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马齿苋子中多糖的提取分离及抑菌活性研究



全 文 :食品研究与开发2009 年 7 月第 30 卷第 7 期
方差来源
Source
A
B
C
D
误差 Error
总和 Total
平方和
SS
54.5
19.3
39.9
25.1
5.4
144.1
自由度
DF
2
2
2
2
18
均方
MS
27.3
4.7
20
12.6
0.3
F
90.8***
15.7***
66.6***
42***
临界值
F0.01=6.01
F0.05=3.5
F0.1=2.62
表 3 方差分析表
Table 3 Analysis of variance
度为 5 ℃, 保存时间为 48 h 进行的正交试验 ,最
终得到的最佳组合为 :A2B3C3D2 即 pH3.6、Ca2+ 浓度
50 mgCa2+/g ALMP、30 %蔗糖、1.4 %ALMP。 方差分析
见表 3。
由方差分析表 3 可见,ALMP 浓度、蔗糖浓度、pH
值、Ca2+浓度四因素对 ALMP 取得其最佳胶凝条件都
有显著影响。
3 结论
以 pH 值、ALMP 浓度、蔗糖浓度、Ca2+浓度四因素
为因素,以去离子水配制溶液,保存温度 5 ℃、保存时
间 48 h 进行正交试验得到的最佳胶凝条件为:pH 值
3.6、ALMP 浓度 1.4 % 、 蔗糖浓度 30 % 、Ca2+浓度
50 mgCa2+/gALMP。 这与单因素试验得到的结果有所差
别,在考虑试验本身存在的误差外应该指出其因素之
间存在着相互的影响。 而它们之间具体的影响还有待
于进一步的研究。
此次试验可看出,ALMP 克服了传统高酯果胶高
蔗糖浓度才能凝胶的缺陷, 并且其对于 Ca2+浓度的要
求也较宽泛。 因此论 ALMP的最佳胶凝条件对果胶在
食品工业的应用有较高的探索意义。
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收稿日期:2008-02-23
库尔班·吾斯曼 1,穆赫塔尔·伊米尔艾山 2,帕提古丽·伊米尔艾山 3
(1.喀什师范学院 生命与环境科学系,新疆 喀什 844007;2.新疆大学 化学与化工学院,新疆 乌鲁木齐 830046;
3.新疆财经大学 教务处教务科,新疆 乌鲁木齐 830012)
马齿苋子中多糖的提取分离及抑菌活性研究
摘 要:采用苯酚-硫酸法,以葡萄糖作为标准品,分光光度计于 490 nm波长处测定其吸收度,对马齿苋子中多糖进
行提取和含量分析并作抑菌活性试验。结果表明:多糖的线性范围为 0.010 g/L~0.080 g/L, A=0.012 7C-0.003 2,
r=0.999 0,平均加样回收率为 98.01 %,RSD=1.42 %。多糖的提取率可达 8.94 %。抑菌活性试验结果表明,马齿
苋子多糖除绿脓杆菌外其它三种对病菌有明显抑菌作用。
关键词:马齿苋子;多糖测定;抑菌活性
EXTRACTION AND BACTERIOSTATIC ACTIVITIES OF POLYSACCHARIDE IN SEED OF
PORTULACA OLERACEA L.
