全 文 :AGRICULTURE AND TECHNOLOGY 1
小麦麸中黄酮的乙醇提取工艺研究
刘洋 1,詹冬玲 2,修雪 2,郭向明 3*
(1. 吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林 吉林 132022;2. 吉林农业大学食品科学与工程学院,吉林 长春 130018;
3. 吉林化工学院科研处,吉林 吉林 132022 )
摘 要:本文采用有机溶剂乙醇提取法,从麸皮中提取黄酮。通过单因素以及正交试验,研究乙醇体积分数,料液比,提取时间对黄
酮提取率的影响,并对提取条件进行了优化,结果表明:乙醇浓度 80%,料液比 1:50,温度在 50℃条件下浸提 2h,提取效果最好,
黄酮提取率为 1.29%。
关键词:麦麸;黄酮;提取
中图分类号:O626.3 文献标识码:A
1 前 言
小麦是世界上种植最早、种植面积最广泛的粮食作物之一,
麦麸,即麦皮,片状或粉状,是小麦干磨加工面粉过程中的副
产品,约占小麦的 14.5%[1],富含膳食纤维和B族维生素等多种
人体必需的营养元素,现代研究表明麦麸中有效成分可改善大
便秘结,同时促进脂肪及氮的排泄;麦麸高纤维成分还可以降
低粪便中类固醇的排泄,使血清胆固醇下降,动脉粥样硬化的
形成减慢;可有助于预防结肠、直肠癌等多种肠道疾病 [2-3]。
黄酮类物质(简称类黄酮)是存在于自然界的一大类化合
物,属植物次级代谢产物,至今已分离鉴定出 4000 多种,是
自然界药用植物中主要活性成分之一 [4]。天然黄酮类物质多以
苷类形式存在,并且由于糖的种类、数量、联接位置以及联接
方式的不同可以组成各种各样黄酮苷类 , 组成黄酮苷类的糖类
包括单糖、双糖和酰化糖 [5]。黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲
醇等极性强的溶剂中;但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂
中。天然植物中提取出的黄酮类物质,经研究证实具有消炎、
消肿、降压;降血脂以及清除自由基的功能;抗氧化、抗肿瘤,
增强免疫力及延缓衰老等多种生理药理功能 [6-9]。在食品工业
上可用作天然着色剂、抗氧化剂和功能性保健食品的原料,在
医药及化妆品工业有广泛的应用。
目前黄酮提取的方法主要有溶剂提取法、超临界流体萃取法、
酶提取法、超声波提取法、高速逆流色谱技术提取法、微波提取法
[10-12]。六者相比较,溶剂提取法具有成本低,适用性强,简便快捷
的优势,本文选用乙醇作为提取溶剂对麦麸中的黄酮进行提取。通
过正交试验设计考察了乙醇体积分数,提取时间,料液比这3个提
取条件对提取率的影响,确定了此条件下的最佳提取工艺。
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 原料
东北小麦麦麸干燥样品
2.1.2 试剂
芦丁标准品 生化试剂,供含量测定使用 , 标号为 0080-
9705,中国药品生物制品鉴定所;无水乙醇(分析纯);
Al(NO3)3 ﹑ NaNO2 及 NaOH均为分析纯。
2.1.3 仪器
仪器 型号 生产厂家
紫外可见分光光度计 722E 上海光谱仪器有限公司
恒温水浴锅 DK-S28 上海精宏实验设备有限公司
粉碎机 XA-1 宁波新芝生物科技股份有限公司
电子天平 AUY220 北京六一仪器厂
*为本文通讯作者
·农业科学·
小麦麸中黄酮的乙醇提取工艺研究 刘 洋 詹冬玲 修雪
2.2 实验方法
称取麦麸 10g 左右 3 份,用粉碎机粉碎并过 60 目筛,精
确量取 1.50g 麦麸粉末,加入不同体积分数的乙醇溶液在 50℃
条件下浸提,均匀搅拌,过滤,将滤液定容至 250ml, 测定吸
光度值。结合芦丁对照品 -浓度曲线求出浸提液的黄酮浓度。
2.2.1 标准溶液的配制和建立标准曲线
取 1.0mL 芦丁标准液于 10 mL 容量瓶中,添加 60% 乙
醇至 4 mL,加入 0.4 mL 5%NaN02 溶液,摇匀静置 6 min,加
入 0.4 mL 10%A1(NO3)3 溶液,摇匀静置 6 min,再加入 4 mL
4%NaOH,同时用 60%乙醇定容至刻度,摇匀静置 15 min,参
照文献的方法 [12],确定最大吸收波长。在波长 485~530nm 区
