全 文 ：dib le fungi2011（5）
松 口 蘑 利 用 淀 粉 的 确 证
曾东方 陈 玢 杨 帆
（武汉工程大学真菌生理学实验室，湖北武汉 430074）
摘 要 以 2%可溶性淀粉为唯一碳源的改良查氏液体培养基
诱导发酵外生菌根食用菌松口蘑[Tricholoma matsutake（S. Ito et
Imai）Sing.]；采用 3，5-二硝基水杨酸（DNS）比色法检测到松口
蘑产生淀粉酶，其活力为 0.226 U/mL，约为香菇（Lentinula edo-
des） 淀粉酶活力的 7%。 结果证明了松口蘑水解利用淀粉的能
力，展示了人工驯化松口蘑的潜力。
关键词 松口蘑 淀粉酶 酶活力测定
文章编号 1000-8357（2011）05-0011-01
收稿日期：2011-04-16 一稿；2011-04-19 修改稿。
松口蘑又称松茸 [Tricholoma matsutake （S.Ito et Imai）
Sing.]，自然条件下与赤松等共生，是一种具有很高食、药用价
值的林副产品，分布在云南、四川、西藏和东北等地。由于松口
蘑的营养生长与生殖生理异常复杂， 迄今没有人工栽培成功
的报道。我国采集的野生松口蘑子实体主要供出口，仅云南就
每年出口占全国出口总量的 70%[1]。 但由于不合理的采摘和
过度开发，尤其是被采的松茸有 50%以上都为童茸，极大破
坏了生态环境，导致松茸产量每年以 5%以上的速度在减少，
有些地方的松茸濒临灭绝。为了保护利用这种野生珍稀资源，
人们试图研究松口蘑的营养代谢生理， 为松口蘑的人工驯化
栽培与工业开发奠定理论基础。
目前，许多食用真菌菌丝体可以仿效青霉菌发酵，大规模
生产食用菌多糖、抗生素、酶制剂等生物活性物质，但工业开发
的前提，是必须选育到能够利用廉价原料迅速生长并大量合成
目的产物的菌种，这很大程度上依赖于食用菌产生水解酶的活
力。 松口蘑是一种共生菌根真菌，其组织分离菌丝体可以在人
工培养基上生长，表明了松口蘑的人工驯化潜能。 笔者前期研
究工作表明，松口蘑菌丝体能够在以淀粉为唯一碳源的合成培
养基上生长[2]，提示松口蘑可能具有利用淀粉进行代谢的生理
基础。 本文进一步研究了松茸在添加 2%可溶性淀粉的查氏液
体培养基中诱导发酵的可能性，对松口蘑产生淀粉酶的活力进
行了准确测定，证明了松口蘑水解利用淀粉的能力。
1 材料与方法
1 .1 菌种来源 试验所采用的松口蘑菌株[ Tricholoma
matsutake（S. Ito et Imai）Sing.]来自我国东北延边地区产的松
茸子实体的组织分离，经 DNA 亲菌鉴定试验确认为松茸菌丝
体。 另采用两个已知产淀粉酶的真菌种类作为淀粉酶活力平
行测定的标准菌株，其中香菇（Lentinula edodes）菌丝体菌种
来自市购新鲜子实体的组织分离，经出菇试验鉴定。酒曲根霉
（Rhizopus sp.）分离自市购酒曲。
1.2 发酵液制备 在以 2%可溶性淀粉为唯一碳源的改良查
氏（Czapek）液体培养基中分别接种松口蘑、香菇、酒曲根霉的
菌丝体，松口蘑 22℃恒温摇床培养 20 d，香菇、酒曲根霉 27℃
恒温摇床培养 6 d。 所用查氏液体培养基参考传统配方 [3]修改
为：KNO3 2 g，可溶性淀粉 20 g，KH2PO4 1 g，NaCl 0.5 g，MgSO4·
7H2O 0.5 g，FeSO4 0.01 g，蒸馏水 1 000 mL。该培养基不同于查
氏培养基之处是用可溶性淀粉代替蔗糖作为唯一可用碳源，
以诱导供试菌株产生淀粉酶实现发酵生长。
1.3 DNS 比色法 [4]测定淀粉酶活力 取 2 mL 供试食用菌和
酒曲根霉的发酵液， 加入 2 mL 3,5-二硝基水杨酸试剂，置
40℃水浴中 5 min，定容至 25 mL 于 520 nm 波长下测吸光度，
在以系列梯度浓度的麦芽糖比色反应制备的标准曲线上查出
