全 文 ：第 4卷第 2期
1 9 9 5年 6月
上 海 水 产 大 学 学 报
JO U R N A L O F SH A N G H A I F ISH E R IE S U N IV E R S IT Y
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A D V A N C E S O F B R E E D I N G W I T H S O M A T I C C E L L S
A N D C U L T I V A T IO N A T S E A I N P O R P H YR A YE Z O E N S I S
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(刀`户a rt m e n t of A , u a c u l t u。 , S F U , 20 0 0 9 0 )
1 IN T R O D U C T IO N
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w
e r e m a n y p a p e r s 〔方宗熙等 , 19 86 ,王素娟等 , 1 9 86 ; 卢澄清等 , 1 9 8 3 ; 赵焕登等 , 1 9 8 1 ;唐延林 ,
1 9 8 2 ; A
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,
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1 9 8 7 ; C h e n
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s e v e r a l r e p o r t s a b o u t b r e e d i n g e u l t iv a t io n i n t h e s e a [王素娟等 , 19 5 7 ; 赵焕登等 , 1 9 54 , 裁继勋等 , 295 5 ,
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u a n e t a l
. ,
1 9 9 2 ]
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n g w it h
e e l l s a n旦 a p p l y i n g i t o n e u l t iv a t iv e p r o d u e t i o n o f P o犷P灰尸 a i n t w o w a y s : o n e 15 im p r o v i n g t h e t e e h n o lo g y o f
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, a n d d e e r e a s i n g th e b r e e d i n g e o s t
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e r 15 m a k in g b a s i e r e s e a r e h t o s o lv e p r a e t ie a l p r o b l e m s o f b r e e d in g p r od
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u a n e t a l
. ,
1 9 9 2〕. I n r e e e n t t w o y e a r s , w e h a v e m a d e s o m e p r o g r e s s o f b r e e d i n g w i t h e e l ls . T h e s e
r e s e a r e h e s a r e r e p o r t e d in t h e p r e s e n t p a p e r
.
2 P R O G R E S S O F C E L L B R E E D I N G
In 1 9 8 8
,
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s u P r o v i n e e w a s 6 66M
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9 9 8 M
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s e a f i e l d w a s 5 4 5
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’ , a n d Z h o u s h a n s e a if e ld , Zh e j ia n g p r o v icn e w a s
1 9 95
es ( )2一 2 4 r e e e i v e d
.
2期 王素娟等 : 条斑紫菜体细胞育苗和下海养殖的进展 1 2 9
6 66M
2
.
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r e a s e a n d e x t e n s io n o f e e l l s e e d li n g e u l t iv a t io n a r e a a r e l is t e d i n F ig
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s r e s u l t e d f r o m im p r o v in g o f e e ll b r e e d i n g t e e h n o lo g y a n d l o e a l f is h m e n ’ 5 s u p p o r t t o t h e
m e t h od
.
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I T七e d肠t ir e t lo n a nd d e v e l o l, m . n t c ul ti v a t lo o ar . o f e e l l s e de i n g s I n P r o Phy r O ye z oe n s i s i n C h i n a ( M Z )
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a fi e ld d i s t ir e t o f e u lli v a t io n
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u n g g a gn H
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1 9 88
19 8 9
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19 9 0 9 9 9 6 6 6
1 9 9 1 2 6 6 4 6 6 6
1 9 92 1 9 9 8 6 6 6 1 99 8
1 99 3 1 2 7 8 7
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1 A r e a s o f c e ll s e e d li n g e u l t iv a t io n i n s e a fi e ld
1 3 0 上 海 水 产 大 学 学 报 4卷
, e : e n d : .
19 93
22 2M
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19 9 0 19 92
198一.
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L i a n y u n g
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H u a n g
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r e e id n g e x p e r im e n t l o e a t io n a n d e u l t iv a t i n g a r e a o f e e ll s e e d l in g s
3 D E V E L O P M E N T O F C E L L I SO L A T IO N R E S E A R C H
C e ll i s o l a t io n 15 a n im p o r t a n t k e y s t e p in b r e e d i n g w i t h e e l ls i n P o rP 灰厂 a . T h e t h a l li h e a l t h l e v e l a n d
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s o la t io n e o n d i t i o n s e f e e t d i r e e t l y e e ll is o la t i o n
.