间范围内,每隔5nm测定一次吸光度,并以波长(nm)为横坐标,
吸光度 (A) 为纵坐标作图,从图中即可确定最大吸收波长。
吸取 0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1 mL 芦丁标准
液于 10 mL 容量瓶中,按照确定最大波长的方法,添加各种药
品,静置 15 min 后测定吸光度,以质量浓度为横坐标,吸光
度为纵坐标,绘制标准曲线,并求出回归方程。
2.2.2 黄酮提取率计算方法
黄酮提取率按下式计算:
黄酮提取率(%)=Y×V/1000/M
式中:Y—黄酮浓度
V—250ml
M—麸皮质量
2.3 单因素试验
2.3.1 乙醇体积分数对黄酮提取率的影响
准确称取 1.50g 研磨好的麦麸皮粉末,分别加入 100ml 体
积分数分别为 50%,60%,70%,80%,90% 的乙醇,50℃下
浸提 3h,间隔一定时间搅拌,经过滤后取滤液测定吸光度值。
2.3.2 浸提时间对黄酮提取率的影响
准确称取 1.50g 研磨好的麦麸粉末,加入 100ml 体积分数
为 65%的乙醇溶液,50℃下分别提取 2h,3h,4h,5h,6h, 间隔一定
时间搅拌,经过过滤后取滤液测定吸光度值。
2.3.3 料液比对黄酮提取率的影响
准确称取 1.50g 研磨好的麦麸粉末,分别按照 1:10 ,1:20
,1:30 ,1:40 ,1:50 的料液比加入体积分数为 65% 的乙醇溶液,
50℃下提取3h,间隔一定时间搅拌,经过过滤后测定吸光度值。
2.4 正交试验
为系统考察乙醇提取法的工艺参数,根据已有的资料及实
际情况,选用乙醇体积分数,提取时间和料液比作为考察因素,
选用 L9(34)正交表设计,固定实验温度条件为 50℃,各因素
及水平见表 2-1。
农业与技术 第 33 卷 第 12 期 2013 年 12 月
2 AGRICULTURE AND TECHNOLOGY
表 1 乙醇浸提的因素及水平
水平 因素乙醇体积分数 A 浸提时间 B 料液比 C
1 60% 2h 1:10
2 70% 4h 1:30
3 80% 6h 1:50
3 结果与分析
3.1标准曲线的绘制
结果确定在波长 510nm 处吸光值最大,在此条件下测不
同浓度芦丁标准液的吸光度,绘制标准曲线,结果如图 3-1。
经分析得回归方程:A =0.0104 C +0.0024,R2=0.9996。
图 1 芦丁对照品吸光度 -浓度曲线
3.2单因素试验
3.2.1 乙醇体积分数对黄酮提取率的影响
准确称取 1.50g 研磨好的麦麸粉末,分别加入 100ml 体积
分数分别为 50%,60%,70%,80%,90% 的乙醇,50℃条件
下浸提3h,间隔一定时间搅拌,经过滤后取滤液测定吸光度值。
得到乙醇体积分数与吸光值的曲线,如图 2。
图 2 乙醇体积分数对黄酮提取率的影响
由图 2可知,随着乙醇体积分数的增加,黄酮的浸提浓度
越高,黄酮浸提效果与乙醇体积分数成正比例。乙醇浓度的提
高增加了提取剂对物料的渗透能力 , 也提高了黄酮类化合物的
溶解度 , 但同时也会增加杂质的溶出。试验中发现 , 当乙醇浓
度超过 80%时 , 提取液颜色明显加深 , 说明各种杂质的溶出也
增多 , 这与王军 [12] 等的报道相一致。结合单因素试验的结果
和经济因素,选择乙醇体积分数 60%,70% 和 80% 作为正交
试验中乙醇体积分数这一水平的 3个因素。
3.2.2 浸提时间对黄酮提取率的影响
准确称取 1.50g 研磨好的麦麸粉末,加入 100ml 体积分数
为 65% 的乙醇溶液,50℃条件下分别提取 2h,3h,4h,5h,
6h,搅拌,经过过滤后取滤液测定吸光度值。得到提取时间与
吸光值的曲线,如图 3。
图 3 提取时间对黄酮提取率的影响
由图 3可知,随着提取时间的增加,黄酮提取率也随着增
加,但提取率上升缓慢,变化范围不大,综合考虑选取 2h ,
4h ,6h 作为正交试验提取时间这一因素的 3个水平。
3.2.3 料液比对黄酮提取率的影响
准确称取 1.50g 研磨好的麦麸粉末,分别按 1:10 , 1:20 ,
1:30 , 1:40 和 1:50 的料液比加入体积分数为 65%的乙醇溶液,
50℃条件下提取 3h,搅拌,经过过滤后测定吸光度值,经计
算得到料液比与黄酮提取率的曲线,如图 4。
图 4 液料比对黄酮提取率的影响
由图 4可知,黄酮的提取率与液料比值的增长成正比,溶
