全 文 ：基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金（２０１４２１１Ｃ１３６）。
作者简介：陈　蕾（１９８０－），女，硕士，副主任药师，研究方向：中药新药研究。
通信作者：邢建国，男，教授，硕士生导师，研究方向：新药研究与开发，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｇｕｏｄｄ＠１６３．ｃｏｍ。
复方一枝蒿复合磷脂脂质体的制备及其在Ｃａｃｏ－２
细胞模型中的吸收特性研究
陈　蕾１，姜　雯２，曾　诚３，潘晓梅２，邢建国３
（１新疆维吾尔自治区卫生与计划生育委员会药品采购中心，乌鲁木齐　８３００００；２新疆医科大学第六附属医院药剂科，乌鲁木齐　８３０００２；
３新疆维吾尔自治区药物研究所，乌鲁木齐　８３０００４）
摘要：目的　通过建立体外Ｃａｃｏ－２细胞模型，考察复方一枝蒿提取物和复方一枝蒿复合磷脂脂质体的转运
机制。方法　采用硫酸铵梯度法制备复方一枝蒿复合磷脂脂质体，考察其理化性质，并利用Ｃａｃｏ－２细胞模型，研
究和评估复方一枝蒿提取物和复方一枝蒿复合磷脂脂质体的肠吸收和转运特征。结果　在Ｃａｃｏ－２细胞单层模
型中，复方一枝蒿复合磷脂脂质体的渗透系数（Ｐａｐｐ）与复方一枝蒿提取物对比增加了６倍，复方一枝蒿提取物从
ａｐｉｃａｌ（Ａ，肠腔面）到ｂａｓｏｌａｔｅｒａｌ（Ｂ，基底面）的（Ｐａｐｐ）等于Ｂ到 Ａ，转运符合被动扩散，通过复合磷脂脂质体包裹
后，提高复方一枝蒿提取物透射率（Ａ到Ｂ的（Ｐａｐｐ）＞Ｂ到Ａ的（Ｐａｐｐ））具有一定的主动转运效果。结论　通过复
合磷脂脂质体包裹复方一枝蒿提取物促进了其跨膜转运，并进一步提高了复方一枝蒿提取物的转运能力。
关键词：复方一枝蒿提取物；复合磷脂脂质体；包封率；Ｃａｃｏ－２细胞模型
中图分类号：Ｒ９１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１６）０３－０３２０－０５
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－５５５１．２０１６．０３．０１４
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏ．ＹｉＺｈｉＨａｏ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ａｎｄ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｃａｃｏ－２ｃｅｌ　ｍｏｎｏｌａｙｅｒ　ｍｏｄｅｌ
ＣＨＥＮ　Ｌｅｉ　１，ＪＩＡＮＧ　Ｗｅｎ２，ＺＥＮＧ　Ｃｈｅｎｇ３，ＰＡＮ　Ｘｉａｏｍｅｉ　２，ＸＩＮＧ　Ｊｉａｎｇｕｏ３
（１　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｆａｍｉｌｙ　Ｐｌａｎｎｉｎｇ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００００；２　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｈｅ　Ｓｉｘｔｈ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ
Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３０００２；３　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３０００４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ＹＩＺＨＩＨＡＯ