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e a l t h y e e l ls h a s h i g h e r s u r v iv a l r a t i o a f t e r e u lt u r e
, a n d t h e
e o s t o f e e l l b r e e d w il l b e d e e r e a s e d
.
3
.
1 C o l l e e t i n g o f t h a l l i
W
e e a n 罗 t f r e e c e l l s fr o m t h a ll i w i t h e n z y m e m e t h o d . T a b . 2 s h o w s t h e e f e e t o f t h a l li e o ll e e t e d f r o m
d if f e r e n t lo e a l a n d t im e o n e e l l is o la t i o n
.
G e n e r a ll y
, t h e e e l l s i z e o f ” u n g t h a l li 15 s m a ll , a n d e e l l w a ll 15
t h in n e r
, 5 0 w
e e a n g e t m o r e e e l ls f r o m t h e m w i t h fe w e拙 y功 e s . A s fo r o ld t h a l li , t h e ir e e l l s i z e 15 b ig , a n d
e e l l w a l l 15 t h i e k e r
, a n d we
o n ly 尹 t a f ew e e l ls w i t h m o r e e脸 y m e s . F o r e x a m p le . w e e a n g e t 7 4 x 10` e e ll s
f r o m 1 9 y o u姐 t h a ll i , b u t o d y 25 x 1 0 . e e l l s f r o m o ld t h a l li . A n d w e e a n g e t d if fe r e n t q u a n t i t ie s o f is o l a t e d
e s ll s f r o m d i f fe r e n t lo e a l t h a l li
, s u e h a s we
e a n g e t 25 x 10 6 e e ll s f r o m 1 g t h a ll i o f H a if e n g s e a f ie l d a dn o n l y 1 9
x 1 0 6 e e l ls f r o m 2 9 L i a n g y u n g a n g s e a f ie l d
.
3
.
2 D r y i n g a n d f er
z i n g o f t h a l l i
T
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.
3
s h o w s d r如n g e x t e n t a dn f r e e z in g t e m p e r a t u r e h a s a g r e a t i n n u e n e e o n t h a l li h e a l t h . G e n e r a ll y , t h e
t h a ll i j
u s t e o l le e t e d m u s t b e d r ie d a n d t r a n s fe r r e d t o la b o r a t o r y w i t h lo w e r t e m p e r a t u r e a t o n e e
, a n d t h e y a r e
k e P t i n f r e e ez
r , u n l e s s t h e is o l a t e d e e ll s f r o m t h e t h a l li w i ll d i e o f f
.
3
.
3 R e e o v e r i n g o f t h a l l五
eB fo
r e e e l l is o la t io n
, t h e fr o z e n t h a ll i m u s t b e r e e o v e r e d v e r y w e ll f r o m 一 2 0℃ . G e n e r a l l y , w e s h o u l d
t a k e 4一 5 d a y s f o r r e e o v e r in g
.
T a b
.
4 s h o w s t h e r e s u l t s : t h e r a r i o o f s u r v i v a l e e ll s f r o m t h a ll i r e e o v e r e d fo r 4
一 5 d a y s 15 a bo
u t 8 2
一
90%
,
if t h e t h a ll i a r e o n l y r e e o v e r e d fo r 2 d a y s
, t h e m a n y e e ll s w o u l d d ie w h e n th e y w e r e
e u l t u r e d f o r 3一 6 d a y s
.
2期 王素娟等 : 条斑紫菜体细胞育苗和下海养殖的进展 1 3 1
T a b
.
2 T h e e f f e e t o f d i f f e r e n t t im e a n d lo e a le o f th a l l i e o lle e t in g o n e e l l i s o la t io n in P
.
y e z o e n s i s
D a t e o f e o lle e t io n T im e o f e o l l e e t io n L o e a le o f e o l le e t io n
T h a l l i w e ig h t
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( X 10 8 )
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( X 10 5 )
1 9 9 2
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1 9 9 1
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1 0
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0 2
M e么 n
1 9 9 2
.
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.
2 3
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.
