全 文 ：茅莓提取物治疗局灶性脑缺血的实验研究郑永玲　胡常林
　　摘要:目的:观察茅莓对局灶性
脑缺血预防性治疗作用 , 并初步探
讨其作用机制。方法:采用双侧颈
总动脉结扎制备大鼠局灶性脑缺血
模型 ,于术前给予茅莓灌胃 , 测定其
对 TT 、PT、APTT 、FBG 的影响 , 并
取脑 进行 病理 组织 学 观察 和
HSP70 免疫组化测定。 结果:治疗
组较对照组脑梗死面积 、局灶病理
损害减轻 , 对 TT 、APTT 、FBG 的改
变明显(P < 0.05), 缺血 灶内
HSP70 表达较对照组减少 , 其机制
可能是减轻了脑组织的缺血性损
害 ,下调了 HSP70 的表达有关。结
论:提示茅莓具有抗凝和促凝之双
重功能。
　　关键词:局灶性脑缺血　茅莓
　实验研究
The Experimental Study of Focal Cerebral IschemiaTreat-
ed by Rubus Parvifolius
The sencond affiliated hospital of chongqing medical university(400010)Zheng
Yongl ing et al
Abstract:Objective:To observe the therapeutical ef fect of rubus parvifolius on fo-
cal cerebral ischemia , and discuss the mechanism of rubus parvifolius.Methods:By
using a experimental cerebral ischemia model , give medicine befo re operation , then
test the ef fect on thromb in time(TT), kaolin prothrombin time(APTT), fibrino-
gen(FBG).Results:Rnbus parvifolius significantiy reduced the cerebral infarction
area and fhistopathological damage and changed TT 、APT T 、 FBG.down-regu-
lated the expression of HSP 70 , the expression of HSP 70 is probably related to the
neuroprotective mechanism.Conclusion:The Rubus parvifolius had double-func-
tion of anticoagulant and procoagalant.
Key words:Focal cerebral ischemia　Rubus parvifolius　The experimental study
　　中图分类号:R282.7　R282.5　R743.31　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-6468(2002)02-0037-03
　　茅莓(Rubus parvifolius)据《本草拾遗》记载 , 具有止血活血 、
散瘀定痛 、清热解毒之功效 , 可内服 、外敷。属于化瘀止血药 ,通
过观察茅莓对纤溶凝血系统的影响和对缺血性脑梗死的作用 ,
以了解其是否具备活血化瘀的活性 , 从而扩大活血化瘀药研究
和应用的范畴。
1　材料与方法
1.1　动物　健康成年 Wistar 大鼠 , 体重 280g ～ 320g , 雌雄各
半 ,由重庆医科大学实验动物中心提供。动物组随机分为两组 ,
每组 16 只。缺血对照组:用 1ml生理盐水每日 1 次灌胃 , 连续
3d , 术前 1h 灌胃 1 次;茅莓治疗组:用 1g/ kg 每日 1 次灌胃 , 连
续 3d ,术前 1h 灌胃 1 次[ 1] 。
1.2　试剂与仪器　茅莓水提取物(由重庆医科大学药理学教研
室提供),HSP70 试剂盒(武汉博干德生物技术公司), 凝血纤溶
系统试剂盒:凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分
凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FBG)(上海太阳生物技术
公司),印度墨汁 , TTC(上海生工)台式离心机 , 恒温水浴箱(上
