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薏苡叶枯病病原菌的分离鉴定与生物农药筛选



全 文 :略 芘 ? 省戌Pe s t i c i deSc i enceandAdmin i st rat i on20 1 6 , 37 ( 9 )發-來_
荖 苡 叶枯病病雇 菌 的分 禽|走与
生 物表药 鄉迷
张礼维 , 李 思梅 , 陈 曦
(黔西南 州植保植检站 , 贵州 兴义 562400 )
Ident ifi ca tiona ndIso lat ionofCo ixLeafB l igh tP atho genandScreeningofBiologica l
Products
ZhangLiwe i ,LiSime i ,ChenX i( Pl an tPro tec t in gSta tion ,Gu i zhouXingy i562400 , Ch i na )
Abstrac t:Lea fbl igh tisoneo f thema ind iseas esonc o ix .To id en t i fythepa thogenofc o ix lea f
bl igh tandeffect iv e lycon t ro lt hi sd i sea se , thepa t hogenwe re iso l a t edandpur if iedfromthed i s ?
ea sed leaves .Thepa t hogenwa s id e n t i fi edacc o rd i ngt oth ec ha racte ri s t i csoffunga lmo rph ology.
Sevenbi o log i c alproduc tswereu sedtoc ond uctt hetox i c i tyte s tsont hepa thogenan d thetox i c i ty
eq uat ionwase s tabl i shed .There su l t sshow edtha tt hepa thogenwa sid ent i fi edasBi po lar i s.
Phenazi ne - 1 -c arboxy l i cac id 1%SCandZhongshengmyc i n5%w erepro vid edgoodcontroleffect
w i th the i nh ib i t i onra teo f 1 00%and97 .6 5%and theEC50of 6 .9 1 83 (Jig/mL an d1 9 . 8566 fxg/mLre ?
spec t i v e ly .
Key words :c oi x ; le a fb l igh t ;b i o log i c a lm ed icamen t;pa thogeni den t i fi c a t i on ;to x i c i t yt es t
摘 要 : 叶枯 病是危 害 薏 苡 的 主要病 害之一 , 为 明 确 引 起薏 苡 叶枯病 的病 原 菌 种 类 , 有 效
控制叶枯病的发生 , 本试验对病原 菌进行 了 分 离 、 纯化及形 态 学 鉴定 , 选 用 常 用 的 7种 生物
农药 对病 原 菌 进行毒 力 测 定 , 并 建立毒 力 回 归 方程 , 结果 表 明 , 通过 分 离 鉴 定 明 确该 致病
菌 为 平 脐蠕孢属 (执po /arb ) ;1% 申嗪 霉 素悬 浮 剂 和 5% 中 生 菌 素 对病 原 菌 的抑 制率 较 高 ,
毒 力 较强 , 抑 制率 分别 为 100% 、 97 . 65% ,EC%分 别 为 6 .9 1 83和 1 9 . 8566pg/ni L。
关 键词 : 薏 苡 ; 叶枯病 ; 生物农药 ; 病原 鉴定 ; 毒 力 测 定
中 图分类号 : S4 82 . 2 ;S4 8 1 + .9文 献标识码 : A文章编 号 : 1 002-5480( 20 1 6 ) 09-45 -0 5
薏苡 为 禾 本科一年 生或 多 年生 薏苡 属 草本兴仁县 和安 龙县 为 主要 种 植 区 。 近 年 来 , 随市
植物 , 别 名 薏仁 、 六 谷子 、 珍珠米 等 。 薏苡是场需求 增加 , 种 植面积的 不断扩大 , 病 虫害 发
药食兼用作物 , 因 其具有 丰 富的 营 养 、 独特 的生 日 趋 严重 , 其 中 以 叶 枯病 的 危害最 为严重 ,
药理作用 而 日 益受 到人们 的 青睐 | 1 ] 。 贵州 省 黔西对薏苡产量和 品 质造 成影响 。 目前还 没有关 于
南州 薏苡栽培历史 悠久 , 种 植 区域 分布 广 , 以薏苡叶枯病生物防治 的 报道 , 本试验对薏苡 叶
收稿 日 期 : 20 1 6-06-08
基金项 目 : 薏苡病虫发生规律及绿色防控技术推广应用 (黔西 南州科字 [ 20 1 3 ]25号 )
作者 简介 : 张 礼维 , 女 , 硕士 , 主要从事 植物病 虫害防 治 工作 。 联 系 电话 085 9 -3 1 2292 9 ;E -ma i l :9 92823 854@ qq .