ｅｘｔｒａｃｔ（ＣＹＥ）ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ＹｉＺｈｉＨａｏ（ＣＹ）ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（ＣＰＬ）ａｃｒｏｓｓ　Ｃａｃｏ－２ｃｅｌ
ｍｏｎｏｌａｙｅｒ　ｍｏｄｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔｓ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ
ｐｒｅｐａｒｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ＹｉＺｈｉＨａｏ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（ＣＹＣＰＬ），ａｎｄ　Ｃａｃｏ－２ｃｅｌ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ
ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ＣＹＥ　ａｎｄ　ＣＹＣＰＬ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＹＥ　ｉｎ　Ｃａｃｏ－２ｃｅｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉｎ　Ｃａｃｏ－２ｃｅｌ　ｕｐｔａｋｅ，ａ　６－ｆｏｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｎ　ＣＹＥ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｂ－
ｔａｉｎｅｄ　ｆｏｒ　ＣＰＬ　ｗｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＣＹＥ　ａｌｏｎｅ，ａｎｄ　Ｐａｐｐｏｆ　Ａｐｉｃａｌ　ｔｏ　Ｂａｓｏｌａｔｅｒａｌ　ｗａｓ　ｅｑｕａｌ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｏｆ　Ｂａ－
ｓｏｌａｔｅｒａｌ　ｔｏ　Ａｐｉｃａｌ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｏｆ　ＣＹＥ　ｗａｓ　ｐａｓｓｉｖｅ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ．Ｄｕｅ　ｔｏ　ＣＰＬ，ｔｈｅ　ｐｅｒ－
ｍｅａｔｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ＣＹＥ　ｗａｓ　ｅｎｈａｎｃｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＣＰＬ　ｃｏｕｌｄ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｏｆ　ＣＹＥ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｍｅａ－
ｔｉｎｇ　ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｏｎ　Ｃａｃｏ－２ｃｅｌ　ｍｏｎｏｌａｙｅｒ　ｍｏｄｅｌ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ＹｉＺｈｉＨａｏ；ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ；Ｃａｃｏ－２
ｃｅｌ　ｍｏｄｅｌ