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1 7
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5
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0 3
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19 9 2
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1 2
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1 9 9 3
。
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。
13
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。
1 9
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19
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。
2 1
9
.
2 2
9
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2 4
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9
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2 5
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1 9 92
.
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1 9 9 3
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0
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0
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2
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.
3 0
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.
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.
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4 1 7 6 0
5
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0 1 6
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1
.
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6 0
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0 2 5
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3
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.
0 0
1
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5 2 1
.
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2
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0 0
4
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0 0
3 8 3 8
.
00
2
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3 1 1 9
.
00
1 2
.
6 6 8
.
0 0
1 6
.
72 2 1
.
70
14
.
1 4 8
.
6 0
13
.
0 4 2 0 0
2 1
.
0 4 2 0 0
17
.
5 3 2 8
.
70
2 1
.
2 4 6
.
0 0
10
.
3 8 2 2
.
5 0
1 7
.
0 7 3 9
.
0 0
1 3 2 上 海 水 产 大 学 学 报 4卷
T a b
.
3 E f f e e t o f d i f f
e r e n t t r e a t m e n st t o t h a l l i o n th e s u r v i v a l o f c e l l s
L o e a l e o f
e o l l e e t i o n
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F r e e z in g d a t e
F r e e z i n g t e m P
·
S t a t e o f r e e o v e r y s u r v lv a l o f e e l l s
H a i f e n g
n o t e n o u g h
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n o t d r i e d
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r e p e a t f r e e z in g
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. , 9 0一 A u g . , o e t .
A p r
. ,
9 0一 S e p . , o e t .
A P r
. ,
9 2一 J u n ·
A P r
. ,
9 2一 S e p ·
A P r
. ,
9 2一 J u m ·
A P r
. ,
9 2一 S e P .
A P r
. ,
9 2一 eS P .
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e
. ,
9 0一 eS P . , 9 2
(℃ )
3一 4
一 2 0
一 2 0
一 2 0
一 2 0
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一 2 0
一 2 0
一 2 0
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n o r m a l
L i a n y u n g a n g
d e e a y in g
n o r m a l
n o r m a l
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S U r V
-
S U r V
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n o S U r V
-
H u a n g a n g
H a i f e n g
n o S U r V
-
s u r y
.
r a t io 8 2一 9 5%
T a b
.
4 E f f e e t o f d i f f e r e n t r e e o v e r y t im e o n r a t i o o f s u r v i v ia e e l ls
D a t e o f
e o l le e t i o n
L o e a l e o f
e o l l e e t i o n
D a t e o f
r e c o v e r y
T inr e o f
r e c o v e r y
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( x l 0 4 /m l )
S u r v i v a l r a t i o
( % )
9 0
.
6
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.
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.
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.
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6
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.
0
9 6 0
90
.
0
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. , 4 , 1 9 9 2
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. ,
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,
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,
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.
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s o la t io n b e t w e e n s i n g l e e n z y m e a n d s e v e r a l e n z y m e s
.
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3 X 1 0 , e e ll s p e r 1 9 e n z y m e w it h s e a s n a il e n z y m e
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.
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.
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2期 王素娟等 : 条斑紫菜体细胞育苗和下海养殖的进展 1 3 3
E n
z y m e s o l u t i o n e a n b e u s e d f o r s e v e r a l t im e s 5 0 a s t o d e c r e a s e t h e b r e e d i n g e o s t
.
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.
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e n e n z y m e
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e n z y m e s o lu t io n w il l d e e r e a s e
.
G e n e r a l l y o n e b a t e h o f e n z y m e e a n b e u s e d f o r 6一 8 t im e s
.
I n t h i
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.
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.
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,
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,
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C U L T U R E M E T H O D O F S O M A T IC C E L L S
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.
1 C u l t u r e m e t h o d
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p r o g r e s s
.
W
e e a l le d t h e n e w m e t h o d a s s im p le
, e a s y a n d h i g h e f f ie ie n e y e u l t u r e m e t h o d ( s e e N o
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.
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r o o m a n d p r o v id e m u e h m o r e e e l ls f o r b r e e d in g p r o d u e t o n
.
T a b
.
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1
2
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.
2 C u l t u r e w i t h m a g n e t i e s t i r r e r ; N o
.