海医疗器械厂), 凝血仪(德国 TECO), 病理图像分析系统(北京
天地公司)。
1.3　动物模型的建立　采用两血管闭塞合并放血法 , 造成急性
脑缺血[ 2] 。实验动物先用 3.5%水合氯醛 0.35g/ kg 腹腔麻醉
后 ,仰卧于手术台。经颈正中切口 , 钝性分离双侧颈总动脉
(CCA),丝线结扎悬挂 30min , 同时断尾放血 0.8ml ,然后松开结
扎线 10min , 再结扎双侧 CCA 30min 后松开 , 缝合皮肤。术后给
予进食进水。
2　观测指标
2.1　凝血纤溶系统 TT 、PT、APT 、FBG 测定　各组于造模前从
股动脉取 1.8ml动脉血 , 用 0.2ml的 0.019mol/ L 枸橼酸钠抗凝
(抗凝剂∶血液=1∶9), 3000r/min 离心后取上清液待测 , 于术后
24h 从左心室采血同样处理后待测。均用德国 TECO 血凝分析
仪测定 TT 、PT 、APTT 、FBG 。 TT 、PT 、APTT 的单位以 s 表示 ,
FBG以 mg/dl表示。
2.2　脑梗死面积测定　术后 24h 采血后处死 , 取 6 只大鼠大
脑 ,去掉小脑和脑干 , 冠状切为 0.3cm 的脑片 , 观察有无出血
灶。将脑片浸入 2%TTC 溶液中染色 , 恒温水浴箱 37℃30min
后取出 , 置于 10%的甲醛溶液中固定。正常脑组织为红色 , 梗
死组织为白色 , 利用图像病理分析系统测定梗死面积。
2.3　免疫细胞组织化学检测　每组取 6 只动物于术后 24h , 用
10%水合氯醛麻醉大鼠后仰卧固定 ,快速开胸暴露心脏 , 先用生
理盐水 100ml～ 200ml快速冲洗至流出的血液变清 ,再灌注 4%
多聚甲醛 0.1mol/ L、磷酸盐缓冲液 200ml～ 250ml约 0.5h ～ 1h ,
取脑块置于上述灌注液和 20%的蔗糖溶液中各 24h , 然后在冰
冻切片机上切成 6 ～ 8μm 和 40μm 的切片 , 40μm 切片采用 ABC
法 , 即将 40μm 的切片经 0.2%T riton-100 , 0.03%H2O 2甲醇处
理 30min , 加入封闭血清 1∶50 牛血清白蛋白 20μl 37℃ 1h , 然后
分别加入一抗:鼠抗 HSP70 单克隆抗体(1∶200), 加入二抗:兔
抗鼠 Ig(1∶50),然后加入三抗兔抗 ABC(1∶50), 热休克蛋白测
试盒系武汉博士德公司产品。上述三抗加上切片后分别需置于
室温下 0.5h ～ 1h ,每步须经 PSB 充分洗涤 , DAM 呈色 , 酒精梯
度脱水 , 二甲苯透明 ,中性树脂封片 , 光学显微镜下观察 HSP70
的表达 , 用病理图像分析系统计算免疫染色阳性细胞数。
2.4　病理学检测　6μm ～ 8μm 经 HE 染色后 , 在光镜下观察脑
组织的病理变化。
·37·中医药研究 2002年 4月第 18卷第 2期　RESEARCH OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE　　Vol.18 No.2 Apr.2002
2.5　微血管形态学观察[ 3] 　采用墨汁灌注观察方法 , 每组取 4
只大鼠 ,先用 150ml生理盐水快速冲洗至血液变清 , 再用 30ml
右旋糖酐和 70ml印度墨汁灌注至大鼠口 、鼻 、耳 、舌变黑为止 ,
断头取脑固定后 , 切为 25μm 的石蜡切片 ,光镜下观察微血管再
通情况。
3　统计处理
数据用(x±s)表示 , 采用配对 t 检验 , 用 SSPS 统计软件包
进行分析。
4　结果
4.1　凝血纤溶系统的检测结果　见表 1。
　　治疗组灌胃 3d 后可以看出 T T、APTT 、FBG 含量较对照组
高 , 当双侧颈总动脉结扎造成前脑缺血性损害后 , 可使 TT、
APTT 延长 , 且 FBG 的降低与对照组相比均有显著性差异。
4.2　大鼠局灶性脑缺血 24h 后脑梗死范围及药物的影响　见
表 2。
　　茅莓组的脑梗死面积明显低于缺血对照组。
表 1　凝血纤溶系统的检测结果
组别 　　　　　　　　　　前　　　　　　　　　　
PT TT APT T FBG
　　　　　　　　　　后　　　　　　　　　　
PT T T APTT FBG
茅莓治疗组 14.28±0.27 23.28±1.10# 22.63±0.43# 288.50±25.40# 14.08±0.39 48.30±1.93＊# 24.71±1.68＊ 170.66±14.38＊#