对应的还原糖含量。 定义以 1 mL 的发酵液中的淀粉酶，在
40℃，1 min 生成 0.1 mg 的还原糖为 1 个酶活力单位（U）。 根
据以下公式计算酶活力：淀粉酶活力=C×7/2×0.1×5，式中 C 代
表测定的还原糖产生量。 每处理重复 10 次，计算平均值。
2 结果与讨论
研究 测 得 酒 曲 根 霉 （Rhizopus sp . ）淀 粉 酶 活 力 为
20.331 U/mL，香菇（Lentinula edodes）淀粉酶活力为 3.417 U/mL，
松口蘑 [Tricholoma matsutake（S. Ito et Imai）Sing.]淀粉酶活力
为 0.226 U/mL。供试酒曲根霉（Rhizopus sp.）分离自商品酒曲，
而酒曲的主要功能是将淀粉糖化， 产生的葡萄糖供酿酒酵母
乙醇发酵所需， 其淀粉酶活力是工业生产多年选育的商业形
状，这里测得它的淀粉酶活力最强，符合生产实际情况。 因此
为评价 3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法测定食用菌松口蘑及
香菇的淀粉酶活力提供了参考标准。相比较而言，松口蘑产淀
粉酶活力仅有香菇的 7%， 与供试食用菌的营养方式密切相
关。自然界松口蘑为菌根共生真菌，依赖宿主植物提供可利用
的糖类，而香菇则为腐生菌，具有较强的降解木质纤维素和淀
粉的酶活力。松口蘑产淀粉酶活力相对较弱，可以解释松口蘑
在以淀粉为唯一碳源的合成培养基上生长速度低于在以葡萄
糖为碳源的天然培养基上的生长速度 [2]。
淀粉酶活性测定方法较多 [4]，但大致分为四类：一是测定
底物淀粉的消耗量，有粘度法、浊度法和碘-淀粉比色法等；
二为生糖法， 测定产物葡萄糖的生成量； 三为色原底物分解
法，四是酶偶联法。 笔者曾用碘-淀粉比色法测定松口蘑在淀
粉培养基平板上的水解圈，因松口蘑生长缓慢，培养两个月的
菌落直径才 1 cm，结果淀粉水解圈不明显，定性定量判断松
口蘑是否产淀粉酶都比较困难。 而利用 3,5-二硝基水杨酸
（DNS）比色法测定还原糖含量来反映淀粉酶活力是目前较常
生 理 生 化
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采用的方法， 原理是用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成
的还原糖的量， 以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖
的量表示酶活力。 该方法测试所用试剂易得，溶液有效期长，
且测试精确度高，结果比较可靠。故研究采用此法来测定松口
蘑产生淀粉酶的活力。
松口蘑发酵有赖于适宜的工艺条件与生物反应器， 但更
取决于具工业开发价值的生产菌种的生理性状， 包括生产菌
种对环境的适应性及其代谢能力。 研究利用 3,5-二硝基水杨
酸（DNS）比色法测定还原糖含量来反映松口蘑产淀粉酶的活
力，结果证明了松口蘑水解利用淀粉的能力 [2]，这对了解松口
蘑的营养生理习性， 研究松口蘑的人工驯化栽培或发酵都具
有指导意义。
参考文献
[1] Sha T，Zhang HB，Ding HS. Genetic Diversity of Tricholoma matsu-
take in Yunnan Province[J]. Chinese Science Bulletin，2007，52（9）：
1 212-1 216.
[2] 曾东方，陈 玢，邓王平.松茸利用淀粉的初步研究[J]. 生物技术，
2010，20（3）：71-73.
[3] 沈 萍，范秀容，李广武.微生物学实验[M].北京：高等教育出版
社，2004.
[4] 郭 勇.酶工程（第三版）[M]. 北京：科学出版社，2005.
