全 文 ：草、七叶一枝花清热解毒、八月札、莪术理气活血 ,临床可随证
加减。 临床上化疗后患者常出现头晕乏力、气短懒言、纳呆便
溏、发热盗汗、心烦口干、舌淡苔少、脉细等症状和体征 ,表现出
气阴两虚之证为主 ,故治疗时选用健脾益气 ,滋水涵木之法 ,以
补气血生化之源 ,佐以清热解毒凉血之品 ,共同发挥扶正祛邪
作用。
本研究运用血清药理学的方法 ,获得益气养阴解毒方的实
验用大鼠含药血清 ,通过设立含药血清组、化疗药 5-FU组、含
药血清+ 5-FU组及不含药的空白血清对照组 ,分别观察其对
肝癌 HepG2细胞的作用 ,结果显示: 在不同时相含药血清组与
对照组相比 HepG2细胞的生长率均无差异 ,亦未能明显诱导
细胞发生凋亡 ,提示中药含药血清单独作用对 HepG2细胞的
生长无明显抑制作用。但在作用 48h和 72h后 , 5-Fu组和含药
血清+ 5-Fu组均表现出对 HepG2细胞增殖的抑制且观察到细
胞发生明显的凋亡现象 ,而在 72h含药血清+ 5-Fu组细胞的抑
制率和凋亡指数均较 5-Fu组更为显著 ,说明本方含药血清能
增强化疗药 5-Fu诱导细胞凋亡的作用。 本研究结果显示益气
养阴解毒方的含药血清能通过促进化疗药诱导的细胞凋亡而
增加化疗的敏感性 ,起到协同增效作用。
既往的研究多集中在中药能抑制肿瘤细胞的增殖和诱导
凋亡而产生直接的抗肿瘤作用 ,而本研究的结果显示 ,益气养
阴解毒方的含药血清单独作用于肝癌 HepG2细胞未见到明显
的诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖作用 ,但却能促进化疗药诱导
的细胞凋亡 ,说明中药复方由于配伍的不同 ,其作用是多机制
的 ,另外可能与本实验中选用的给药剂量和血清添加浓度有一
定关系 ,不同的给药剂量所制备的含药血清其有效成分亦存在
差异 ,可导致不同的实验结果 ,值得今后从多角度、多层次进一
步的深入研究探讨。
参考文献
[ 1]　王庆才 ,李　苏 ,田力平 ,等 .中药配合介入治疗原发
性肝癌 50例 [ J].江苏中医 , 1998, 19( 8): 31-32.
[ 2]　王力倩 ,李仪奎 ,府胜光 ,等 .血清药理学方法研究探
索 [ J].中药药理与临床 , 1997, 13( 3): 29-31.
(收稿 2008-07-15;修回 2008-11-04)　　
莶草抗血栓组分对凝血系统的作用研究*
孟倩超　金若敏　王　聃　 桂新△　上海中医药大学科技实验中心 ( 201203)
　摘　要　目的:通过血瘀模型动物灌胃给药 ,探讨 莶草抗血栓组分 (腺梗 莶 IIA)对凝血系统的
影响。方法:通过给于冰水肾上腺素血瘀模型动物口服腺梗 莶草抗血栓活性组分 ,测定
血浆纤维蛋白原含量、抗凝血酶 III活性、血浆纤溶酶原活性、血浆 ET和 NO含量等指
标 ,观察 莶草抗血栓组分对凝血系统、纤溶系统及血管内皮细胞的影响。结果:抗血栓组
分能降低血浆纤维蛋白原含量 ,降低降低内皮细胞分泌 ET,而对抗凝血酶 III,纤溶酶原
活性及内皮细胞合成一氧化氮的功能影响不大。结论: 莶草抗血栓组分可能通过降低血