3
:
C u l t u r e w i t h s h a k e r ; N o
.
4
:
C u l t u r e in ja r w i t h a r e a t i o n
N o
.
5
:
C u l t u r e in a q u a r iu m w i th e le e t r i e s t i r r e r a n d a e r a t io n ; N o
.
6A
:
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le f t r e a e t o r ; N o
.
6 B
:
A r e a t i o n i n e u b a t o r
.
4
.
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2 e u l t iv a t iv e a r e a s w it h o n ly 6
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.
I n 1 9 9 3
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e p r o v id e d 1 2 b i ll io n e e l l s fo r 1 2
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v a t io n a r e a s in t h e s a m e
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.
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, t h
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v a t io n a r e a s i
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d 2 t im e s
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Z r o o m e a n p r o v id e d e e l l s f o r a b o u t 6 6
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t r a d i t io n
a l b r e e d i n g m e t h o d ( T a b
.
7 )
.
F r o m a b o v e
,
w
e t h i n k t h e n e w m e t h o d t a k e s m u e h l e s s t im e a n d
p r o v id e s m u e h m o r e s e e d l in g s t h a n t r a d i t io n a l b r e e d i n g m e t h o d
.
A
n d i t 15 a l s o b e n e f ie i a l t o i n d u s t r ia li z a t i o n o f
b r e e d i n g w i t h e e ll s
.
4
.
3 C e l l d e n s i t y a n d o t h e r c o n d i t i o n s o f e e l l e u l t u r e
F
r o m T a b
.
8
, th e s u it a b le e e l l d e n s i t y f o r e u l t u r e 15 1 0 5 e e ll s /m l
.
O t h e r e u l t u r e e o n d i t i o n s i n e l u d i n g l ig h t
i n t e n s i t y
, t e m P e r a t u r e a n d m e d ia a r e t h e s a m e a s P r e v io u s r e P o r t s
.
1 3 4 上 海 水 产 大 学 学 报 4卷
T a b
.
7 B r e e d i n g w i t h e e l l i n P
. 押 z oe n s i s i n 1 9 9 2 , 1 9 9 3
Y e s r C
u l t u r e m e t h o d
T a k in g a er a o f
e u l t u r e r (M Z )
C u l t u r e t im e
( d a y )
T o t a l e e ll s
( X 10 9 )
N u m b e r o f
s e e d in g n e t s
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e d l i n g e
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l t iv a t io n
a r e a (M Z )
1 9 9 2 N
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0
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3一 6 1 2 . 0 5 0 5 1 3 3 3 3
T a b
.
8 C e ll s u r
v i v 目 r a t i o a o d d i v is i o n ar t i o i n e u l t u r e iw t h d i f fe r e n t c e l l d e ns i t y ( % )
C u l t u r e t zm e
(d a y s )
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e n s i t y ( C
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I X 1 0 s 2 火 1 0 5 3 X 1 0 5
s u r v i v a l d i v i s i o n s u r v i v a l d i v i s i o n s u r v i v a l d i
v i s i o n
左孟丹了诀é8厅沙10óJA
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5
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一.35
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5 S E E D IN G T IM E A N D D E N S I T Y
T h e e e l ls f r o m s u s P e n s io n e u l t u r e a r e t r a n s P o r t e d t o s e a f i e ld w i t h lo w t e m P e r a t u r e
.
F r o m 1 9 9 2 t o 1 9 9 3
,
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e h e v e e v e r
a n d Zh o u s h a n
m a d e t h e e e l l b r e e d i n g p r o d u e t i o n a t H a i f e n g s e a f ie l d
,
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u a n g a n g s e a f ie l d
,
L ia n g y u n g a n g s e a f ie l d
s e a f ie l d ( s e e T a b
.
9 )
.
T a b
.
9 eS
e d i n g w i t h d l f fe r e n t e e l l d e ns i t y an d g r o w th o f s e e d i n g s e
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2 7
.
9 2
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( X 10 8 )
C e l l e u l t u r e
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C o u n t in g a f t e r e u l t u r e f o r 3 3 d a y s ; 势 . C o u n t in g a f t e r e u l t u r e fo r 6 0 d a y s
.