com 〇
- 45-
应 用 技 术略 疡 戌Pe s tic id eSc i enc e andAdm i n i s tra ti on2 0 1 6 , 37 (9 ) 、 ,
枯病原菌进行 了分离鉴 定 , 选 用生物药剂 对病 1 . 2 . 1 . 1 病原菌的 分离与纯化 采用组织分离
原菌进行室内 毒 力 测定 , 确定 引 起薏苡 叶枯病法 1 2]分离病原菌 , 选取感病薏苡的 叶 片 , 从病健
的病原菌种类 , 为薏苡 叶枯病 的 绿色防控提供交界处切取4 ̄5mm 的感病组织 , 放人 70%的 酒精
理论依据 。溶液中 消毒 , 浸泡约 30s后使用无菌水 冲洗 3次 ,
1 材料与 方法 移人 PDA培养基平板 中 , 251下培养 3 ̄4d 。 将分
1 . 1 供试材料 离得到 的病原菌进纯化 、 保存 。
1 . 1 . 1 材料来源 从兴仁 、 安龙 薏苡 种植基地1 .2 .I .2 病原菌的鉴定 在PDA平板中 央接种
采集薏苡叶枯病病株 , 进行病原菌分离与 鉴定 。直径 为5mm的病原菌菌饼 , 置于 25T恒温培养箱




2 供试药剂 供试药剂 共 7种 , 分别 为 5%中 , 每 日 观察病 原菌的 菌落形态 、 生长情况及
氨基寡糖素水剂 ( 海南正业 中 农高科股份有 限颜色 。 培养约 1 5d后 , 在靠近菌落边缘处用接种
公司 ) 、 8%宁南霉素水 剂 (德强生物股份有 限公针挑 取少量 菌丝 , 制 成水浸 片 , 光 学显 微镜 下
司 ) 、 5% 中生菌素可湿性粉剂 (福建凯立生物制观察病原 菌的分 生孢 子 、 产孢细胞 、 大 型分生
品有限公司 ) 、 3%中生菌素可湿性粉剂 (福建凯立孢子 、 小 型分生孢子等 的 产生情况 及特 征进 行
生物 制 品 有限 公 司 ) 、 3%多抗霉 素 可湿性 粉剂鉴定 。
(兴农药业中 国有限公司 ) 、 20%井冈霉素水溶性粉1 . 2 .2 室 内药剂 筛选 采用生长速率法进行室
剂 (浙江钱江生物化学股份有限公司 ) 、 1% 申 嗪内毒 力测 定 , 根据供试药剂 的 田 间推荐使用浓
霉素悬浮剂 (上海农乐生物制 品 股份有限公司 ) 。度 , 各设 5个浓度梯度 , 以 每个浓度 为 1 个处理 ,
1 . 2试验 方法以不 含药 的培养基 为对照 , 每个处理重复 3 次 ,
1 . 2 . 1 病原菌的分离与鉴定各药剂的浓度 ( 表 1 ) 。
表 1 供试药剂 的浓度设计
药剂名 称 供试 浓度 ( | xg/mL )
5%氨基寡糖素水剂400 、 200 、 100 、 50 、 25
8%宁 南霉素水剂 20 0 、 1 00 、 50 、 25 、 1 2 . 5
5%中生菌素可湿性粉剂 40 0 、 200 、 10 0 、 50 、 25
3%中生菌素可湿性粉剂 4 00 、 200 、 10 0 、 50 、 25
3%多抗霉素可湿性粉剂1600 、 800 、 400 、 200 、 1 00
2 0%井冈 霉素水溶性粉剂 80 0 、 400 、 200 、 1 00 、 50
1%申 嗪霉素悬浮 剂 40 0 、 200 、 100 、 50 、 25
病原菌于25丈培养4d后 , 用打孔器在菌落边jfp _ f _( 对照菌落 直径 ) _ ( 处 理 蔺落 直径 -〇 .5 < ‘m )
缘取直径为5mm的菌饼 , 放人 已经配置好 的含药 对照菌落直径-〇 .5cm
平板 中央 , 以加等量无菌水 的平 板接 菌饼作为X l (K)%
对照 , 于 25T恒温箱中 培养7d后用十 字交叉法测2
量菌落直径 , 取均值 , 计算抑制率 3 使用 DPS7 .052 -1 病 原 菌 的分 离 与 鉴定 通过组织分离法仅
软件处理数据 , 将抑 制 率换算成 几率 值 , 以 药分离得到 一种病原菌 , 该病原菌在 PDA培基 上
剂浓 度对数为 横 坐 标 , 抑 制 几率值 为 纵 坐 标 , 2 8T条件 下培养 5d 后 , 菌落平 均直径 为 5 .5cm ,
求 出 毒力 回归 方程及 EC% 计算公式如下 :呈 近 圆形 , 墨绿 色 , 菌丝绒 毛状 ( 图 I ) ; 病原
- 46-
