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［参考文献］
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［4］ 侯媛媛，黄晓婧，晁若冰 ． HPLC 同时测定丹参及其制
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［5］ 张正付，陈鸿珊，李卓荣 ． HPLC 法同时测定滇丹参和
丹参中 5 个活性酚酸的含量(英文) ［J］． 中国药学杂
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［责任编辑 蔡仲德］
［收稿日期］ 20110731(011)
［基金项目］ 国家高技术研究发展计划项目(2002AA2Z3217)
［第一作者］ 邹盛勤，硕士，教授，从事天然产物活性成分提取与分析研究，Tel:13507058127，E-mail:zsqycxy@ sohu． com
RP-HPLC同时测定茅莓中齐墩果酸和熊果酸
邹盛勤 * ，黄浩
(宜春学院化学与生物工程学院，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，江西 宜春 336000)
［摘要］ 目的:建立茅莓中齐墩果酸和熊果酸的反相高效液相色谱分析方法。方法:Kromasil C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ，流动相甲醇-1. 0%磷酸溶液(90∶ 10) ，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 210 nm，柱温 30 ℃。结果:齐墩果酸、熊果酸
分别在 0. 136 8 ～ 1. 368 0，0. 212 8 ～ 2. 218 0 μg 线性关系良好，平均回收率(n = 6)分别为 97. 5%(RSD 1. 6%)和 96. 9%(RSD
1. 4%)。结论:方法准确，操作简便，数据可靠，可用于茅莓中齐墩果酸和熊果酸的含量测定。
［关键词］ 茅莓;齐墩果酸;熊果酸;反相高效液相色谱法;含量测定
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)11-0079-03
［DOI］ CNKI:11-3495 /R． 20120327． 2700． 021 ［网络出版时间］ 2012-03-27 17:07
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20120327． 1707． 021． html
Simultaneous Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid
in Rubus parvifolius by RP-HPLC
ZOU Sheng-qin* ，HUANG Hao
(College of Chemistry and Bioengineering of Yichun University，Key Laboratory of Jiangxi Province
for Research on Active Ingredients in Natural Medicines，Yichun 336000，China)
［Abstract］ Objective:To develop a RP-HPLC method for simultaneous determination of oleanolic acid
and ursolic acid in Rubus parvifolius． Method:The separation was achieved on a Kromasil C18 column (4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)at 30 ℃ using methanol-phosphoric acid solution (90∶ 10)as the mobile phase at a flow rate of
1. 0 mL·min － 1，210 nm as the detection wavelength． Result:The linear ranges of oleanolic acid and ursolic acid
were from 0. 136 8 to 1. 368 0 μg and 0. 212 8 to 2. 218 0 μg，respectively． The average recoveries (n = 6)for