T a b
.
1 0 H a r
v e s t o f t h al li f or . c e ll s e e d l i n g s e
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D r y w e i g h t o f
t h a lli ( k g )
8
。
0 8
.
4 13
。
0 1 7
.
0 1 0
.
0 7
.
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2期 王素娟等 : 条斑紫菜体细胞育苗和下海养殖的进展 13 5
T . b
.
1 1 E f f ec t o f e e ll t r na s po r t i
o n w i th lo w t em Pe ar t
u r e o n s e d l in g g e r m in a t io n a n d g
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】》 s t ina t io n T ar
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e d in g d e n s i t y 压 n s i ly o f
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(℃ ) 扣u r ne y ( h ) t r a n s p o r t e d e e ll( X 1 0 8 )
N u m b e r o f
s e e d in g n e t s s e e d l in g s
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1几O心0ǐ 1月`1盖d内」H ua ng a ng l 2
L ia n y u ng
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Co
u n t i飞 a f t e r e u l t u er of r tw o m o n th s
5
.
1 Se e d i n g m e t h o d
Se
e d in g m e th o d 15 th e e e ll im m o b i liz a t io n m e t h o d〔王紊娟等 , 1 9 9 2〕.
5
.
2 S e d i n g t im e
T h
e s e e
d in g t im e 15 d e e i d e d b y s e a f i e ld t e m p e r a t u r e a n d t h e e e l ls e a n n o t e n d u r e h ig h e r t e m p e r a t u r e
.
o n l y w h e n t h e t e m p e r a t u r e o f s e a fi e ld d e s e e n d s t o b e l o w 2 0 ,C
,
w
e e a n p u t t h e s e e d li n g n e t s i n t o s e a f ie l d t o
e u l t iv a t e
.
In 19 9 2
, t h e t e m p e r a t u r e o f s e e d in g a t H u a n g a n g s e a f ie l d a n d L ia n g y u n g a n g s e a f i e ld w a s s u i t a b le a t t h a t
t im e
, 5 0 t h e e e ll s e e d i n g s g r e w v e r y w e ll ( s e e P l a t e l一 2 , 3 , 4 ) . B u t i n 1 9 9 3 , f o r t h e t e m p e r a t u r e o f s e a 15
o v e r 2 2 ,C
, r
o m
t e m p e r a t u e r o v e r 2 4 ℃ , t h e e e ll s d ie d a n d f e w e e ll s e e d i n g g r e w o u t .
5
.
3 C e l l d e n s i t y o f s e e d i n g
F
r o m e e ll s e e d in g g r o w t h e o dn it i
o n s o f H u a n g a n g s e a f ie ld a n d L ia n y u n g a n g s e a fi e l d
,
w
e t h in k t h e d e n s i t y
o f 1
.
5 一 3 x 1 0 7 e e l ls / n e t 15 a v a i l a b l e , a n d e e l l s e e d i n g d e n s i t y a n d P o rP 灰厂 a y i e ld e a n m e e t t h e d e m a n d o f
P o rP :h厂 a e u lt i v a t i v e p r o d u e t i o n . eB e a u s e o f b a d m a n a g e m e n t , t h e e e l l s e e d l in g s a t H a i f e n g s e a f i e ld g r e w v e r y
b a d
.
5
.
4 C e l l s e e d l i n g g r o w t h a n d y五e l d
W
e h a v e h a r v e s t e d t h e e u lt iv a t e d P o rP h夕 r a f r o m e e l l s e e d in g s a t H u a n g a n g s e a f i e ld i n 1 9 9 2 一 1 9 9 3·
W h e n e e l l
s e e d li n g s g r e w f o r a b o u t t w o m o n t h s
,
w e e a n h a r v e s t t h e t h a l li
.
T a b
.
10
s h o w s t h e y i e ld
.
T h e
h a r v e s t d a t e 15 f r o m 块 e . , 8 , 1 9 9 2 t o A p r . , 1 0 , 1 9 9 3 . T h e t o t a l d r y w e ig h t o f P o r p h y r a w a s 1 9 5 K g , t h e 外e l d
w
a s
6 5 K g / 6 6 6
.