缺血对照组 13.68±0.11 20.70±0.37 21.40±1.19 229.83±40.18 12.40±0.23＊ 21.83±1.36 18.88±0.51＊ 470.00±17.04＊
注:各组前后比较 , ＊P<0.05;治疗组与对照组比较 , #P <0.05
表 2　脑梗死范围
组别 例数 梗死面积/ %
茅莓组 6 5.78±0.88#
对照组 6 10.51±2.37
　　注:治疗组与对照组相比 , #P<0.05
4.3 　HSP70 免疫细胞阳性数结果　见表 3。茅莓治疗组
HSP70 免疫细胞阳性数少于缺血对照组 , 两组比较有显著性差
异。
表 3　HSP70免疫细胞阳性数
组别 例数 免疫细胞阳性数/ %
茅莓组 6 55.60±6.62
对照组 6 22.50±4.41#
　　注:治疗组与对照组比较 , #P<0.05
4.4　病理学改变　对照组光镜下观察发现组织间隙增宽 , 水
肿 ,有空泡形成 , 神经元细胞核缩小 ,甚至溶解消失。而治疗组
可以看到组织间水肿较对照组轻 ,细胞间隙改变不明显 ,神经元
细胞核大小基本正常 ,核较深染 , 病灶中心区有少许空泡形成。
4.5　微血管墨汁灌注观察[ 3] 　对照组可以看到有较多微血管
没有显影 , 缺血性梗死灶范围较大 , 靠近病灶中心区血管增粗。
而茅莓治疗组其缺血性梗死范围较对照组明显减少 , 病灶中心
区附远血管显影良好 ,说明血管闭塞轻或没有闭塞形成。
5　讨论
缺血性中风是严重威胁人类生命和健康的常见病 、急发病 ,
有发病率 、病死率 、致残率高的特点。我们采用两血管闭塞法制
备的急性脑梗死模型 ,模拟了临床上由于心功能不全 、脑血管严
重狭窄或阻塞 、血液低灌注引起的脑循环障碍 , 造成不同程度的
脑组织缺血性损害 ,对于探讨人类缺血性脑损伤 、评价抗脑缺血
药物的疗效有价值。而祖国医学也认为血瘀是病邪的核心[ 4] ,
实验结果也看到脑梗死形成后 ,血液中纤维蛋白原含量增高 ,血
液处于高凝和高粘滞状态。如果及早投以活血药 , 祛除局部瘀
血 ,促进血肿的吸收 、消散 , 使血管畅通 , 侧支循环形成 ,改善梗
死周围血液循环 ,恢复缺血区的血供 , 限制梗死面积扩大 , 保护
脑组织和细胞 ,有利于神经功能的恢复[ 5] 。
茅莓是从传统中药中提取的一味中药。现代药学分析茅莓
含鞣质 、黄酮甙及糖类[ 6] 。认为其具有活血消肿 、散瘀 、止血之
功效。从实验中可以看出茅莓确实具有活血即抗凝作用 , 能够
使 TT 、APTT 延长 , 从而激活纤溶系统 , 导致血栓溶解的作用。
同时也看到其能增加纤维蛋白原的含量 ,而 FBG 又是血小板 、
红细胞聚集的关键血浆因素 , 又可看出其有一定的保凝之功效 ,
使凝血纤溶保持平稳。但从脑缺血性损害发生后 , 其主要作用
体现在抗凝作用上 , 起到活血化瘀之功效。实验证实茅莓确实
具有止血和活血化瘀作用 , 这似乎是一对矛盾。但祖国传统医
学认为:“瘀血不去 , 则血不归经 , 所以出血不止 , 若以化瘀和止
血相结合 , 就能显著提高止血效果 , 且能止血而不留瘀” 。 这样
就将化瘀止血联系并统一起来[ 7] 。现代医学证实 , 在抗凝治疗
时 , 维持 TT 在正常对照的 1.5 ～ 2.5 倍 , APTT 较正常对照延
长 1.5 ～ 2.5 倍 ,而纤维蛋白原不低于 1.2g/ L ～ 1.5g/ L ,即可获
得最佳抗凝溶栓效果 , 又不至于导致出血等并发症[ 8] 。从我们
的实验结果来看 , 茅莓既能激活纤溶系统 , 又保持了与凝血系统
的平衡。提示其具有抗凝和促凝之双重功效。
热休克蛋白(HSPS)是细胞内蛋白的一族。在多种损伤性
应激原(如热休克 、缺血 、缺氧 、pH 值改变 、感染 、缺血再灌注等)
的作用下合成的一种具有细胞保护作用的蛋白质。其表达后具
有积极的生物意义[ 9] 。其中研究最多最广泛的是 HSP70。任
何脑区缺血后 , 缺血脑组织的神经元 、星形胶质细胞 、血管内皮
细胞都可以表达。而且在一定缺血范围内 , 缺血程度相对重的
区域其表达亦越多 , 即应激程度与其诱导成正比[ 10] 。 研究表
明 , 对缺血最敏感的细胞是神经细胞 ,其次是胶质细胞 ,最后是
血管内皮细胞。多数学者研究认为 , 缺血再灌注模型 HSP70 表
达的高峰是再灌后 24h[ 11 , 12] 。故本实验亦选择再灌后 24h 作
为观察时间点。发现缺血对照组 、治疗组表达 HSP70 的主要是
神经元细胞 , 也说明这种缺血模型造成的缺血性损害的程度不
很严重。缺血对照组皮质神经元表达 HSP70 较茅莓治疗组多 ,