　　复方一枝蒿 （ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ＹｉＺｈｉＨａｏ，ＣＹ）是一
种常用的抗病毒中成药，临床上主要用于治疗小儿
呼吸道病毒性感染［１］。复方一枝蒿处方由新疆一枝
蒿、大青叶和板蓝根组成，具有清热解毒、抗菌消炎、
　第３９卷　第３期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３９　Ｎｏ．３
　２０１６年３月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２０１６
抗过敏和治疗感冒等功效［２］。根据维吾尔医理论，
其可清除“乃孜来（病毒性感冒）”、解毒利咽，用于
“乃孜来”所致的感冒发烧、咽喉肿痛等［３－４］。复方
一枝蒿中的主要成分为一枝蒿酮酸，一枝蒿酮酸具
有抗病毒、抗炎、抗菌等作用［５］。复方提取物吸湿性
强和易潮解，为提高复方一枝蒿的临床疗效和稳定
性［６］，采用复合磷脂脂质体技术制备复方一枝蒿复
合磷脂脂质体，复合磷脂脂质体 （ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｐｈｏｓ－
ｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＰＬ）是近年来涌现出的一项
制剂新技术，是一种由２种不同磷脂相间排列和胆
固醇组成的类似生物膜结构的拥有不同相区域的磷
脂双分子层的球型药物载体，主要特点为在ＣＰＬ制
备过程中采用２种不同相变温度的磷脂（１种高于
常温，１种低于常温），所得制剂能够使药物的生物
相容性和生物利用度大幅度上升［７－１０］。
本实验采用复合磷脂脂质体包裹复方提取物，
并通过建立体外Ｃａｃｏ－２细胞模型考察药物的转运
机制，使药物在体内具有良好的生物相容性，并在胃
肠道中防止药物被降解，从而提高药物的口服生物
利用度，为中药复方制剂在口服纳米制剂领域中的
应用奠定基础。
１　仪器与材料
１．１　实验仪器　ＳＰＤ－１０Ａｖｐ型高效液相色谱仪
（日本岛津公司），控温加热磁力搅拌器（德国ＩＫＡ
公司），ＦＩＥＬＤＡ－４００Ｓ型手提式超声波细胞破碎仪
（江苏波杨智能科技股份有限公司），Ｎａｎｏ　Ｓ９０激光
粒度仪（英国马尔文公司）。
１．２　实验材料　复方一枝蒿提取物（由新疆维吾尔
自治区药物研究所提供），大豆磷脂（德国ｌｉｐｏｉｄ公
司，批号１３９０１７），氢化大豆磷脂（日本精细化工株
式公社，批号ＲＫＬ－ＭＤ２３１），胆固醇（河南利伟生物
药业股份有限公司，批号１４１１６，分析纯）。Ｓｅｐｈａ－
ｄｅｘ　Ｇ－５０（北京慧德易科技有限责任公司，批号１７－
００４２－０２），透析袋（上海哈灵生物有限公司，截留分
子量：８　０００～１４　０００ｕ），乙腈为市售分析纯试剂，水
为重蒸馏水。
１．３　Ｃａｃｏ－２细胞　人体结肠癌细胞（ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ
ｃｏｌｏｎ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ），Ｃａｃｏ－２细胞株购于中国
医学科学院药物研究所。
２　方法与结果
２．１　复方一枝蒿提取物复合磷脂脂质体的制备　
按９∶１∶１（重量比）将大豆磷脂（ＳＰＣ）、氢化大豆
磷脂（ＨＳＰＣ）和胆固醇溶于２ｍＬ无水乙醇，适当超
声使其溶解，注入到磁力搅拌（６０℃）的５ｍＬ、０．２
ｍｏｌ／Ｌ硫酸铵溶液中，５０℃减压回收乙醇５ｍｉｎ，取
出，调整体积至２５ｍＬ，冰浴探头超声（４００Ｗ，１５０
次）匀化后，低速离心（１　０００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｎ）除去钛
粉，用１０倍量体积ＰＢＳ溶液（ｐＨ＝７．４）透析，每次
