱提取液的碎片离子数据
Table1　FragmentionsdatumsofalkaloidextractfromGynuradivaricata(L.)DC.leaf
保留时间 /min
Retentiontime
相对分子质量
MW MS1　　　　　　　 MS2
生物碱类型
Typeofalkaloid
17.5-17.7 335 [ M+H] +(m/z)336 (m/z)336※308, 290, 138, 120, 94 倒千里光裂碱型 Retronecine-type
18.8 365 [ M+H] +(m/z)366 (m/z)366※168, 150, 122 奥托千里光裂碱型 Otonecine-type
　　由表 1的数据还可以看出 , 质荷比(m/z)366的分子离
子 [ M+H] +在 ESI-MSn谱上的出峰时间为 18.8 min, 与其
TIC谱的出峰时间相一致。 ESI-MSn检测出特征碎片离子质
荷比(m/z)为 168、 150和 122, 结合文献 [ 5]的质谱裂解规
律 , 判断该成分为奥托千里光裂碱型 HPAs。 该成分的相对
分子质量与文献 [ 4]报道的usaramine和 18-hydroxyinterrimine
一致 , 但质谱裂解的特征碎片离子峰不一致 , 推测可能为其
同分异构体。
3　结　　论
运用 LC-MSn技术 , 从白背三七叶片的生物碱提取物中
检测出的 2个吡咯里西啶生物碱成分均为肝毒性吡咯里西
啶生物碱 , 其中相对分子质量为 335的成分确定为全缘千里
光碱 , 相对分子质量为 365的成分推测可能为 usaramine或
18-hydroxyinterrimine的同分异构体 , 具体结构有待进一步确
定。白背三七叶片中上述 2种成分的含量较低 , 它们在白背
三七叶片药理方面的作用还需进一步探讨和分析。
参考文献:
[ 1] 　濮社班 , 徐德然 , 张　勉 , 等.中药款冬中肝毒吡咯里西啶生
物碱的LC/MSn检测 [ J].中国天然药物, 2004, 2(5):293-
297.
[ 2] 　中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志第七十七卷
第一分册[ M] .北京:科学出版社 , 1999.
[ 3] 　胡　勇 , 李维林 , 林厚文 , 等.白背三七地上部分的化学成分
[ J].中国天然药物 , 2006, 4(2):156-158.
[ 4] 　RoederE, EckertA, WiedenfeldH.Pyrrolizidinealkaloidsfrom
Gynuradivaricata[ J] .PlantaMed, 1996, 62(4):386.
[ 5] 　LinG, ZhouKY, ZhaoXG, etal.Determinationofhepatotoxic
pyrolizidine alkaloids by on-line high performance liquid
chromatographymasspectrometrywithanelectrosprayinterface
[J] .RapidCommunMassSpectrom, 1998, 12(20):1445-
1456.
[ 6] 　濮社班 , 徐德然 , 张　勉 , 等.橐吾属植物中肝毒性吡咯里西
啶生物碱的 LC/MSn检测 [ J] .药学学报 , 2004, 39(10):
831-835.
80 　　　　　　　　　　植 物 资 源 与 环 境 学 报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 17卷