oleanolic acid and ursolic acid were 97. 5% (RSD 1. 6%) ，96. 9% (RSD 1. 4%) ，respectively． Conclusion:
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第 18 卷第 11 期
2012 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 11
Jun．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.11.031
The proposed method is accurate，simple and applicable for determination of oleanolic acid and ursolic acid in R．
parvifolius．
［Key words］ Rubus parvifolius;oleanolic acid;ursolic acid;RP-HPLC;content determination
茅莓为蔷薇科悬钩子属植物，广泛分布于河北、
山西、陕西、四川及华东各省区［1］。茅莓根、茎、叶
及全草均可药用，具有清热凉血、散结止痛、利尿消
肿等功效，常用于治疗肠炎、肝脾肿大、黄疸、慢性肝
炎、跌打肿痛、风湿骨痛、泌尿系统感染等［2］。药理
实验表明，茅莓的水提物具有止血和活血化瘀作用，
并且已成功用于治疗冠心病、心绞痛等多种心血管
疾病［3］。目前，茅莓化学成分的研究主要集中于茅
莓总皂苷的提取及组分的分离鉴定，王先荣等［4］用
正丁醇萃取茅莓根的水提醇沉提取物，再经硅胶柱
色谱和薄层色谱从中分离出 2 个三萜皂苷结晶成
分，即悬钩子皂苷 R1 和苦莓苷 F1。谭明雄
［5］等将
茅莓根乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱分离，从其根
部乙醇提取物中乙酸乙酯部位分离得到 5 个化合
物，分别为 β-谷甾醇、蔷薇酸、2α，3α，19α，23-四羟
基乌索-12-烯-28-酸、β-葫萝卜苷和悬钩子皂苷，表
明茅莓总皂苷主要由三萜皂苷及苷元组成。但茅莓
中三萜酸类成分齐墩果酸和熊果酸的分离和含量测
定方法尚未见文献报道。本实验采用超声辅助提
取，建立反相高效液相色谱法同时测定茅莓样品中
齐墩果酸和熊果酸的含量，为茅莓化学成分的研究
及样品中齐墩果酸和熊果酸的定量分析提供科学
依据。
1 仪器与试药
Waters 系列高效液相色谱仪(美国 Waters 公
司，包括双 515 泵，2996 光电二极管阵列检测器，
Empower 中文色谱数据工作站) ，RO-MB-10D 型高
纯水机(杭州永洁达膜分离设备厂) ，CP225D 型电
子分析天平(德国 Sartourius 公司) ，SK2510HP 型超
声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
甲醇(色谱纯，国药集团化学试剂有限公司) ，
齐墩果酸、熊果酸对照品(中国药品生物制品检定
所 提 供，批 号 分 别 为 110709-200304，110742-
200314) ，其 余 试 剂 均 为 分 析 纯。茅 莓 (YCU-
MM201101 ～ YCU-HZ201103 标本存放于宜春学院
生药标本室)购自江西省宜春市，经宜春学院肖道
安讲师鉴定为蔷薇科悬钩子属植物茅莓 Rubus
parvifolius L．的干燥全草。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ，甲醇-1. 0%磷酸溶液(90∶ 10) ，流速 1. 0
mL·min － 1，检测波长 210 nm，柱温 30 ℃。以齐墩果
酸和熊果酸计，理论塔板数分别为 10 918，11 267，
齐墩果酸和熊果酸分离度为 2. 4，对称因子分别为
1. 041 285，1. 031 056，外标法定量分析。对照品和
样品色谱见图 1。
A．对照品;B．样品;1. 齐墩果酸;2. 熊果酸
图 1 齐墩果酸和熊果酸对照品(A)和茅莓样品(B)HPLC
2. 2 溶液配制
2. 2. 1 对照品溶液 分别精密称定齐墩果酸、熊果
酸对照品 3. 42，5. 32 mg，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇
溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含齐墩果酸0. 068 4 g·
L － 1和熊果酸 0. 106 4 g·L － 1的对照品混合溶液。
2. 2. 2 样品溶液 茅莓样品置恒温干燥箱中于
70 ℃下干燥 6 h，粉碎后过 80 目筛。精密称取茅莓
各样品粉末约 5. 0 g，分别置于 50 mL 具塞锥形瓶
中，加入 95%乙醇 50 mL，称重。超声提取 30 min，