Kurban·Osman1, Mukhtar·Imerhasan2, Pategul·Imerhasan3
(1. Department of Life and Environmental Science , Kashgar Teachers College , Kashgar 844007, Xinjiang, China;
作者简介: 库尔班·吾斯曼(1965—),男(维吾尔),教授,硕士,研究生导师,主要从事有机合成及天然产物的研究。
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科学研究
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食品研究与开发 2009 年 7 月第 30 卷第 7 期
马齿苋子 (Portulaca oleracea L.)系马齿苋科马齿
苋属植物马齿苋的种子 (维吾尔医常用名称为
Semizotwulagai)[1],秋、夏两季果实成熟时采收全株,晒
干,抖动后收集落下的种子,除去杂质。 马齿苋种子中
含有生物碱、脂肪油、糖类及淀粉。 药理研究发现,能降
低胆液质偏盛,生津,利尿,消炎。 用于肝、胃疾病、脑膜
炎、子宫炎、发烧、各种头痛、尿道涩痛等。 现代药理研
究表明有降血糖、抗衰老、提高机体免疫功能的作用[2]。
近几年来, 对马齿苋有效成分分析、 总黄酮、多
糖、抗菌、抗肿瘤等研究报道较多 [3-6],而对马齿苋子总
黄酮、多糖等其他成分的研究报道以及对多糖的抑菌
活性研究相对较少。 本文选用有机溶剂浸提方法提取
马齿苋子多糖并进行抑菌试验,旨在对马齿苋子不同
成分的抑菌活性作探讨,为能开发出一种天然的食品
抑菌剂提供一些重要的参考数据。
1 仪器与药品
1.1 仪器
UV-752 型分光光度计: 上海第三分析仪器厂;
RE-52A型旋转蒸发器:上海亚荣生化仪器厂;CS101-
3D电热鼓风干燥箱: 重庆试验设备厂;4504MP-微量
电子天平:梅特勒公司;CS-122精密恒温箱:重庆试验
设备厂。
1.2 药品
葡萄糖:AR,105℃干燥恒重, 所用其它试剂均为
分析纯; 中药马齿苋子购于新疆喀什地区药材公司,
由喀什地区维吾尔医院医师阿布里克木老师鉴定,并
按照 2000年药典进行鉴定,符合标准。 将马齿苋子于
烘箱中 50 ℃烘干至恒重,粉碎过筛,密封备用,试验前
于硅胶干燥器中干燥 2 d。 MH 肉汤,肉汤培养基,普通
琼脂平板培养基。 抗菌活性实验所用标准菌株冻干品
购自中国预防医学科学院北京药品生药制品鉴定所
中国医学细菌保藏中心。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的制备
2.1.1 标准贮备液的配制
精密称取 105 ℃干燥至恒重的葡萄糖 85.0 mg 置
100 mL 量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀即
得标准贮备液。
2.1.2 5%苯酚溶液的配制
称取苯酚 100 g,加铝条 0.1 g 和碳酸氢钠 0.05 g,
用套式电热器加热蒸馏,收集 182℃~184℃馏分,冷却
后称取 20 g,加纯水溶解并稀释至 400 mL,摇匀,装入
棕色瓶中备用。
2.1.3 标准曲线的制作
精密量取标准贮备液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 分
别置 25 mL量瓶中,加蒸馏水定容,摇匀。 取稀释液各
1 mL置 10 mL具塞试管中, 加入苯酚 1.0 mL 摇匀,迅
速加入浓硫酸 7 mL,立即混匀,室温放置 30 min;另取
1 mL 纯水按相同方法加入试剂操作, 即得空白对照
液,在 490 nm 处测定吸收度。 以吸收度 A 为纵坐标,
葡萄糖浓度 C 为横坐标进行回归处理,求得回归方程
为:A=0.012 7C-0.003 2(r=0.999 0)[7]。
2.2 多糖的提取
精密称取马齿苋子样品 20 g于 60℃~70 ℃烘干,
粉碎,用石油醚于 60℃~90℃回流脱脂 2次,药渣挥干
后置于 1 000 mL烧杯中,加入 15倍量的蒸馏水。 加热
提取 4 h 后,趁热过滤,将滤液减压浓缩至 1 / 4 体积,
用 0.1 %活性炭脱色后加入无水乙醇使溶液含醇量至
80 %,静置过夜,过滤,残渣用乙醚、无水乙醇反复洗
涤,得马齿苋子多糖,60℃干燥备用。
2.3 样品多糖含量的测定
精密称取提取出来的马齿苋子多糖 20 mg,置
100 mL的容量瓶中,加蒸馏水定容,摇匀,即得样品供
试液。 精密吸取上述样品供试液 1 mL,按 2.1.3中的方
法,并计算出样品中多糖的含量。 结果见表 1。
2. College of Chemistry and Chemical Engineering, Xinjiang University, Urumqi 830046, Xinjiang, China;
3. Administration Office ,Xinjiang University of Finance & Economics, Urumqi 830012, Xinjiang, China)
Abstract: Using phenol-sulfuric acid and UV spectra to determine the po1ysaccharide in 490nm and adopting
the glucose for standard sample. To extract and bacteriostatic activities of po1ysaccharide in seed of Portulaca
oleracea L.The content of po1ysaccharide had a good linearity in the range of 0.010 g/L-0.080 g/L, A=0.012 7 C-
0.003 2 ,r=0.999 0.The average adds the kind recovery rate 98.01 %,RSD= 1.42 %. Its large yield can reach to
8.94 % .The result of the bacteriostatic activities of the polysaccharide from seed of Portulaca oleracea has
remarkable effect except pseudomonas aeruginosa.