略 岛 料冷 砹Pe s t ic ideSc i en ceandAdm in i st rat ion20 1 6 , 3 7 ( 9 )… 霄_接_ 。采
 
阐 分 ' i :. 孢 子 i<: 椭 n 形 、 按 形 . i 1 ! : 或 ¥ 丨 1 丨 丨 , 5  ̄ 丨 1
个隔 ( 图 2 ) 。 根据病 原菌形态学 特征 , 初 步确/
定分离得到的病原菌 为平腦孢属 。¥丨
(% ^M'二^
2 .2 .17种生物农药对病 原菌麵生长 的 影 响
图 1 病原 菌菌落形态山 表 2可 知 , 7 种生物农药 对病 原菌 菌丝的生长
左 为 菌落正面 , 右为 菌落 反面 均具有不 同 程度 的 抑 制 作用 , 且抑 制 作用 随 药
表27种 生物 农药对病原 菌菌 丝 生长 的 影 响
药 剂名 称浓度 ( pg/mL )平均菌落直径 ( cm )抑制率 (% )
400 0 . 5 100
200 0 . 7 97 .24
1 %申 嗪霉素悬浮剂1 00 1 . 1 39 1 . 3 1
50 1 .73 8 3 .03
25 2 .43 7 3 . 3 8
400 1 .738 3 . 03
200 2 .47 72 . 8 3
3%中生菌素 可湿性粉剂1 00 3 .27 6 1 . 79
504 . 150. 34
2 5 4 .5 7 43 . 86
400 0 .67 97 . 65
200 1 . 290 . 34
5% 中生菌素可湿性粉剂1 00 1 . 7 83 . 45
5 0 2 .3 2 74 . 90
25 3 .7 754 . 90
200 5 . 5 3 1 . 03
1 00 5 . 6 29 . 66
8%宁南樺 素水 剂505 .6329 . 24
25 6 . 53 1 6. 8 3
1 2 . 5 6. 57 1 6 . 28
8005 . 235 . 1 7
400 5 . 73 27 . 86
20%井冈霉 素 水溶粉剂200 6 .48 1 7 . 52
1 006 . 521 6.97
50 6 . 58 1 6 . 1 4
- 47-
P es t ic ide Sc i enceandAdmin is t rat i on20 1 6 , 3 7 ( 9 )
续表
药剂名 称浓度 ( pg/mL )平均菌落直径 ( cm )抑制率 (% )
1600 0 .67 97 .66
800 1 .4 786 .6 2
3%多抗霉素 可湿性粉 剂400 2 .0 8 7 8 .2 1
200 3 .0 864 .4 1
1 00 3 .6 2 56 .9 7
400 1 .586 .2 1
200 2 .57 7 1 .45
5%氨基寡糖 素 水剂 1 00 3 .2 76 1 .79
5 0 4 .2 5 1 . 03
254. 5743 . 86
CK- 7 . 75 -
剂浓 度的增 加而增加 。 其中 , 1 % 申 嗉霉 素悬浮试7种生物农药 中 , 1% 申 嗪霉素悬浮剂对病原菌的
剂 的抑 制 效果最好

抑 制 率可 达 1 00% ; 其次 是毒 力最强 , 其E C 5?最小 , 仅 为 6 .9 1 83 fig/m L ; 其
3%多抗霉素可湿性粉剂 、 5% 中生菌素可湿性粉次是5%中生菌素可湿性粉剂 , EC%为 1 9 .8 566fig/mL ;
剂 、 5%氨基寡 糖素水 剂 和 3% 中 生 菌素可湿性粉3%中生菌素可湿件粉剂 、 5%氨基寡糖素 水剂 和
剂 , 抑制率最高分别为 97 . 66% 、 9 7 .6 5% 、 8 6 .2 1% 、3%多抗霉素 可湿性粉 剂毒 力也较强 , EC%分 别为
83 .03% ;20%井冈 霉素 水 溶性粉剂 和 8%宁 南 霉53 .7596 、 55 . 3507和 96 .2 274( jig/mL ;8%宁 南霉
素 水 剂 的抑制 效果较差 , 在 最高浓 度下 , 抑 制素水剂 和20%井 冈霉素水溶粉剂对病原菌的毒 力较
率分別 为 35 . 1 7%和 3 1 .03%。低 , EC%分 别 为 2496 .2446 和 70 60 .6787 |xg/m L
2 .2 .27种生物农药对病原菌的毒力 测定 在供 (表 3 ) 。
表 37种 生物农 药对病原 菌菌 丝 生 长 的 回 归 方程及ECS ,