冷却后用乙醇补足损失质量，摇匀，用 0. 45 μm 滤
膜过滤，取续滤液作为样品溶液。
2. 3 精密度试验 分别精密吸取齐墩果酸和熊果
酸对照品混合溶液 10 μL，平行进样 5 次，以峰面积
计算色谱系统精密度，齐墩果酸和熊果酸峰面积
RSD 分别为 0. 7% (n = 5) ，0. 6% (n = 5)。说明进
样方法和仪器精密度良好。
2. 4 重复性试验 取茅莓样品 5 份，每份各约
2. 5 g，按 2. 2 项下方法制备样品溶液。精密吸取各
样品溶液 20 μL，进样，测定其峰面积积分值，外标
法计算含量。齐墩果酸和熊果酸含量的 RSD 分别
为 1. 8%(n = 5) ，2. 2%(n = 5)。结果表明，样品制
备方法重复性良好。
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2012 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 11
Jun．，2012
2. 5 加样回收率试验 精密称取已知齐墩果酸和
熊果酸含量的茅莓样品 6 份，每份约 3. 0 g，分别加
入对照品适量，制备样品溶液，进样测定含量，齐墩
果酸和熊果酸平均回收率测定结果见表 1。
表 1 2 种成分加样回收率测定
组分
样品
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
齐墩果酸 0. 405 0. 422 0. 820 98. 3 97. 5 1. 7
0. 408 0. 422 0. 813 95. 8
0. 412 0. 422 0. 819 96. 4
0. 396 0. 422 0. 807 97. 2
0. 408 0. 422 0. 832 100. 5
0. 400 0. 422 0. 810 97. 0
熊果酸 1. 126 1. 250 2. 355 98. 1 96. 9 1. 3
1. 134 1. 250 2. 326 94. 9
1. 145 1. 250 2. 349 96. 0
1. 101 1. 250 2. 322 97. 4
1. 134 1. 250 2. 360 97. 9
1. 112 1. 250 2. 332 97. 3
2. 6 线性关系试验 精密吸取齐墩果酸和熊果酸
对照品混合溶液 2，6，10，14，20 μL 进样分析，按色
谱条件测定峰面积，以对照品的进样量为横坐标，峰
面积为纵坐标，绘制标准曲线，得齐墩果酸回归方程
为 Y = 5. 04 × 105X － 2. 09 × 104(r = 0. 999 9) ，熊果
酸回归方程为 Y = 4. 45 × 105X － 1. 97 × 104(r =
0. 999 8)。表明齐墩果酸进样量在 0. 136 8 ～
1. 368 0 μg，熊果酸进样量在 0. 212 8 ～ 2. 218 0 μg
时，线性关系良好。
2. 7 样品含量测定 精密吸取制备的样品溶液各
20 μL 进样，平行 3 次，测定齐墩果酸和熊果酸峰面
积积分值，外标法计算齐墩果酸和熊果酸的平均含
量。测定结果见表 2。
3 讨论
结果表明，在茅莓不同样品中，齐墩果酸含量最
表 2 茅莓不同样品中齐墩果酸和熊果酸的含量测定
mg·g － 1
No． 齐墩果酸 熊果酸
1 0. 109 0 0. 221 5
2 0. 064 0 0. 261 9
3 0. 134 5 0. 373 3
高为 0. 134 5 g·mg － 1，最低为 0. 064 0 g·mg － 1;熊果
酸含量最高为 0. 373 3 g·mg － 1，最低为 0. 221 5 g·
mg － 1。但熊果酸含量均明显高于齐墩果酸，3 个样
品中熊果酸平均含量为齐墩果酸的 2. 8 倍。从结果
不难发现，茅莓样品中熊果酸和齐墩果酸的含量均
较低，且不同样品中 2 组分含量差别较大。
在流动相中加入少量磷酸消除了色谱峰拖尾现
象，齐墩果酸和熊果酸的对称因子分别为 1. 04，
1. 03。分析时采用等度洗脱，流动相为甲醇-1. 0%
磷酸溶液时样品中各个色谱峰分离度较好，齐墩果
酸和熊果酸分离度为 2. 4，且保留时间适中。本实
验建立的反相高效液相色谱法可同时测定茅莓中齐
墩果酸和熊果酸的含量，样品处理简单，提取效率
高，待测组分无其他杂质的干扰。方法简便、快速，
分离效果好，数据准确可靠，为茅莓中齐墩果酸和熊
果酸的定量分析及质量控制提供了科学依据。
［参考文献］
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［责任编辑 蔡仲德］
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邹盛勤，等:RP-HPLC 同时测定茅莓中齐墩果酸和熊果酸