全 文 ：书杨叶木姜子茎皮提取物抗菌作用研究
陈幼竹１，徐正莉２
（１．广东药学院，广东 广州５１０００６；２．南方医科大学，广东 广州５１００００）
摘　要：目的：探讨杨叶木姜子茎皮提取物的抗菌作用。方法：观察杨叶木姜子茎皮提取物对金黄色葡
萄球菌等９种细菌的体外抗菌作用及对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌感染小鼠的保护作用。结果：该提
取物对９种细菌具有抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌感染小鼠具有保护作用。结论：杨叶木
姜子茎皮提取物具有显著的抗菌作用，值得开发利用。
关键词：杨叶木姜子；茎皮提取物；抗菌作用
中图分类号：Ｒ２８５．５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１３）０２－００２８－０２
收稿日期：２０１２－１１－１３
作者简介：陈幼竹（１９７２－），女，广东药学院讲师，研究方向为中药资源开发 。
　　杨叶木姜子Ｌｉｔｓｅａ　ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａ（Ｈｅｍｓｌ．）Ｇａｍｂｌｅ为樟
科木姜子属植物，主要分布于四川、云南、贵州等地，属常见
树种。杨叶木姜子树皮俗称老鸦皮（ＬＹＰ），《全国中草药汇
编》记载［１］，ＬＹＰ在西南地区民间用于健脾除湿，可治疗消
化不良、肠炎等。笔者曾在对木姜子属植物药用资源调查
及初步的活性筛选中发现，杨叶木姜子茎叶提取物具有显
著的抑菌作用，对多种细菌、真菌均有广谱抗菌作用［２］。为
进一步探讨其抗菌药用资源，本文以杨叶木姜子茎皮ＬＹＰ
提取物为研究对象，考察其对９种常见致病菌的体内外抗
菌作用，具体报道如下。
１　材料
１．１　药品与试剂
ＬＹＰ药材（采于四川眉山，经成都中医药大学万德光教
授鉴定为樟科木姜子属 Ｌｉｔｓｅａ植物杨叶木姜子（Ｌｉｔｓｅａ
ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａ（Ｈｅｍｓｌ．）Ｇａｍｂｌｅ）的茎皮），牛肉膏（北京奥博
生物技术有限公司）；蛋白胨（北京奥博生物技术有限公
司）；琼脂（北京奥博生物技术有限公司）；ＮａＣｌ（西安化学
试剂厂）；ＮａＯＨ（西安化学试剂厂）；盐酸小檗碱（四川美大
康药业有限公司，批号：０２０１０５）；胃膜素（西安方兴制药有
限公司，批号：０５１００１３０１０）。
１．２　实验动物
ＳＰＦ级健康ＩＣＲ小鼠，体质量（２０±２）ｇ（广州中医药大
学实验动物中心，动物质量合格证号：０１４７５６）。
１．３　菌种
金黄色葡萄球菌（Ｓ．ａｕｒｅａｓ）、白色葡萄球菌（Ｓ．ａｌ－
ｂｕｓ）、甲型副伤寒沙门菌（Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉＡ）、乙型副伤寒沙门
菌（Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ　Ｂ）、伤寒沙门菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）、铜绿假单胞菌
（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、乙型溶血性链球菌（β－ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ　ｓｔｒｅｐｔｏ－
ｃｏｃｃｕｓ）、痢疾志贺菌（Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、大肠埃希菌（Ｅ．ｃｏ－
ｌｉ），以上菌种均由广东省微生物研究所提供。
１．４　仪器设备
ＦＡ１００４电子天平（上海天平厂）；多功能渗漉提取器
（常州市新祥天然产物分离设备有限公司）；ＡＶ－３０７０超净
工作台（ＴＥＬＳＴＡＲ）；ＹＸＱ－ＬＳ－５０ＳＩＩ型压力蒸汽灭菌器（上
海博讯实业有限公司医疗设备厂）；电热恒温培养箱（上海
益恒实验仪器有限公司ＤＨＰ－９２７２型）。