浆纤维蛋白原含量抗凝血及降低内皮细胞分泌 ET的途径抗血栓形成。
　主题词　 莶草 /药理学
　　 莶草为常用中药 ,始载于唐代《新修本草》。具有祛风湿、
通经络、清热解毒 ,治风湿痹痛、筋骨不利、腰膝无力、半身不
遂、高血压、疟疾、黄疸、痈肿疮毒、风疹湿疮、虫兽咬伤等功效。
我们已提取分离出腺梗 莶草抗血栓活性组分 ,并通过口服给
药途径 ,经动物实验证明有较强的抗血栓作用 [1] ,本研究诣在
通过给于正常或血瘀模型动物口服腺梗 莶草抗血栓活性组
分 ,从凝血系统、纤溶系统及血管内皮细胞舒缩功能等方面进
一步深入研究探讨腺梗 莶草抗血栓作用机制。
1　试验材料及方法
1. 1　动物　 SD大鼠 ,清洁级 ,雄性 , 200～ 220g ,由上海斯
莱克实验动物有限责任公司提供。 合格证号: SCXK (沪 ) 2003-
0003
1. 2　仪器　 冷冻离心机: ption 4plus; 血凝仪: 法国梅里
埃公司 ;德国 SIGM A公司 ;酶标仪: Bio tek 800美国宝特公司 ;
SN-682放射免疫 γ计数器: 中国科学院上海原子核研究所日
* 上海市教委青年基金资助项目 , ( N o 04CC18)
△上海中医药大学中药所 ( 201203)
环仪器厂。
1. 3　主要药品与试剂　 1. 3. 1复方丹参片 (简称复方丹
参 ): 上海雷允上药业有限公司 ,批号: 041026。;盐酸肾上腺素
( Adr)注射液 ,上海禾丰制药有限公司 ,批号: 5A09004. ;阿司
匹林肠溶片: 上海信宜百路达药业有限公司 , 25mg /片 ,批号:
0554015。
1. 3. 2主要试剂: FIB检测试剂盒: 上海太阳生物技术有限
公司 ,批号: 9031001;抗凝血酶 III( AT-III)活性测定试剂盒 (发
色底物法 ): 上海太阳生物技术有限公司 ,批号: 451023;纤溶酶
原 ( PLG)活性测定试剂盒 (发色底物法 ): 上海太阳生物技术有
限公司 ,批号: 061226;组织纤溶酶原激活剂 ( t-PA)含量测定试
剂盒 ( EL ISA法 ):上海太阳生物技术有限公司 ,批号: 41108;纤
溶酶原激活剂抑制物 -1( PA I-1)含量测定试剂盒 ( ELISA法 ):
上海太阳生物技术有限公司 ,批号: 42109;乌拉坦:曹杨第二中
学化工厂生产 ,批号 830602;生理盐水: 上海华源长富药业集团
有限公司 ,批号: 05122206
1. 3. 3 莶草抗血栓组分:取腺梗 莶草 ,用 70%乙醇回
流提取 3次。合并提取液 ,减压回收乙醇 ,总提取物经乙醇乙酯
236 陕西中医 2009年第 30卷第 2期
洗脱 ,再经活性炭脱色得到 莶草抗血栓活性组分 (腺梗 莶
IIA部分 ,简称 IIA)。得率为 0. 65%。由上海中医药大学中药研
究所桂新研究员提供。
1. 4　方　法　 1. 4. 1对冰水 -肾上腺素血瘀模型 [4]大鼠
凝血系统的影响　取健康 SD大鼠 ,雄性 ,体重 250～ 300g,按
体重随机分组 ,灌胃给药或等容积蒸馏水 ,每日 1次 ,连续 8d,
于第 7日除正常组外 ,其余各组大鼠皮下注射肾上腺素 0.
