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豨莶草提取物对血管内皮NO依赖作用的研究



全 文 :China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 27 中国药房 2010年第21卷第27期
莶草为菊科植物 莶 Siegesbeckia orientalis L.、腺梗
莶 S. pubescens Makino或毛梗 莶 S. glabrescens Makino的地
上部分。性味辛、苦、寒,具有祛风湿、通络利筋骨、益肝肾等
作用。据报道, 莶草有抗炎、抗风湿[1]、降压[2,3]等多方面的作
用。为探讨 莶草降血压的作用机制,本研究观察了 莶草水
提物对血管内皮NO的作用。
1 材料
1.1 仪器
P23XL型张力换能器(杭州雷琪实验器材有限公司);
2400s型多道生理记录仪(美国Biopac公司);LQH- 3型离体器
官恒温浴槽(成都仪器厂)。
1.2 药物
莶草购自广州市中药饮片厂,经顺德职业技术学院医学
系陆建林副教授鉴定为真品,用水提取,提取物(XXT)浓度为
11.0 mg·mL- 1;Nω-硝基- L-精氨酸(L- NNA,批号:Sl60901)、
乙酰胆碱(Ach,批号:SA662509)、去氧肾上腺素(PE,批号:
SP59032)、戊巴比妥钠(批号:SN71073)均由美国 Sigma公司
提供;改良Krebs’液,组成为(mmoL·L- 1):NaCl 120,KCl 4.5,
CaCl2 2.5,MgSO4 1,NaHCO3 27,KH2PO4 1,葡萄糖 10,所用试
剂均为分析纯。
1.3 动物
SPF级SD大鼠,♀♂兼用,体质量 200~250 g,由广州中
医药大学实验动物中心提供(动物合格证号:2006A024)。
2 方法
2.1 主动脉环的制备[4]及指标的测定
大鼠用 3%戊巴比妥钠(50 mg·kg- 1)ip麻醉处死,迅速打
开胸腔,剥取胸主动脉,置于盛有预先通以95%O2~5%CO2混
合气体的改良Krebs’液[(37±0.5)℃]的平皿中。将胸主动脉
剪成长度为 3~4 mm的主动脉环,穿于 2根不锈钢钩上,悬挂
于盛有15 mL Krebs’液的浴槽中,并通过张力换能器与生理记
录仪连接。浴槽中持续通以 95%O2~5%CO2混合气体,并保
持温度在(37±0.5)℃。给动脉环加1 g前负荷,每15 min换液
1次,平衡60 min[5]。
在浴槽中加入0.3 µmol PE,待主动脉环产生最大收缩,再
加入 0.1 µmol Ach,如血管能恢复到给药前水平,表明血管的
内皮层是完整的(+E)。用棉签轻轻来回涂擦血管内壁,使血
管内皮层剥脱,重复上述过程,如Ach(0.1 µmol)不能使预先收
缩的动脉环舒张,表明血管内皮层已完全剥脱(- E)。检验合
格的动脉环才可以进行实验,根据实验的要求选择不同的动
脉环。
先以终浓度为 0.3 µmol的 PE使动脉环(+E)收缩,并以其
最大收缩峰值作为对照峰值。按累积浓度法逐渐加入 莶草
提取物(2~12 mg·mL- 1),测定 莶草提取物抑制 PE(0.3
µmol)收缩的浓度-效应曲线。动脉环用Krebs’液反复冲洗至
完全舒张,并平衡 30 min,然后置于含有 NO合酶抑制剂
L- NNA(100 µmol)的Krebs’液中平衡 20 min[6]。平衡后的血
管(+E,L- NNA)与去除内皮的血管(- E)分别重复上述过程,
观察 莶草提取物抑制PE(0.3 µmol)收缩血管的作用。所用
药物均按浴槽最终的浓度计算。
2.2 统计学方法
实验数据用x±s表示,采用配对 t检验。
莶草提取物对血管内皮NO依赖作用的研究
杨雅兰*,陆建林(顺德职业技术学院医学系,顺德市 528300)
中图分类号 R285;R97 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408(2010)27- 2508- 02
摘 要 目的:研究 莶草提取物对血管内皮NO的依赖作用。方法:采用SD大鼠离体胸主动脉环测定血管张力,观察 莶草提
取物对去氧肾上腺素(PE)诱导的动脉环收缩的影响。结果: 莶草提取物能抑制PE引起的血管收缩;当用NO合酶抑制剂Nω-
硝基- L-精氨酸(L- NNA)预处理血管,在 莶草提取物低浓度时其舒血管作用明显削弱(P<0.01),在高浓度时则未见明显影
响。结论: 莶草提取物具有内皮NO依赖性舒血管作用。
关键词 莶草提取物;内皮NO依赖作用;降血压
Experimental Study on Endothelial NO- dependent Vasodilation Effect of the Extracts of Herba Siegesbeck-
iae
YANG Ya-lan,LU Jian-lin(Dept. of Medicine,Shunde Polytechnic,Shunde 528300,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To study endothelial NO- dependent vasodilation effect of the extracts of Herba Siegesbeckiae. METH-
ODS:SD rat thoracic aorta rings were used to observe contraction of blood vessel,and the effects of the extracts of Herba Sieges-
beckiae on the contraction induced by phenylphrine(PE). RESULTS:The extract of Herba Siegesbeckiae could inhibit the contrac-
tion of blood vessel induced by PE. After pretreatment of blood vessel by L- NNA,vasodilation effect of the extracts of Herba Sieg-