２ｈ，共４次，除去外水相硫酸铵，制得空白复合磷脂
脂质体。取ＣＹＥ溶液与空白复合磷脂脂质体混匀，
６０℃恒温水浴磁力搅拌３０ｍｉｎ，冰浴中放置１０ｍｉｎ，
即得复方一枝蒿提取物复合磷脂脂质体（ＣＹＣＰＬ）。
２．２　色谱条件　ＣＯＳＭＯＳＩＬ　Ｐａｃｋｅｄ　Ｃｏｌｕｍｎ　５Ｃ１８－
ＭＳ－Ⅱ色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：
甲醇－０．４％磷酸溶液（５５∶４５）；检测波长：２４２ｎｍ，
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３５℃，进样量１０μＬ。分别
测定一枝蒿酮酸对照品、ＣＹＥ样品，在此色谱条件
下样品中其他成分对一枝蒿酮酸测定无干扰，见图
１、２。
图１　一枝蒿酮酸对照品的ＨＰＬＣ色谱图
图２　ＣＹＥ样品的ＨＰＬＣ色谱图
２．３　方法学考察
２．３．１　标准曲线的建立　建立ＣＹＥ的 ＨＰＬＣ分
析方法，标准曲线方程为：Ｙ＝３５　２２８．６３　Ｘ＋８　４０７．
６８（ｒ＝０．９９９　８，ｎ＝５），一枝蒿酮酸质量浓度在９．
０２４～１６２．４３２μｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。
２．３．２　精密度试验　将低、中、高浓度的一枝蒿酮
酸标准溶液（１０．１６、７７．５４８、１５５．３４μｇ／ｍＬ）用
ＨＰＬＣ在２４２ｎｍ下连续测定５次峰面积，计算日
内精密度，分别在５ｄ内每天用ＨＰＬＣ测定峰面积，
计算日间精密度。日内和日间精密度的相对标准偏
差（ＲＳＤ）分别为（１．５２±０．１４）％、（１．１３±０．１１）％、
（１．４７±０．１８）％和（１．３９±０．１８）％、（１．２２±０．
１５）％、（１．６２±０．２６）％，证明本方法精密度良好。
２．３．３　稳定性试验　取ＣＹＥ溶液５份，用 ＨＰＬＣ
在２４２ｎｍ下于不同时间点（０、１、２、４、６、８ｈ）测定峰
面积并计算含量。结果ＲＳＤ＝（２．０６±０．２３）％ （ｎ
１２３　第３期 陈　蕾，等：复方一枝蒿复合磷脂脂质体的制备及其在Ｃａｃｏ－２细胞模型中的吸收特性研究
＝６），证明本方法精密度良好。
２．３．４　加样回收率试验　精密吸取已知浓度（３．８５
μｇ／ｍＬ）的ＣＹＥ溶液１ｍＬ，精密加入１ｍＬ不同浓
度（５．２４、７０．３５、１４０．７０μｇ／ｍＬ）的一枝蒿酮酸标准
溶液混匀，用 ＨＰＬＣ法测定峰面积并计算含量和加
标回收率。一枝蒿酮酸高、中、低浓度的加样回收率
分别为（９９．０８±１．０４）％、（９９．５４±０．８５）％、（９８．５５
±１．２２）％，ＲＳＤ分别为（０．９３±０．１２）％、（０．８６±
０．１４）％、（１．３４±０．２２）％，均符合要求。
２．４　ＣＹＣＰＬ的粒径、ｚｅｔａ电位和形态观察　精密
移取ＣＹＣＰＬ　０．０５ｍＬ，用５倍水和介质稀释，采用
Ｎａｎｏ　Ｓ９０激光粒度仪测定粒径和ｚｅｔａ电位。同时，
采用２％磷钼酸纳负染色制备样品（样品用水和介
质稀释１０倍），在透射电镜下观察其形态与分布。
取ＣＹＣＰＬ，用激光粒度仪测定其粒径大小、分
布和ｚｅｔａ电位，所得ＣＹＣＰＬ平均粒径为（１４７．７±
４．８）ｎｍ，分散系数ＰＤＩ为（０．１５１±０．０３８），表明
ＣＹＣＰＬ粒径适中，分布均匀，分散性良好（图３），所
测Ｚｅｔａ电位为－１８．３６ｍＶ。
图３　ＣＹＣＰＬ的粒径分布图
采用磷钨酸负染法，用透射式电子显微镜观察
ＣＹＣＰＬ形态。将适当稀释后的待测复合磷脂脂质
体滴于Ｆｏｒｍｗａｎ膜铜网上（膜面向上），５ｍｉｎ后，
用滤纸片从铜网边缘吸干多余液体。然后向铜网上
滴加１％磷钨酸染液，１ｍｉｎ后，同样吸干多余液
体。将此铜网晾干后放入透射电镜观察，在镜下可
见ＣＰＬ呈圆球型且呈单分散分布，具有明显双分子