２　方法与结果
２．１　ＬＹＰ提取物制备
取４０ｋｇ干燥杨叶木姜子茎皮原药材，粉碎，浸泡于
８０％乙醇中，６５℃渗漉提取，先后使用８０％乙醇２００Ｌ，提取
结束后薄膜蒸发，干燥。试验前加入适量蒸馏水稀释，振荡
混匀，使每１ｍＬ含生药１ｇ。
２．２　ＬＹＰ提取物的体外抑菌作用
２．２．１　培养基的制备　取蒸馏水１　０００ｍＬ，加入牛肉膏
３．０ｇ，蛋白胨１０．０ｇ，ＮａＣｌ　５．０ｇ。待其完全溶于水中后，测
定ｐＨ，再用１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ 溶液调节ｐＨ 至７．１～７．５，分
装，１０３．４３ｋＰａ、１２１℃灭菌２０ｍｉｎ，备用。
２．２．２　菌悬液的制备　供试菌种经传代纯培养后，以接
种环菌接种于牛肉膏培养基中，３７℃恒温培养２４ｈ；再另取
一接种环菌接种于牛肉汤中，恒温培养２４ｈ，用肉汤连续稀
释法，稀释浓度至１０７，再取各浓度菌悬液１００μＬ于牛肉膏
培养基中，３７℃恒温培养２４ｈ，观察细菌生长情况。在浓度
为１０７ 时，菌落清晰便于观察，将１０７ 的菌悬液作为试验用
浓度。
２．２．３　试管连续稀释法　①稀释药液。取ＬＹＰ药液分
别以普通肉汤倍比稀释成１∶２，１∶４，１∶８，１∶１６，１∶３２，
１∶６４，１∶１２８共７个浓度，即所含药物浓度分别为５００、
２５０、１２５、６２、３１、１６、８ｍｇ／ｍＬ。每个浓度设３个平行管，并
分别设最低浓度药物肉汤培养液为阳性空白对照管（不添
加菌液），不添加药物肉汤培养液为阴性空白对照管。
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书②加入菌液。每支试管分别加入备用的试验菌悬液
５０μＬ（除阳性对照管外），并充分混匀，置３７℃温箱培养２４ｈ。
③最低抑菌浓度（ＭＩＣ）的测定。观察对照管中微生物
生长情况，当阴性对照管中细菌呈沉淀状生长，而阳性对照
管中无细菌生长时，再观察其他试管的浑浊情况。以肉眼
未见菌落生长的最高药物稀释浓度为该药物对该种细菌的
ＭＩＣ。
２．３　ＬＹＰ提取物的体内抗菌作用
２．３．１　对大肠埃希菌感染小鼠的保护作用　①采用标
准接种环将大肠埃希菌按密涂法接种于营养肉汤琼脂平板
上，置３７℃培养１８ｈ。取出，每板用５％胃膜素 ＮａＣｌ溶液
（９．０ｍｇ／ｍＬ）６ｍＬ 将琼脂平板上的细菌混匀后，加入
４ｍＬＮａＣｌ溶液（９．０ｍｇ／ｍＬ）制成原菌液。分别用无菌ＮａＣｌ
溶液（９．０ｍｇ／ｍＬ）稀释成０．４０，０．３５，０．３０，０．２５，０．２０ｍＬ／
ｍＬ的不同菌液量的菌液备用。
②取ＩＣＲ小鼠５０只，雌雄各半，分５组，每组１种浓
度，腹腔注射大肠埃希菌菌液０．５ｍＬ／只，观察染菌后２ｄ内
动物的死亡率，并选取感染死亡率为８０％～１００％的稀释菌
液作为正式实验用感染菌液浓度。预实验结果：０．４０，
０．３５，０．３０，０．２５，０．２０ｍＬ／ｍＬ菌液感染小鼠后的死亡率分
别为 １００％，１００％，９０％，９０％ ，６０％。故实验选用 ０．
２５ｍＬ／ｍＬ菌液浓度。
③取ＩＣＲ小鼠１１４只，雌雄各半，分为６组，每组１９
只，即空白对照组、模型组、盐酸小檗碱组、ＬＹＰ各剂量组
（低、中、高）分别含生药３．０，６．０，１２ｇ／ｋｇ。以上各组小鼠按
２０ｍＬ／（ｋｇ·ｄ）灌胃给药１次，连续给药５ｄ。待第３天给药
１ｈ后各组均腹腔注射大肠杆菌培养液０．５ｍＬ／鼠（除空白
对照组外），菌液浓度（０．２５ｍＬ／ｍＬ），继续给药２ｄ。观察
记录各组动物７ｄ内死亡情况。
２．３．２　对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用　方法
同“２．３．１”项，将大肠埃希菌替换为金黄色葡萄球菌。预试
结果：０．５０，０．４５，０．４０，０．３５，０．３０ｍＬ／ｍＬ菌液感染小鼠后
的死亡率分别为：９０％，９０％，８０％，６０％，３０％，故确定菌液
浓度０．４５ｍＬ／ｍＬ为本次动物保护实验用菌液浓度。
２．４　统计学方法
计量资料以（珚ｘ±ｓ）表示，组间比较采用ｔ检验；计数资
料采用χ