Key words: seed of Portulaca oleracea L;po1ysaccharide;bacteriostatic activities
科学研究
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食品研究与开发2009 年 7 月第 30 卷第 7 期
2.4 加样回收率
精密称取已知含量的样品粉末 5 份,每份加入一
定量的葡萄糖对照品,按样品测定项下操作,测得平均
回收率为 98.01%,RSD=1.42%。
2.5 稳定性
取供试液 1 mL 按 2.1.3 中的方法,每隔 30 min 测
定 1 次,连续 6 h 考察其稳定性,结果 RSD 为 1.88 %
(n=5),说明在 6 h内稳定。
2.6 精密度
按照样品测定项下方法同时制备 5 份样品溶液,
测定吸光度,以吸光度计算,RSD=2.10%。
2.7 抗菌试验及结果分析
2.7.1 体外抑菌试验[8]
1)供试药液制备:马齿苋子多糖 12.5 g 加适量
蒸馏水浸泡 20 min 后煮沸 30 min, 过滤浓缩药液
至 25 mL,制成 0.5 g/mL 药液。 用蒸馏水等倍稀释再
制成 0.25 g/mL,0.125 g/mL药液置冰箱待用。
2)菌液制备:从斜面培养基上分别取一接种环以
上菌种的菌苔,分别接种于肉汤培养基中,在 37 ℃培
养 18 h,取出,用肉汤培养基把原菌液作 1:500 稀释成
各种细菌的菌液。
3)取菌液各 0.3 mL 各置于琼脂平板表面,用无菌
圆型小玻璃棒反复均匀涂布后置 37 ℃恒温箱中
10 min,使表面干燥。 取出,在每个平板上等距离平放
打有标记的不锈钢小管 3只, 每只管内分别加入等量
的不同浓度的马齿苋子多糖的药液。于 37℃培养 18 h。
取出 3个浓度的马齿苋子多糖的药液, 每菌种做 6 个
平板,结果见表 2。
样品
Samples
1
2
3
多糖含量/%
Polysaccharide/%
8.90
8.94
9.00
相对标准偏差/%
RSD/%
1.90
1.92
1.90
注:抑菌圈在 15 mm以上,抑菌能力强;抑菌圈在 10 mm~15 mm,抑菌能力较强;抑菌圈在 10 mm以下,抑菌能力弱。
药物剂量/(g/mL)
Dosage/(g/mL)
0.5
0.25
0.125
金黄色葡萄球菌
Staphylocous aureus
17.6±0.32
15.8±0.38
14.8±0.32
大肠杆菌
Escherichia coli
19.8±0.33
17.8±0.29
16.4±0.34
痢疾杆菌
Shigella flexner
16.6±0.28
15.1±0.32
13.4±0.22
绿脓杆菌
Pseudomonas aeruginosa
11.5±0.20
10.6±0.30
9.80±0.28
表 2 马齿苋子提取液的抑菌环直径(mmx±SD)( n=6)
Table 2 Comparison of bacteriostatic activity of different ingredients
表 1 马齿苋子中多糖的含量测定结果(n=5)
Table 1 Amount of polysaccharide extracted in different way(n=5)
3 结论
使用体外抗菌试验的管碟法,取量精确,单位体积
中药物浓度、菌液浓度一致,试验结果较为准确及有规
律,是研究有抑菌作用药物的首选方法。 本试验研究从
体外抗菌作用阐明马齿苋子多糖药液除绿脓杆菌外其
它三种对病菌有明显抑菌作用。 此外, 一些文献的记
载,许多多糖的抑菌性不具备广普性,多糖的抑菌活性
一般也比较单一、针对性较强。 有报道指出猴头菌多糖
对口腔类细菌有抑制作用[9],羟甲基大豆多糖对枯草杆
菌和腊样芽孢杆菌有抑制作用, 鱼腥草的水溶性多糖
和爬山虎多糖[10]也被证实有不同程度的抑菌作用。
马齿苋是药食同源的野生草本植物之一, 有一定
的营养保健作用 [11],深入探讨马齿苋子多糖的生理活
性,能充分认识马齿苋的应用价值,为深加工和综合利
用寻求理论支撑。
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