25mg /kg,共两次 ,间隔 4h,正常组大鼠皮下注射等容积生理盐
水 ,处置后禁食不禁水过夜 ,于第 8日末次给药或蒸馏水 1h
后 ,除正常组外 ,其余各组大鼠均皮下注射肾上腺素 0. 25mg /
kg , 20min后浸入 4℃冰水中 5min,正常组大鼠仅注射等容积
生理盐水 , 25%乌拉坦 0. 4ml /100g体重麻醉后 ,腹主动脉取血
2. 5m l,注入含 3. 28%枸橼酸钠的试管中 (抗凝剂和全血的比例
为 ( 1∶ 9) , 3000rpm,离心 10min,分离血浆。按照试剂盒说明书
分别测定 FIB含量及 AT-III活性。
1. 4. 2对纤溶系统的影响 　方法同上取血分离血浆。按照
试剂盒说明书进行纤溶酶原 ( PLG )活性测定。
1. 4. 3对冰水 -肾上腺素型血瘀模型大鼠 NO、 ET含量的
影响　给药方法同上 ,腹主动脉取血 4ml,注入含有 10%
EDTA-Na230μl和抑肽酶 40μl试管内 ,混匀 , 4℃ , 3000rpm,离
心 10min,分离血浆 ,按试剂盒说明书测定 ET含量。 剩余 2ml
血直接以 3000rpm离心 10min,分离血清 ,按试剂盒说明书加
入相应试剂 ,在 550nm处测定各管吸收度 A值 ,计算 NO含
量。
2　结　果
2. 1　对冰水 -肾上腺素血瘀模型大鼠凝血系统的影响　
结果显示: 冰水肾上腺素血瘀模型大鼠与正常对照组比较血浆
FIB含量明显升高 ,而 AT-III活性无明显改变。与模型组比较 ,
莶草抗血栓活性组分各组和阳性药阿司匹林组大鼠纤维蛋
白原含量明显降低 ,差异具有统计学意义 (P < 0. 01) ;而 莶草
抗血栓活性组分各组和阳性药阿司匹林组大鼠血浆 AT-III活
性无明显改变。 见表 1。
表 1　 莶草抗血栓组分对冰水 -肾上腺
素型大鼠 FIB含量及 AT-III活性的影响
组别 n ( g /1cg) F IB( g /L) AT-II I活性 (% )
正常对照组 8 0 2. 4± 0. 16* * 68. 9± 25. 2
模型组 8 0 3. 61± 0. 13 73. 8± 28. 7
IIA小剂量组 8 180 3. 1± 0. 17* * 54. 8± 29. 0
IIA大剂量组 8 240 3. 1± 0. 05* * 63. 3± 31. 1
阿司匹林组 8 240 2. 8± 0. 23* * 69. 4± 33. 8
　　注: 与模型组比较 ,* P < 0. 05,* * P < 0. 01。
　　 2. 2　对纤溶酶原 ( PLG)活性的影响 　 结果表明: 与正常
组比较 ,模型组大鼠血浆 PLG活性无明显改变 ,说明冰水肾上
腺素对大鼠 PLG活性影响不大。与模型组比较 , 莶草抗血栓
组分大小剂量组与阿司匹林组均无明显改变。结果见表 2。
2. 3　对冰水-肾上腺素型血瘀模型大鼠 NO、 ET含量的影
响　 结果显示 ,与正常对照组比较 ,冰水 -肾上腺素血瘀模型大
鼠血中 ET的含量明显升高 , IIA能显著降低冰水 -肾上腺素血
瘀模型大鼠血中 ET的含量、与模型组比较有极显著性差异 ( P
< 0. 01);模型组大鼠血浆 NO含量较正常对照组明显降低 ( P
< 0. 05) ,与模型组比较 ,阿司匹林组大鼠血浆 NO含量明显升
高 ,有极显著性差异 (P < 0. 01) , 莶草抗血栓组分对 NO含量
影响不大。 结果见表 3。
表 2　 莶草抗血栓组分对冰水 -肾上腺素
血瘀模型大鼠纤溶系统的影响
组别 n ( g /1cg ) PLG活性 (% )
正常对照组 8 0 59. 7± 19. 3
模型组　 8 0 63. 6± 22. 1
IIA小剂量组 8 55 62. 1± 13. 4
IIA大剂量组 8 110 58. 1± 17. 6
阿司匹林组 8 1. 5 65. 1± 22. 2