6M
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6 C E L L T R A N S P O R T A T IO N W I T H L O W T E M P E R A T U R E
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1 3 6 上 海 水 产 大 学 学 报 4卷
e s t a b l is h w h o le t e c h n o lo g y o f b r e e d in g w it h e e lls 15 p o s s ib le
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参 考 文 献
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[ 4 〕
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[ 6 二
[ 7 〕
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[ 9 」
〔1 0〕
〔1 1」
〔1 2〕
[ 1 3〕
仁1 4 ]
方宗熙等 , 1 9 8 6 。紫菜细胞的酶法分离和在水产养殖中的应用 。海洋科学 , 10 (3 ) ; 46 一 47 。
王素娟等 , 1 9 8 6 。坛紫菜营养细胞和原生质体培养的研究 1. 海洋与湖沼 , 1 , ( 3 ) : 2 17 一 221 。
— , 1 9 8 7 。 坛紫菜营养细胞和原生质体培养研究 1 . 直接育苗下海养殖的实验研究 。海洋科学 , ( 1 ) : 1一王素娟等 , 19 92 。条斑紫菜体细胞固相采苗技术的应用 。水产学报 , 16( 3) : 2 “ 一 2 6 8 。
卢澄清等 , 1 9 8 3 。紫菜叶状体营养细胞的分离 ,培养和长成小紫菜的观察 . 1 9 7 9年第一届 中国藻类学术讨论会论文
集 , 4 5一 4 9 。
何培民等 , 1 9 9 2 。 紫菜细胞悬浮培养 . 海洋科学 , 83 ( 5 ) : 2 1一 2 4 。
赵焕登等 , 1 9 81 。条斑紫菜体细胞分离和培养 . 山东海洋学院学报 , 1 1 ( 4) : 61 一 “ 。
— , 1 9 8 4 。条斑紫莱营养细胞的分离与培养试验 。水产学报 , 8( 3) : 19 7一 201 。唐延林 , 1 9 8 2 。紫菜营养细胞和原生质体的分离和培养 . 山东海洋学院学报 , 1 2 : 3 7一 50 。
戴继勋等 , 1 9 8 8 。紫菜叶状体细胞的酶法分离及其养殖研究 。 生物工程学报 , 4( 2 ) : 13 3一 1 3 7 。
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C一 M . , 1 98 6 . C e ll d e v e lo pm e n t o f P O rP :h厂 a m i n ia t a ( R h o d o p h y e e a e ) u n d e r a x e n i e e u l t u r e . B o t . 材口 r . ,
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: 4 3 5一 4 3 9 .
— . 1 9 8 7 . P r o t o p la s t m o r p h o g e n e s i s o f P O r P h厂 a l日u c os t ict a in e u l t u r e . B ot . 材 d r . , 30 : 3 9 9一 4 0 3 .— , 1 98 9 . C e l l s u s p e n s i o n e u l t u r e f r o m P o rP 为〕心a l i n ae 二 ( R h o d o p h y t a ) a m u l t i e e l l u l o r m a r i n e r e d a lg a . J .月户户1 . P h夕c o l . , ( 1 ) , 1 5 3一 1 5 9 .
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1 3 8 上 海 水 产 大 学 学 报 4卷
条斑紫菜体细胞育苗和下海养殖的进展
王素娟 何培民 周一红
(上海水产大学养殖系 , 2 0。。 90)
提 要 关于紫菜体细胞分离和培养的研究文章有多篇报道 , 但用以进行生产性育苗和下
海养殖的报道则甚少 。本文主要报道作者 自1 98 8一 1 9 9 3年期间用条斑紫菜 (尸。动和厂口 ye z oe o i : )体
细胞所进行育苗和养殖的研究总结 。工作概括为两主要方面 ,一是改进育苗技术 、 降低育苗成本并
简化育苗工序以扩大养殖面积 ,二是为进行实际育苗生产上的问题而进行的一些基础研究 ,重点
介绍近两年 ( 1 9 9 1一 1 9 93) 的研究进展 .
关扭词 细胞育苗 ,细胞分离 ,细胞培养 ,附苗 ,海上养殖 ,条斑紫菜
K E Y w 0 R D S b
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