两组 HSP70 免疫染色阳性细胞数有显著性差异。提示预先给
予茅莓可以使额叶神经元受到的缺血缺氧的应激打击减轻。从
而减轻神经元的缺血性损害。茅莓在全国各地分布广泛 , 药源
丰富 , 其临床开发 、研究和应用具有广阔的前景。
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作者简介
　　郑永玲 , 女 , 1970年生 。现工作于重庆医科大学附二院 , 神
经病学研究生(邮编:400010)。
胡常林 , 重庆医科大学附二院教授。
收稿日期:2001 12 04
本文编辑:贾林山
党参对兔的下丘脑和大脑皮质中生长抑素的作用
陈少夫　刘维新　周　卓
　　摘要:目的:为探索治疗巨人症或肢端肥大症的药物 ,我们观察了党参对兔的下丘脑和大脑皮质中生长抑素的作用。方法:将白
兔 40 只分别灌喂党参煎剂或蒸馏水 , 1个月后用放免法测定下丘脑和大脑皮质中生长抑素的浓度。 结果:党参对兔的下丘脑 、大脑
皮质中的生长抑素无任何影响 , P>0.05。结论:提示党参对巨人症或肢端肥大症的生长激素过多分泌可能无作用。
　　关键词:党参　生长抑素　生长激素
　　中图分类号:R282.7　R285.5　R584.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-6468(2002)02-0039-02
　　生长抑素(Soma tostatin)不仅存在于下丘脑 , 而且广泛分布
于脑 、胰 、肠道神经细胞 ,是一种典型的脑肠肽 , 目前已证实生长
抑素对机体的几乎所有生理性内外分泌反应均起抑制作用 , 并
有多种药理学作用 ,作为生长激素释放抑制因子 , 它抑制下丘脑
释放生长抑素[ 1] 。本研究观察了党参对兔的下丘脑 、大脑皮质
中生长抑素的影响 ,以探索党参对下丘脑和大脑皮质中生长抑
素的调节作用。
1　材料与方法
1.1　动物　选择日本大耳白兔 40 只 , 体重 2kg～ 2.5kg , 雌雄
不拘。
1.2　药物　党参(Codonapsis pilosula)购自中国医科大学第二
临床学院中药局 , 取党参 100g , 加适量蒸馏水浸泡 30min 后煎
30min , 过滤 ,再加适量蒸馏水煎 30min过滤 , 两次滤液后并浓缩
至100ml , 得到浓度 100%的煎剂 , 其 pH 值为 5.24 , 蒸馏水的
pH 值为 6.70。
1.3　方法
1.3.1　实验步骤　将日本大耳白兔 40 只 ,随机分成两组 , 实验
组和对照组 ,实验组灌喂党参煎剂 0.8g/ kg 体重 ,对照组灌喂蒸
馏水 0.8g/ kg 体重 , 每日 1 次 , 1 个月后在硫喷妥钠静脉麻醉
下 ,心脏穿刺放血 ,处死白兔 , 开颅 ,切除下丘脑及大脑皮质 、用
生理盐水清洗后秤湿重。
1.3.2　组织的提取　取大脑皮质及下丘脑组织各 1块 , 湿重约
100mg ,分别于煮沸的生理盐水中煮沸 3min , 取出组织称重 , 加
1N 冰醋酸 0.5ml于匀浆器中匀浆提取 , 然后再用 1N 的 NaOH
0.5ml中和 , 4℃离心 , 3000r/min , 30min 后取上清液 、-40℃保
存 , 待测组织中生长抑素浓度。
1.3.3　生长抑素的放免测定[ 2] 　生长抑素放免药盒 , 由北京协
和医院提供。将冷冻的组织匀浆样品 , 在 2 ～ 6个月内用放免方
法测定组织中的生长抑素浓度。
1.4　统计学处理　应用两个样本的均数差异 t 检验法 ,进行统
计学处理 , 数据均用(x±s)表示。
2　结果
　　党参对兔的下丘脑及大脑皮质中生长抑素的作用见表 1。
表 1　党参对兔下丘脑和大脑皮质中生长抑素的作用
组别 n 大脑皮质生长抑素浓度(Pg/mg)
下丘脑
生长抑素浓度(Pg/mg)
实验组 20 4.83±1.52■ 2.31±0.58■
对照组 20 5.17±1.86 2.57±0.42
　　注:与对照组比较 , ■P >0.05
　　由表 1 可以看出 , 给兔灌喂党参煎剂 1 个月后大脑皮质及
下丘脑中生长抑素浓度与对照组比较 ,差异不显著 , P >0.05。
提示党参对免的大脑皮质及下丘脑组织中生长抑素无影响。
3　讨论
党参为桔梗科植物党参的干燥根 , 中医学认为党参具有补
·39·中医药研究 2002年 4月第 18卷第 2期　RESEARCH OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE　　Vol.18 No.2 Apr.2002