　　注: 与模型组比较 ,* P < 0. 05,* * P < 0. 01。
表 3　 莶草抗血栓组分对冰水 -肾上腺
素血瘀模型大鼠 NO、 ET含量的影响 (x-±s )
组别 n ( g /1cg ) ET NO
正常对照组 8 0 98. 7± 4. 9* * 47. 7± 12. 1*
模型组 8 0 114. 6± 8. 0 33. 8± 7. 2
小剂量组 7 55 92. 6± 9. 9* * 27. 6± 12. 7
大剂量组 7 110 94. 7± 4. 8* * 33. 1± 9. 6
复方丹参组 7 1. 5 91. 4± 5. 5* * 82. 2± 18. 0* *
　　注: 与模型组比* * P < 0. 01,* P < 0. 05。
3　讨　论　血栓性疾病在临床上较为常见 ,是致残致死
的重要原因之一。而适时的应用抗血栓药是最关键的措施。而
应用抗血栓药应在其抗血栓机理的基础上根据病情合理应用 ,
否则应用不当会导致诸如出血等多种并发证的发生。所以对一
个药物作用机理研究的重要性可略见一斑。对抗血栓药物的研
究主要集中在对血液流变学、凝血系统、抗凝系统、纤溶系统及
对血小板的影响等几方面。 先前已有试验证明 , 莶草抗血栓
组分 ,在血液流变学方面 ,能显著改善冰水肾上腺型血瘀模型
大鼠的血液流变性 ,显著降低高切变率全血的粘度 ,低切变率
全血粘度 ,还原粘度以及显著降低血浆粘度和红细胞的聚集指
数 ;能延长正常小鼠凝血时间 ,出血时间和抑制大鼠血栓形成
的作用 [2, 3]。 我们在此基础上对其在抗凝系统及纤溶系统可能
存在的抗血栓作用继续进行探索。
凝血是由一系列凝血因子参与的复杂的生理过程。凝血系
统包括凝血和抗凝血两个方面 ,两者间的动态平衡是机体维持
体内血液正常流动的关键。 参与凝血因子很多 ,纤维蛋白原在
凝血过程中起着重要作用 ,凝血酶可使纤维蛋白原最终变成不
可溶的交联纤维蛋白原体 ,同时纤维蛋白原在血浆中可以形成
网状结构 (纤维蛋白原分子连状结构可以使红细胞串或绕线状
聚集 ) ,影响血浆的粘度 ,从而加剧血栓的形成。 纤维蛋白原在
血小板聚集过程中也起着重要作用 , ADP等诱导剂引起血小
板聚集时必须有纤维蛋白原存在。 抗纤维蛋白原的抗体 ( Fab
片段 )能抑制包括凝血酶在内的诱导剂引起的血小板聚集反
应。Mustard等最早证明在 ADP诱导血小板聚集过程中纤维蛋
白原结合到血小板膜上 [4 ]。在 ADP诱导血小板变形时 ,膜表面
的纤维蛋白原受体就形成了。血小板无力症患者的血小板膜缺
237陕西中医 2009年第 30卷第 2期
乏 GPII /II I,纤维蛋白原不能结合 ,因此 ADP等诱导剂作用时
患者血小板不能发生聚集。测定药物对纤维蛋白原含量的影响
是检测药物对凝血系统作用的重要环节。我们用冰水肾上腺素
造模 ,使模型大鼠血液处于高凝状态 , 莶草抗血栓组分各剂
量组和阳性药阿司匹林组都能显著降低冰水肾上腺大鼠血液
中的纤维蛋白原含量 ,表明降低纤维蛋白原含量是抗 莶草抗
血栓组分血栓作用的机理之一。
正常的抗凝血功能是机体防止血栓在血管内形成 ,保证血
液在血循环中正常运行的重要功能。正常的抗凝功能由细胞及
体液两方面的作用来完成。其中体液抗凝方面 , AT-III(抗凝血
酶 III)是血浆生理性凝血抑制物中最重要的抗凝物质之一 ,
70% 凝血酶的灭活由它来完成。 AT-II I是一种多功能的丝氨
酸蛋白酶抑制剂 ,它主要抑制纤维蛋白原 ,凝血酶原 ,前转变素
稳定因子 ,血浆凝血活酶前质 ,接触因子或 Hageman因子 ,前
激肽释放酶等以丝氨酸为活动中心的凝血因子的转化。纤溶系
统最基本的成分是纤维蛋白溶解酶原 (纤溶酶原 ) ,纤溶酶原是
肝脏内合成的 β2球蛋白 ,可以被纤溶酶原激活物 ( PA )激活后
转变成纤溶酶 ( PL)。 纤溶酶原活性增高表示纤溶活性降低 ,见
于高凝状态或血栓性疾病 ;降低表示纤溶活性增高 ,见于原发