esbeckiae was significantly attenuated at low concentration condition(P<0.01)while it had no obvious change at high concentra-
tion condition. CONCLUSION:The result suggests endothelial NO- dependent vasodilation effect of the extracts of Herba Sieges-
beckiae.
KEY WORDS Extracts of Herba Siegesbeckiae;Endothelial NO- dependent vasodilation effect;Anti- hypertensive
*主管中药师。研究方向:中药制剂、药理学。电话:0757-
22810159。E- mail:yhyyl999@163.com
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中国药房 2010年第21卷第27期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 27
3 结果
3.1 莶草提取物对PE诱导的主动脉环收缩作用的影响
按累积浓度法逐渐加入 莶草提取物(0~11.58 mg·
mL- 1),所用药物均按最终浴槽浓度计算,得 莶草提取物抑制
PE(0.3 µmol)收缩的量- 效曲线为 Y=110.559-8.784X(r=
-0.928)。结果表明, 莶草提取物可以抑制PE(0.3 µmol)诱
导的主动脉环(+E)收缩,具有明显的舒血管作用。
3.2 莶草提取物对主动脉环抑制内皮收缩作用的影响
去除血管内皮层
(- E)后, 莶草提取物
(0~11.58 mg·mL- 1)抑
制PE诱导的血管收缩的
作用强度无明显改变
(P>0.05)。 莶草提取
物抑制内皮收缩的作用
见图1。
3.3 莶草提取物对主
动脉环的内皮 NO依赖
作用
用NO合酶(NOS)抑
制剂L- NNA抑制血管内
皮细胞(VECs)NO的生
成,在低浓度时(1.99
mg·mL- 1), 莶草提取物
的舒血管作用被显著抑
制(P<0.01),但随着浓
度增加, 莶草提取物的
这种舒血管作用不再受
到影响(P>0.05)。 莶
草提取物的内皮 NO依
赖作用见图 2。
由图 2可知, 莶草
提取物能够抑制 PE(0.3
µmol)引起的血管收缩,
具有舒张血管的作用。
用 L- NNA阻断内皮 NO
的合成,舒张血管作用曲
线平行右移,且在低浓度
时(1.99 mg·mL- 1),舒血
管作用被显著抑制(P<0.01),表明其舒张血管作用与促进血
管内皮细胞VECs合成NO作用有关。
4 讨论
VECs衬于血管腔的内表面,具有屏障及选择性通透作
用,可分泌NO、内皮素(ET)等多种生物活性物质参与血管舒
缩、抗血栓及细胞增殖等的调节[6]。NO是在NOS催化下形成
的,它通过增加细胞内 cGMP含量,可降低血管平滑肌细胞内
游离钙浓度,使血管舒张。
采用离体主动脉环,排除了神经体液的影响。在收缩状
态下,用Ach可诱导VECs产生内皮依赖性的舒张因子NO。
主动脉环的舒张程度可反映 VECs的功能,NOS抑制剂
L- NNA可以阻断ACh的这种血管舒张反应。因此,去除血管
内皮层(- E)和用L- NNA抑制NO形成,是研究 莶草的内皮
依赖性舒血管作用较适宜的方法。
据报道,腺梗 莶草提取液能使保留神经的兔耳血管舒
张,并能阻断刺激神经引起的收缩血管反应,对离体兔耳血管
则无舒张作用,表明其血管舒张作用是通过阻断交感收缩血
管的神经的影响而产生的[7]。 莶草含有血管紧张肽转变加
速因子酶(ACE)抑制活性成分,其甲醇提取物对ACE抑制活
性达30%~40%[8]。另外, 莶草提取物对大鼠离体血管平滑
肌细胞的钙通道具有阻滞作用,但不能抑制去甲肾上腺素引
起的细胞内“钙储库”中Ca2+的释放[8]。
本研究表明, 莶草提取物能舒张血管,其作用机制可能
为内皮NO依赖性舒血管作用。但随着 莶草提取物浓度的
增加,其对内皮NO依赖性减弱,说明内皮NO依赖性舒血管作
用可能不是 莶草舒张血管的主要作用机制,当其浓度增加到
一定程度,其他作用机制如对钙通道的抑制作用等可能是 莶
草舒张血管的主要作用机制。
综上所述, 莶草降血压作用是多种作用机制共同作用的
结果。本文揭示 莶草降血压作用的机制可能与内皮NO依
赖性有关,但对其更详细的解释需要进一步进行研究。
参考文献
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(收稿日期:2009- 08- 17 修回日期:2009- 12- 27)
100
80
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10 12
XXT/mg·mL- 1



/%
—●—XXT(+E)
—○—XXT(- E)
图 1 莶草提取物抑制内皮收
缩的作用
Fig1 Endothelium- dependent
effect of the extract of Herba Si-
egesbeckiae
100
80
60
40
20
0



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0 2 4 6 8 10 12
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—●—XXT(+E)
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图 2 莶草提取物的内皮 NO
依赖作用
Fig 2 Endothelial NO- depend-
ent effects of the extract of Her-
ba Siegesbeckiae
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