层结构，粒径范围小于１８０ｎｍ，分布均匀（图４）。
２．５　包封率的测定　精密吸取ＣＹＣＰＬ　３ｍＬ上
ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱（内径１ｃｍ，长度２７ｃｍ），用ｐＨ
７．４的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）洗脱，流速为１ｍＬ／ｍｉｎ，
收集含药复合磷脂脂质体，取同一批ＣＹＥ用ＰＢＳ
溶液（ｐＨ＝７．４）按１∶３比例稀释，分别用 ＨＰＬＣ
进样１０μＬ测定其峰面积，并代入线性方程计算复
合磷脂脂质体中药物含量和总药物含量。
包封率（ＥＥ ％）＝复合磷脂脂质体中药物含
量／总药物含量×１００％
２．６　Ｃａｃｏ－２细胞培养　人体结肠癌细胞Ｃａｃｏ－２细
胞传至１６～２２代，在３７℃、５％ ＣＯ２ 的环境中培养
Ｃａｃｏ－２细胞，培养基采用 ＤＭＥＭ（含１０％ 胎牛血
清、１％ 谷氨酰胺、１％ 非必需氨基酸和青霉素－链霉
素双抗液）。培养液３ｄ更换１次，３ｄ达到融合。
用胰酶（０．２５％）－ＥＤＴＡ（１ｍｍｏｌ／Ｌ）在３７℃条件下
消化，细胞接种按浓度８０　０００个／ｃｍ２ 转移到１２孔
Ｔｒａｎｓｗｅｌ板上，在细胞肠腔侧（ＡＰ）加入０．５ｍＬ
细胞培养液，在基底侧（ＢＬ）加入１．５ｍＬ无细胞的
培养液。２ｄ换１次液，１０ｄ后每天换１次液，在细
胞培养到２０ｄ时，测定Ｃａｃｏ－２细胞单层的跨膜电
阻（ＴＥＥＲ）。ＴＥＥＲ值＞４５０Ω，表明其具有足够的
紧密连接与完整性，见图５。
空白ＣＰＬ透射电镜图（Ａ） 　 ＣＹＣＰＬ的透射电镜图（Ｂ） 　 １０倍电镜下的形态图（Ａ） 　 ４０倍电镜下的形态图（Ｂ）
图４　 图５　Ｃａｃｏ－２细胞单层形态图
２．７　ＣＹＥ和ＣＹＣＰＬ的转运实验　取已建模成功
的Ｃａｃｏ－２细胞板，吸去肠腔侧（ＡＰ侧）和基底侧
（ＢＬ侧）的细胞液，向ＡＰ侧和ＢＬ侧分别加入０．５
和１．５ｍＬ　ＨＥＳＳ平衡盐溶液（ｐＨ　７．４），放入培养
箱中３０ｍｉｎ后取出，移去平衡盐溶液。向ＡＰ侧分
别加入０．５ｍＬ　ＣＹＥ和ＣＹＣＰＬ。同时，在ＢＬ侧加
入１．５ｍＬ的平衡盐溶液作为接受介质。给药后于
１、５、１５、３０、４５、６０、１２０、１８０和２４０ｍｉｎ在ＢＬ侧取
样０．５ｍＬ供 ＨＰＬＣ测定，之后及时补充等体积的
平衡盐溶液，转运指标为表观渗透系数（Ｐａｐｐ），公式
如下：Ｐａｐｐ＝ｄＱ／ｄｔ／（Ａ×Ｃ０），式中ｄＱ／ｄｔ为渗透
速率（μｇ／ｓ），Ｃ０ 为Ｃａｃｏ－２细胞ＡＰ侧初始质量浓度
（μｇ／ｍＬ），Ａ为Ｔｒａｎｓｗｅｌ的表面积（ｃｍ
２）。
２．８　ＣＹＥ和ＣＰＬ细胞毒性研究　ＣＹＥ和ＣＰＬ在
１０～３００μｇ／ｍＬ浓度范围内，对Ｃａｃｏ－２细胞无明显
细胞毒性，细胞存活率均＞９５％，见图６。
２．９　Ｃａｃｏ－２细胞的转运试验　取 ＣＹＥ 溶液和
ＣＹＣＰＬ分别加入Ｔｒａｎｓｗｅｌ 的 ＡＰ侧和ＢＬ侧，分
２２３ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷　
别测定ＡＰ－ＢＬ和ＢＬ－ＡＰ的（Ｐａｐｐ），结果ＣＹＣＰＬ的
（Ｐａｐｐ）与ＣＹＥ溶液对比增加了６倍，同时ＣＹＥ溶
液的主要转运机制为被动扩散，ＣＹＣＰＬ除被动扩
散以外，还具有一定主动扩散效果，见表１。
图６　ＣＹＥ和ＣＰＬ对Ｃａｃｏ－２细胞毒性影响
３　讨论
ＣＰＬ是一种类似生物膜结构的磷脂双分子层的球
型药物载体，由于其双分子层中形成２种不同相区域，
使双分子层分隔成多个不连续的区域，抑制了难溶性
药物的互相聚集，从而提高了药物在脂质体中的稳定
性，并同时存在相分离，这便导致了脂质体膜表面产生
区块结构，从而增加了膜通透性，使得ＣＹＥ可能更容
易通过ＣＰＬ膜进入内水相，提高了药物的载药量［１１］。