２检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２．５　结果
２．５．１　最低抑菌浓度（ＭＩＣ）测定结果　ＬＹＰ提取物对
金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿
假单胞菌、乙型溶血性链球菌 、痢疾志贺菌、大肠埃希菌均
具有不同程度的抑菌作用，ＭＩＣ在８～３１ｍｇ／ｍＬ之间，其
中，对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、
大肠埃希菌有较强的抑制作用。见表１。
２．５．２　对大肠埃希菌感染小鼠的保护作用　ＬＹＰ提取
物６ｇ／ｋｇ和１２ｇ／ｋｇ剂量组对大肠埃希菌感染小鼠可提高
其存活率；与模型组比较具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。因
此，ＬＹＰ提取物对大肠埃希菌感染小鼠具有明显的保护作
用。见表２。
２．５．３　对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用　ＬＹＰ
提取物１２ｇ／ｋｇ剂量组对金黄色葡萄球菌感染小鼠可提高
其存活率，与模型组比较具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。因
此，ＬＹＰ提取物对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有一定的保
护作用。见表３。
表１　ＬＹＰ提取物体外抗菌实验结果
菌株 ＭＩＣ（ｍｇ／ｍＬ）
金黄色葡萄球菌 １６
白色葡萄球菌 ３１
甲型副伤寒沙门菌 ６２
乙型副伤寒沙门菌 ３１
伤寒沙门菌 １２５
痢疾志贺菌 ３１
大肠埃希菌 １６
铜绿假单胞菌 ８
乙型溶血性链球菌 １６
表２　ＬＹＰ提取物对大肠埃希菌感染小鼠
的保护作用实验结果
组别
动物数
（只）
剂量
（ｇ／ｋｇ）
存活数
（只）
存活率
（％）
Ｐ值
正常对照组 １９ － ０　 １００．０
模型对照组 １９ － ５　 ２６．３
盐酸小檗碱组 １９　 ２．０　 １３　 ６８．４＊ ＜０．０５
ＬＹＰ低剂量组 １９　 ３．０　 １０　 ５２．６ ＞０．０５
ＬＹＰ中剂量组 １９　 ６．０　 １２　 ６３．２＊ ＜０．０５
ＬＹＰ高剂量组 １９　 １２　 １３　 ６８．４＊ ＜０．０５
注：＊与模型对照组比较，Ｐ＜０．０５。
表３　ＬＹＰ提取物对金黄色葡萄球菌感染小鼠
的保护作用实验结果
组别
动物数
（只）
剂量
（ｇ／ｋｇ）
存活数
（只）
存活率
（％）
Ｐ值
正常对照组 １９ － ０　 １００．０
模型对照组 １９ － ３　 １５．８
盐酸小檗碱组 １９　 ２．０　 ８　 ４２．１ ＜０．０５
ＬＹＰ低剂量组 １９　 ３．０　 ６　 ３１．６ ＞０．０５
ＬＹＰ中剂量组 １９　 ６．０　 ８　 ３６．８ ＜０．０５
ＬＹＰ高剂量组 １９　 １２　 ９　 ４７．４＊ ＜０．０５
注：＊与模型对照组比较，Ｐ＜０．０５。
３　讨论
本实验结果显示了ＬＹＰ较好的抗肠道感染菌作用，尤
其高剂量组具有很强的抗菌作用，效果略优于盐酸小檗碱，
这一结果从理论上进一步证实了民间用ＬＹＰ治疗肠炎的
传统经验。我们在前期的植化实验中从ＬＹＰ茎叶提取到
的主要成分为生物碱类及挥发油，本次实验的提取物也包
含以上两类成分。因此，若针对生物碱和挥发油做进一步
的成分分离和活性追踪，有希望获得抗菌活性更强的天然
抑菌剂。
参考文献：
［１］　全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编（上册）［Ｍ］．北京：
人民卫生出版社，１９８３：８６．
［２］　陈幼竹．木姜子属主要药用品种的品质研究［Ｄ］．成都：成都
中医药大学，２００４．
［３］　陈奇，卞如濂，陈修．中药药理研究方法学［Ｍ］．第２版．北
京：人民卫生出版社，２００６：２７４－２７６．
（责任编辑：宋勇刚）
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