农药毒力 方程EC so( pg/mL )相关系数
1% 申嗪霉 素悬浮剂Y=4 . 2 5 2 2+0 . 8903X 6 . 9 1 8 3 0 .9970
5% 中 生菌素 可湿性粉 剂Y=3 . 623 3+ 1 .0607X 1 9 . 85660 . 99 11
3%中 生菌素 可湿性粉 剂Y =3 . 557 9+0 . 8334X 53 . 7596 0 .99 48
5%氨基寡 糖素水剂Y=3 . 44 66+0 . 89 12X 55 . 35070 . 9834
3%多抗霉素 可湿性粉 剂Y =2 . 9725+ 1 . 0223X 96 . 2274 0 . 9887
8%宁南霉 素水剂 Y=3 . 5 000+0 .44 15X 2496 . 24460 . 904 4
20%井 冈霉 素水溶粉 剂Y=2 . 9726+0 . 5268X7060 . 678 7 0 . 92 54
3 结论与讨论 但本试验分离得到 的 病原菌 的形态特征 与该报
根据病 害诊断和 病 原菌形 态鉴定 , 初步将道存在一定 的 差 异 , 同 属 不 同种 。 此外 , 本研
所分离得到 的病原菌鉴定为平脐蠕孢属 (执 究并未进行病原菌的致病性检测 及 分子学鉴 定 ,
/ark ) , 这 与薏苡 叶枯病 的相关报道基本 相 符'因此 , 还需进一步开展相关工作 , 完善病原菌
- 4 8-
略 祐 iffa 有砹Pest i c id eSc i enceandAdm i n i stra t i on20 1 6 . 3 7 ( 9 )应

用 技 术
的 鉴定 工作 , 提高 鉴定 的 准确 性 , 为 薏苡叶 枯最 高分别 为 1 00% 、 97 .6 5% , EC s〇分别 为 6 .9 1 83
病 的防治奠定基础 。、和 1 9 .85 66 ( jL g/mU 因 此 , 在 田 间可考虑这 2种药
药 剂 防治 是一种 重要 农业病 害控 制措施 ,剂进行薏苡 叶枯病的绿 色防控 。
但 薏苡作为一种食药两用的作物 , 对农药 残 留 参考 文 献
的 要求很严格 。 目 前 , 关于薏 苡叶 枯病的 生物
防治 尚 未见报道 , 田 间 多 采用 化学 药剂进 行防 [ 丨 ] 黄锁 义 , 李 荣 , 潘 勇 等 . 惹s研究的 新进 展m . 食品 研究
治 , 防 治效果不理想且农药残 留较 高 生 物 农¥#? ’ 20 1 2 ’ 3 3 ( 1 1 ) : 22 3-22 7 ’
药具有安全 、 有效 、 无污染等特点 , 与保 护生 [2 1 方中 达 ._研究方 法 ( 第
=版瞬 北京 : 中 国 农业 出
版社 , 1 998 .态环境 和 社会协调 发展 的 要求 相符合 丨4丨 。 本试 -睑 红 魏叶枯病 和 叶 斑病 调韵病 原鉴細 中 国■ 的 7种药剂 均为 生物农 药 , 试 验结果表 明 , 随导刊 ,腿 ( 6 ) : 5_ 7 .
7种生物药剂 对薏苡 叶枯病病原菌均有一定 的抑


j 陈旭玉 , 何 其光 ,甘 炳春 . 广 蕾 吞 棒孢霉 叶斑病结 抗菌
制作用 , 其 中 1 % 申 嗪霉素悬 浮剂和 5%中 生菌素的 分 离 鉴 定 及 生 物 农 药 的 筛 选 [J ] . 江 西 农 业学 报 ,
可湿性粉剂 抑制作用较好 , 毒力 较 强 , 抑制 率20 1 2 , 2 4 ( 6 ) : 64-66 .
趺盟 同 意限釗 草甘膦 的使用
欧盟 成 员 国投 票支持 限制 使用 除草 剂 草 甘盟的官 方网 站上公示 。 在欧洲化 学品 管理 局评
膦的 提议 。 该提议还包括在欧盟 范 围 内 禁用 草估其致 癌等 级期 间 , 企业可 以 申 请 丨 8个 月 的登
甘 膦 产 品 中 的 助 剂 - 聚 乙 氧 基 化 动 物 脂 胺记批准的 延 期 。 目前 刚刚开 始 对这些措施 不确
( P0EA ) , 同 时 要 求 欧盟成 员 国在 公 共范 围 内定性的 讨论 , 但委 员 会迫切需要 支持 。 法 国 已
“最小化 ” 使用草甘瞵 , 以 及加强收获前使用的经撤销 了 含有 P0EA产品 的登记 。
监督管理 。 这些措施在开 始实 施前 , 需要在 欧 ( 周 欣欣 译 自 《Agrow》 N o .20 1 607 1 8 )
- 49-