剂量的增加提高了物料体系与提取剂体系间黄酮类化合物的浓
度差 , 并减少了物料中有效成分的残留量 , 从而提高提取率。
综合考虑因素,选取料液比 1:10 ,1:30 ,1:50 作为正交试验料液
比的 3个水平。
3.3 正交试验
影响麦麸中黄酮提取率的主要因素为乙醇体积分数,浸提
时间和料液比。根据表2-2列出的试验条件组合搭配进行试验,
试验结果及统计学结果见表 3-1。
表 2 乙醇浸提正交试验结果及分析
试验号 A(乙醇体积分数 ) B(浸提时间 ) C(料液比 )
提取
率(%)
1 1(60%) 1(2h) 1(1:10) 0.70
2 2(70%) 2(4h) 3(1:50) 1.24
3 3(80%) 3(6h) 2(1:30) 0.84
4 1(60%) 2(4h) 2(1:30) 1.05
5 2(70%) 3(6h) 1(1:10) 0.68
6 3(80%) 1(2h) 3(1:50) 1.29
7 1(60%) 3(6h) 3(1:50) 1.01
8 2(70%) 1(2h) 2(1:30) 1.14
9 3(80%) 2(4h) 1(1:10) 0.73
K1 2.76 3.13 2.11K2 3.20 3.16 3.03K3 2.86 2.53 3.68L1 0.92 1.04 0.70L2 1.07 1.05 1.01L3 0.95 0.84 1.23R 0.15 0.21 0.53
从表 2 中可以得出结论:由极差 R的结果可知:各试验
因素及因素水平对麦麸黄酮提取率大小的影响不完全相同。在
正交设计表的试验条件下,各因素影响的次序依次为:料液
比>浸提时间>乙醇溶液浓度。料液比对黄酮提取率有显著
影响,乙醇体积分数影响较小。在所选因素和所选水平范围内
3 种因素的最佳组合应为:用 80% 的乙醇溶液,料液比 1:50
, 在 50℃条件下浸提 2h,在该条件下总黄酮提取率最高,为
1.29%。
4 结论
本试验采用乙醇提取方法提取麦麸中黄酮,考察了乙醇浓
度、料液比、提取时间 3个因素,对麦麸黄酮提取率的影响。
经试验结果表明,各因素影响的次序依次为:料液比>浸提时
间>乙醇溶液浓度。最佳提取工艺为:乙醇溶液浓度 80%,
料液比为 1:50,在 50℃条件下浸提 2h,黄酮提取率最高为
1.29%。
(下转第10页)
农业与技术 第 33 卷 第 12 期 2013 年 12 月
10 AGRICULTURE AND TECHNOLOGY
结合土壤养分丰缺指标,当地玉米区土壤养分含量基本上
处于中等水平,含量丰富、缺乏的所占比例较少。
5养分丰缺指标法的应用
在完成上述测试方法的相关研究和确定土壤养分丰缺校验
研究后,将土壤养分按 3个等级分别布点设置田间肥效试验,
利用作物产量与施肥量之间的函数关系建立了施肥方程。确
定出当地玉米土壤养分丰缺法最佳施肥量检索表(表 1、2、
3)。农户通过土壤养分及常年产量即可按检索表确定出肥料
用量。该方法简单,且效益显著,比习惯施肥节药用肥量 5%
~ 10%,增加产量 7%~ 10%,提高肥料利用率达到 5.3%。
表 1 玉米高产地块土壤养分丰缺指标与施肥量关系检索表
产量区间 土壤养分(mg/kg) 施肥建议量 (kg/667m2)
高产区
(无肥区亩产量
350kg以上)
N
低 N<70 12.3~14.6
适量 70 ≤ N≤ 120 11.6~12.3
丰富 N>120 10.6~11.6
P
低 P<20 5.7~6.7
适量 20 ≤ P ≤ 40 5.5~6.2
丰富 P>40 4.0~5.0
K
低 K<80 6.7~8.7
适量 80 ≤ K≤ 130 5.7~6.7
丰富 K>130 5.0~5.7
表 2 玉米中产地块土壤养分丰缺指标与施肥量检索表
产量区间 土壤养分(mg/kg) 施肥建议量 (kg/667m2)
中产区(无肥区
667m2 产 量 300-
350kg)
N
低 N<70 12~13.3
适量 70 ≤ N≤ 120 11.2~12
丰富 N>120 10.5~11.2
P
低 P<20 5~6
适量 20 ≤ P ≤ 40 4.5~5
丰富 P>40 4~4.5
K
低 K<80 6.1~6.5
适量 80 ≤ K≤ 130 5.5~6.1
丰富 K>130 5~5.5
表 3 玉米低产地块土壤养分丰缺指标与施肥量检索表