表面活性剂对蒙古口蘑深层培养菌丝体胞外多糖的影响
李 敏 1 田亚宾 1 闫 伟 2*
（1 内蒙古师范大学生命科学与技术学院，内蒙古呼和浩特 010022； 2 内蒙古农业大学林学院，内蒙古呼和浩特 010019）
摘 要 研究了非离子表面活性剂 Tween 80、离子表面活性剂
十二烷基二甲基苄基溴化铵（BG）对蒙古口蘑的深层培养菌丝
体生长及胞外多糖的影响。结果表明：添加 0.05%的非离子表面
活性剂 Tween 80 对菌体的生长有促进作用 ， 比对照提高了
25.4%； 而不同浓度的 BG 均对菌丝体生长表现出抑制作用 。
Tween 80 和 BG 都能提高胞外多糖的产量， 但 BG 促进作用更
强，添加浓度为 0.05%时，比对照提高了 94.7%。
关键词 表面活性剂 蒙古口蘑 胞外多糖 深层培养
文章编号 1000-8357（2011）05-0012-02
蒙古口蘑 （Tricholoma mongolicum Imai.）， 又称口蘑、白
蘑 、蒙古白蘑 、草原白蘑等 ，属伞菌目 （Agaricales）、口蘑科
（Tricholomataceae）、口蘑属（Tricholoma）。 蒙古口蘑子实体大
中型，菌肉肥厚，质地细致，郁香醇正，味道鲜美，是著名的优
质野生食用菌，也是草原上典型的蘑菇圈产生菌，自然生长在
茫茫大草原上，丛生于蓼科、禾本科或莎草科植物间，是我国
珍贵的食用菌和药用菌资源。
现代医学研究表明，蒙古口蘑多糖是药用有效成分之一，
它具有增强免疫、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、降低血糖、抗溃疡、
抗衰老、抗辐射等多方面的生物活性和生理功能 [1]-[3]，对临床
上一些疑难病症显示了很好的疗效及诱人的开发前景。 我国
食药用真菌资源丰富，这些资源是寻找新药物的宝贵资源库。
由于蒙古口蘑至今尚不能实现人工驯化栽培， 自然生长季节
性强，加之生态环境恶化、资源锐减，所以蒙古口蘑的产量和
质量每况愈下，难以满足商品化、市场化的需求 [4]。 而在蒙古
口蘑菌丝体液体培养过程中， 有关表面活性剂对菌丝体干重
和胞外多糖的影响鲜有报道，为了开发利用这一宝贵资源，笔
者对此进行了研究。 现将试验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 供试材料 蒙古口蘑菌种由内蒙古农业大学菌根研究
室提供。
1.2 培养基的配置 PDA 液体培养基中分别加入 0.05%、
0.10%和 0.15%的非离子表面活性剂 Tween80和离子表面活性剂
十二烷基二甲基苄基溴化铵（BG），对照实验中以去离子水代替。
1.3 菌丝体的培养 将蒙古口蘑菌丝体接种到 PDA 固体培
养基上进行活化，25℃恒温培养 7 d。待菌丝生长旺盛时，挑取
菌落边缘的菌丝接入含有不同种类和浓度的表面活性剂的液体
培养基中培养，每个摇瓶中接入等量菌丝，实验采用 250 mL
摇瓶，装液量 50 mL，在 150 r/min、25 ℃ 条件下培养 10 d。 每
个处理三个重复。
1.4 测定方法 菌丝生物量的测定参考文献[5]进行，蒙古口
蘑胞外多糖的测定参考文献[6]进行。
2 结果与分析
2.1 非离子表面活性剂 Tween 80 对蒙古口蘑菌体及多糖
的影响 非离子表面活性剂 Tween 80对蒙古口蘑菌丝体干重
及胞外多糖的影响如图 1所示。 当添加浓度为 0.05%时，蒙古口
蘑的菌丝体干重为 8.63 mg/mL，比对照提高了 25.4%；随着添加
浓度的增加，蒙古口蘑菌丝体干重在逐渐下降。当添加浓度大于
0.1%时，Tween 80对蒙古口蘑的菌丝体生长表现出抑制作用。
在发酵培养液中加入不同浓度的 Tween 80 能促进胞
外多糖的分泌。 当加入浓度为 0.15%吐温时， 多糖产量为
2.873 mg/mL，比对照提高了 36%。说明 Tween 80对蒙古口蘑多
糖的分泌有一定的促进作用， 这可能是因为 Tween 80 改变了
蒙古口蘑的细胞膜的通透性，从而增加了胞外多糖的分泌[9]。
2.2 离子表面活性剂十二烷基二甲基苄基溴化铵（BG）对蒙
深 层 发 酵
收稿日期：2011-03-01 一稿；2011-07-13 修改稿。
基金项目：教育部高等学校科技创新工程重大项目培养资金项
目 （707014）； 内蒙古师范大学引进高层次人才科研启动经费项目
（GCRC09017）
* 通讯作者。
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