性和继发性纤溶症。本实验表明 莶草抗血栓组分对血瘀模型
动物的 AT-II I及 plg无明显影响。
正常血管内皮细胞通过分泌各种血管活性物质 ,活跃的
参与血小板功能调节、血浆促凝因子激活、活化的凝血因子的
清除及纤溶过程 ,对维持正常的血液流变性具有重要作用。绝
大多数血瘀症患者存在着微循环障碍 ,有血管舒缩功能及血
管内皮病变的表现。内皮损伤是血管病变的始动因素。作为反
映血管内皮细胞损伤特异性标志之一的内皮素 ( ET ) ,是迄今
发现的作用最强 、维持时间最久的缩血管物质。具有强烈的收
缩冠状动脉、肾小动脉 ,刺激心钠素的释放 ,提高全身血压 ,抑
制肾素释放的作用。 内皮细胞还可合成一氧化氮 ( NO ) ,具有
扩张血管、抗血小板粘附、聚集等作用。当寒邪侵袭机体 ,致使
血脉瘀滞 ,气血运行不畅 ,引起微循环障碍 ,血管舒缩功能和
血管内皮受损 ,其细胞分泌功能失调或紊乱 ,造成 ET分泌增
多 ,导致血管收缩 ,血液瘀滞 ,血管通透性增加 ,血细胞聚集 ,
血液呈高凝状态等瘀血的表现。本实验中模型组大鼠 ET , NO
均较正常组升高 ,其机理可能与 ET和 NO在生物学上的拮抗
作用有关。 莶草抗血栓组分能明显降低冰水-肾上腺素血瘀
模型大鼠 ET的含量 ,提示 莶草抗血栓组分有抑制血管收缩
和对抗内皮损伤所致凝血功能异常和血小板聚集。对 NO含量
的影响不大。
4　结　论　 莶草抗血栓组分可能通过降低血浆纤维蛋
白原含量抗凝血及降低内皮细胞分泌 ET的途径抗血栓形成。
参考文献
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[ 2]　李仪奎 .中药药理实验方法学 [M ]. 上海科学技术出
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function o f the vascula r endo thelium [ J ]. New Eng I JMed,
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endo thelium-deriv ed nitric ox ide and nitrov asodila tions [ J ] West
J Med, 1991, 154( 1): 51-62.
(收稿 2008-05-13;修回 2008-10-10)　　
何首乌不同成分与肝细胞凋亡的相关性研究*
卫培峰　党艳丽△　焦晨莉　吴艳艳 　苗彦霞 　陕西中医学院 ( 712046)
　摘　要　目的:研究何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞凋亡的影响。方法: 将何首乌中不同成分提取
物大黄素、大黄酸、大黄酚 ,以及制首乌分别按不同剂量给予大鼠每天灌胃一次 ,连续 3个
月 ,检测大鼠肝脏细胞凋亡情况 ,用 AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒给予凋亡细胞
染色 ,利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。结果:大鼠肝脏细胞凋亡的测定结果制首乌
组及大黄酚组与空白对照组比较有显著差异 ( P < 0. 05)。
　主题词　何首乌 /药理学　肝　细胞凋亡　大鼠　动物 ,实物
* 陕西省教育厅自然科学课题 ,课题编号: 05JK173
△解放军 306医院 ( 1001101)
　　何首乌始载于《开宝本草》 ,为蓼科植物何首乌 ( Polyg on-
ummultiflo rum Thunb)的干燥块根 ,经过炮制后具有补益精血 ,
固肾乌须之功 ,该药历来为古今医家、饮食家所推崇 ,成为滋补
肝肾延年益寿的佳品。但是近些年关于服用制首乌导致的不良
238 陕西中医 2009年第 30卷第 2期