在当今中药药剂学领域，采用复合磷脂脂质体技术的
特点，解决中药中成分多而复杂且用量大等问题，尤其
对中药有效部位和提取物脂质体的制备具有更加深远
的意义。因此，本课题将ＳＩＨＥ制成复合磷脂脂质体，
拟开发新型纳米给药制剂，并且希望此技术得到更好
的改进，更加广泛地应用于医药领域。Ｃａｃｏ－２细胞的
结构和生化作用类似于人小肠上皮细胞，并含有与
刷状缘上皮细胞相关的酶系（碱性磷酸酶、蔗糖酶、
葡糖醛酸酶和磺基转移酶等）［１２］。在体外培养一定
时间后能够分化具有小肠微绒毛结构，被广泛应用
于药物吸收机制的研究［１３－１４］。
表１　各组药物的转运实验结果
样品名称 Ｐａｐｐ（ＡＰ－ＢＬ）／（ｃｍ／ｓ） Ｐａｐｐ（ＢＬ－ＡＰ）／（ｃｍ／ｓ） Ｐａｐｐ（ＡＰ－ＢＬ）／Ｐａｐｐ（ＢＬ－ＡＰ）
ＣＹＥ溶液 ８．５×１０－７　 ８．２×１０－７　 １．０４
ＣＹＣＰＬ　 ５．９×１０－６　 ３．３×１０－６　 １．７９
　　根据目前研究，药物的主要吸收机制有２种，一
种是存在于小肠肠壁上皮细胞细胞膜的 Ｎａ＋依赖
葡萄糖转运载体１可能参与药物的转运。而另一种
机制是存在于哺乳动物小肠绒毛边缘的乳糖酶－根
皮苷水解酶参与水解至少一部分药物［１５］。Ｓｉｎｇｈ
等［１６］报道，人体完全吸收的药物的Ｐａｐｐ＞１×１０－６；
吸收在１０％者Ｐａｐｐ介于１×１０－６与１×１０－７之间；吸
收１％者＜１×１０－７。本实验通过Ｃａｃｏ－２细胞转运
实验得出ＣＹＥ溶液的 ＡＰ－ＢＬ侧的Ｐａｐｐ为８．５×
１０－７　ｃｍ／ｓ，ＢＬ－ＡＰ侧的（Ｐａｐｐ）为８．２×１０－７　ｃｍ／ｓ，
表明ＣＹＥ的口服吸收较差，而Ｐａｐｐ（ＡＰ－ＢＬ）／Ｐａｐｐ
（ＢＬ－ＡＰ）为１．０４，表明ＣＹＥ溶液的主要转运机制
为被动扩散。同时，ＣＹＣＰＬ的Ｐａｐｐ（ＡＰ－ＢＬ）／Ｐａｐｐ
（ＢＬ－ＡＰ）为１．７９，比值＞１．５，表明除了被动扩散之
外，可能还存在载体媒介转运。在Ｃａｃｏ－２细胞单层
膜上，ＣＹＥ的透射率随吸收促进剂的能力而定，而
结果表明ＣＰＬ有利于促进ＣＹＥ经细胞旁路跨膜转
运。当用ＣＰＬ包裹ＣＹＥ之后，细胞间的跨膜电阻
明显下降，ＣＹＥ的跨膜转运增加（主要增加细胞旁
路的通透性），表明ＣＹＣＰＬ具有保护和促渗作用，
可促进ＣＹＥ的口服吸收。
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ｉｎｇ，ａｎｄ　ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＡＡＰＳ　Ｊ．２０１１，１３
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ｖｉｔｒｏ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｕｐｔａｋｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ
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（下转３２６页）
３２３　第３期 陈　蕾，等：复方一枝蒿复合磷脂脂质体的制备及其在Ｃａｃｏ－２细胞模型中的吸收特性研究
Ａ＞Ｂ，即超声温度＞提取时间＞乙醇浓度＞药液
比。超声温度和提取时间为主要影响因素，乙醇浓
度和药液比次之，最佳提取工艺为 Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ１，即体
积分数７０％的乙醇，药液比为１：４０，超声温度
４０℃，超声时间为３０ｍｉｎ，见表２、３。
表１　正交设计因素水平表
水平 Ａ：乙醇浓度／％ Ｂ：药液比 Ｃ：超声温度／℃ Ｄ：超声时间／ｍｉｎ
１　 ６０％ １：３０　 ３０　 ３０
２　 ７０％ １：４０　 ３５　 ４０