产量区间 土壤养分(mg/kg) 施肥建议量 (kg/667m2)
低产区(无肥区
每 667m2 产 量 在
300kg以下)
N
低 N<70 11.8~12.8
适量 70 ≤ N≤ 120 11.0~11.8
丰富 N>120 10.2~11.0
P
低 P<20 4.8~5.5
适量 20 ≤ P ≤ 40 4.3~4.8
丰富 P>40 4~4.3
K
低 K<80 5.8~6.2
适量 80 ≤ K≤ 130 5.3~5.8
丰富 K>130 4.8~5.3
通过以上施肥检索表,可以直接地给出每个地块的施肥数
量。如中产地块的碱解氮为 125mg/kg,有效磷为 36mg/kg,速
效钾为 73mg/kg,则可以给出施肥指导,即每 667m2 补充氮肥
10.5 ~ 11.2kg、磷肥 4~4.5kg、钾肥 6.1 ~ 6.5kg。
6 小结
土壤碱解氮、有效磷、速效钾的含量与土壤的相对产量
及供肥量呈正相关;玉米碱解氮、有效磷、速效钾 的养分丰
缺适宜范围分别为 70~120mg/kg、20~40mg/kg、80~130mg/kg;
玉米施肥检索表依据无肥区的高、中、低 3个产量范围,再结
合土壤养分测试值,可以给出出玉米施肥参考量。 实践证明,
土壤养分丰缺指标法可以成为专家施肥系统的重要依据,对大
批量施肥指导提供了必要的数据支撑。但养分丰缺指标的确定
并不是一成不变的,它随着栽培、耕作等技术的不断变化而改
变,为此,丰缺指标需不断更新,同时此项技术也要不断地研
究与完善,更好地适应现代农业发展的需要。
作者简介:毕秀清(1960-),女,吉林长春,大专,研究方向:
土肥技术。
参考文献
[1] 徐瑞 , 王晓曦 , 谭晓蓉 . 小麦加工副产品—麦麸的综合利用 [J]. 现代
面粉工业 , 2011, 06, 33-35.
[2] 李丽 , 王红玲 . 小麦麸膳食纤维对小鼠降血糖作用的研究 [J]. 粮食与
食品工业 , 2010, 17 (3): 30~31.
[3] 王丽丽 , 陶海腾 , 徐同成 , 等 . 麦麸酚类化合物研究进展 [J]. 中国食
物与营养 , 2012, 18(2): 36-38.
[4] Hongyan Li, Yang Liu. Research Progress on the Extraction, Purification
and Pharmacological Action of Flavonoids in Trollius Chinensis Bunge[J].
Applied Mechanics and Materials, 2013, 295-298 (1): 283-286.
[5] 曹纬国 , 刘志勤 , 邵云 , 等 . 黄酮类化合物药理作用的研究进展 [J].
西北植物学报,2003, 12(23):2241~2247.
[6] 程秋月 , 郭菁 , 张成义 . 黄酮类化合物药理作用的研究 [J]. 北华大学
学报 , 2011, 12(2): 180~183.
[7] 彭游 , 胡小铭 . 葛根黄酮提取与保健功能研究进展 [J]. 食品工业科
技,2011, 32 (12): 581~585.
[8] 张利燕 , 常虹 , 周家华 ,等 . 植物花中黄酮类化合物的提取技术及其
生物活性研究现状 [J]. 食品工业 , 2012, 32 (5):96~99.
[9] 王倩 , 常丽新 , 唐红梅 . 黄酮类化合物的提取分离及其生物活性研究
进展 [J]. 河北理工大学学报 , 2011, 33(1): 110~115.
[10] 曹艳萍 . 苦荞麦麸皮中总黄酮的乙醇提取工艺研究 [J]. 食品科学 ,
2005, 26(3):98~100.
[11] 方芳 , 黄卫东 . 食品中黄酮醇的组成、性质及其检测方法 [J]. 核农
学报 , 2011, 25 (2):313~316.
[12] 王军 , 王敏 , 季璐 . 苦荞麦麸皮总黄酮提取工艺及数学模型研究 [J].
农业工程学报 , 2006, 22 (7):223~225.
作者简介:刘洋(1984-),男,吉林化工学院助教,在读博士研究生,
从事食品中活性成分的提取与分离及现代食品检测的研究 .郭向明
(1954-),男,吉林化工学院研究员,主要从事环保化工方面研究。
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