３　 ８０％ １：５０　 ４０　 ５０
表２　正交试验设计表及结果
试验序号
因素
Ａ　 Ｂ　 Ｃ　 Ｄ
多酚含量ｍｇ／ｇ
重复１ 重复２ 重复３ 平均含量
１　 １　 １　 １　 １　 ５．６３７　 ５．６４２　 ５．６５３　 ５．６４４
２　 １　 ２　 ２　 ２　 ５．５０２　 ５．４９９　 ５．４９９　 ５．５００
３　 １　 ３　 ３　 ３　 ８．２８６　 ８．２９４　 ８．２９３　 ８．２９１
４　 ２　 １　 ２　 ３　 ５．４７６　 ５．４６８　 ５．４６９　 ５．４７１
５　 ２　 ２　 ３　 １　 １０．９８５　 １１．１０２　 １１．０６９　 １１．０５２
６　 ２　 ３　 １　 ２　 ７．７０４　 ７．７１８　 ７．７２３　 ７．７１５
７　 ３　 １　 ３　 ２　 １０．２１２　 １０．２２０　 １０．２２２　 １０．２１８
８　 ３　 ２　 １　 ３　 ４．６０２　 ４．６１１　 ４．６１１　 ４．６０８
９　 ３　 ３　 ２　 １　 ６．７８８　 ６．７９２　 ６．８０５　 ６．７９５
Ｋ１　 ６．４７８　 ７．１１１　 ５．９８９　 ７．８３０
Ｋ２　 ８．０７９　 ７．０５３　 ５．９２２　 ７．８１１
Ｋ３　 ７．２０７　 ７．６００　 ９．８５４　 ６．１２３
Ｒ　 １．６０１　 ０．５４７　 ３．９３２　 １．７０７
表３　方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 Ｆ值 Ｆ临界值
Ａ　 ３．８５５　 ２　 ０．３８０　 ４．４６０
Ｂ　 ０．５４２　 ２　 ０．０５３　 ４．４６０
Ｃ　 ３０．３９８　 ２　 ２．９９８　 ４．４６０
Ｄ　 ４０．５６０　 ２　 ０．５６８　 ４．４６０
误差 ５．７６２　 ８
２．６．６　总多酚最佳工艺提取验证试验　为考察上
述工艺的稳定性，精密称取１ｇ药材，按照该工艺条件
Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ１ 进 行 重 复 性 试 验 ３ 次，平 均 含 量 为
１１．１６３ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．０４９％，说明该提取工艺稳定。
３　结论
本研究以乙醇浓度、药液比、提取温度和提取时
间为影响因素，并采用正交试验优化工艺。筛选出
对叶大戟中总多酚最佳提取工艺为 Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ１，即
体积分数７０％的乙醇，药液比为１：４０，超声温度
４５℃，超声时间为３０ｍｉｎ。对最佳提取工艺进行验
证试验，提取的对叶大戟中总多酚含量可达１１．１６３
ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．０４９％，实验结果表明Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ１ 提
取工艺简单、稳定性好，可为对叶大戟总多酚提取研
究提供理论依据。
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［收稿日期：２０１５－９－１０］
（本文编辑　施洋
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Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｌｅｔｔ．２０１４，２４：１９９－２０２．
［收稿日期：２０１５－１１－６］
（本文编辑　施洋）
６２３ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