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猫须草提取工艺研究



全 文 :药 物 研 究
The medicine study
猫须草提取工艺研究
杨江媛
云南省中医医院,云南 昆明 650000
【摘 要】 目的:考察猫须草的最佳醇提取工艺。方法:以猫须草提取物中总黄酮的含量为指标,对不同的提取方法及提取工艺进
行考察,以确定猫须草的最佳提取工艺。结果:95%的乙醇提取烘干的水提药渣,乙醇用量为 15BV /次,提取次数为 2 次,每次 2. 5h。提
取方法经过中试放大试验后干粉收率达到 20%以上,总黄酮达到 70%以上。结论:收率较好,该工艺条件可行。
【关键词】 猫须草;总黄酮;提取工艺;收率.
【中图分类号】R284. 2 【文献标志码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2015)10 - 0020 - 02
猫须草 Clerodendranthus spicatus (Thunb. )C. Y. Wu 又
名肾茶、牙努秒、猫须公,为唇形科肾茶属植物。我国猫
须草主要分布于广东、海南、广西南部、云南南部、台湾
及福建,常生于林下潮湿处。从上世纪起,我国多地引种
栽培,其中以云南种植最多[1]。猫须草是一种药食两用的
植物,具有利尿、抗菌、消炎、溶石、排石和抗肿瘤等多
种药理学作用[2]。有文献报道猫须草中的主要化学成分为
黄酮类、酚性化合物、二萜类、三萜类、木脂素类等,其
中黄酮类化合物为其主要脂溶性化合物[3 - 4]。为提高猫须
草有效成分提取效率,本实验以乙醇为提取溶剂,对猫须
草的提取工艺进行研究和优化,为猫须草的优质开发利用
提供理论依据。
1 材料
1. 1 试验器材 电子天平 (十万分之一,赛多利斯科
学仪器有限公司) ;电子天平 (万分之一,赛多利斯科
学仪器有限公司) ;NKSY 型智能恒温水浴锅 (常州诺基
仪器有限公司) ;36952 型紫外分光光度计 (菲尔伯恩
实业发展有限公司) ;昆山超声清洗仪 (安徽东南仪诚
试验室设备有限公司) ;R - 1001 - L 旋转薄膜蒸发仪
(郑州长城仪器有限公司) ;SHZ - D 型真空泵 (郑州博
科仪器设备有限公司)
1. 2 对照品 芦丁 (中国食品药品检验所,批号:121268
- 200904)。
1. 3 药材 猫须草水提取后低温干燥的药粉。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮含量测定方法
2. 1. 1 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品 16. 42mg,
甲醇适量置水浴上微热使溶解,放冷,甲醇定容至 50ml,
摇匀,即得浓度为 0. 3284mg /ml的芦丁对照品溶液。
2. 1. 2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0. 5、1、
1. 5、2、3、4、5、6ml,分别置 25ml 量瓶中,各加水至
6. 0ml,加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml,混匀,放置 6min,加
10%硝酸铝溶液 1ml,摇匀,放置 6min,加氢氧化钠试液
10ml,再加水至刻度,摇匀,放置 15min,以相应的试剂为
空白,按紫外 -可见分光光度法 (附录ⅤA) ,在 509nm波
长处测定吸光度。
以芦丁含量 (μg /ml)为横坐标,吸光度为纵坐标,
绘制出总黄酮的标准曲线为:Y = 0. 0107X + 0. 0012,R2 =
0. 9993,线性范围为 6. 568 ~ 78. 816μg /ml。
表 1 总黄酮含量测定标准曲线的绘制
芦丁含量 /μg /ml 吸光度 芦丁含量 /μg /ml 吸光度
6. 568 0. 070 39. 408 0. 416
13. 136 0. 142 52. 544 0. 555
19. 704 0. 214 65. 680 0. 715
26. 272 0. 295 78. 816 0. 849
2. 1. 3 供试品制备 称取浸膏适量,精密称定,置 25 ml
锥形瓶中,加甲醇 10 ml 超声处理 10 min,放冷,精密称
定,甲醇补足重量,摇匀。精密量取 5 ml,置 10 ml 量瓶
中,加水至刻度,摇匀。精密量取 3ml,置 25 ml 量瓶中,
照标准曲线制备项下的方法,自“加水至 6 ml”起依法测
定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度
(μg /ml) ,计算即得。
2. 1. 4 醇提液供试品溶液的制备 称取各个单因素考察后
的干浸膏约 0. 05g至锥形瓶中,精密称定,甲醇 30ml 浸泡
1h,超声提取 30 min,放冷,过滤,回收滤液至 10ml,用
0. 45μm的微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2. 2 提取工艺考察
2. 2. 1 乙醇浓度 取水提后烘干的药渣 10g,分别加入 10
倍量浓度为 55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶液浸
泡药渣 2h后,80℃加热回流 2h,过滤,收集滤液,滤渣同
法提取 1 次,合并滤液,减压回收溶剂至干,称定浸膏量
及测定总黄酮含量,结果见表 2。
表 2 醇提浓度考察
醇提浓度 /% 干浸膏含量 / g 总黄酮含量 /% 加权评分
55 0. 4011 0. 66 0. 5306
65 0. 4025 0. 65 0. 5262
75 0. 4142 0. 71 0. 5621
85 0. 4119 0. 71 0. 5610
95 0. 3997 0. 73 0. 5648
由上表数据,当用 95%的乙醇提取药渣时,总黄酮含
量最高,此时的加权评分最高,因此选择 95%的乙醇提取
水提药渣。
2. 2. 2 乙醇用量 取水提后烘干的药渣 10g,按照提取工
艺,分别加入 6、8、10、12、15 倍量浓度为 95%的乙醇溶
液浸泡药渣 2h后,80℃加热回流 2h,过滤,收集滤液,滤
渣同法提取 1 次,合并滤液,减压回收溶剂至干,称定浸
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药 物 研 究
The medicine study
膏量及测定总黄酮含量,结果见表 3。
表 3 乙醇用量考察
醇提用量 /BV 干浸膏含量 / g 总黄酮含量 /% 加权评分
6 0. 4155 0. 69 0. 5528
8 0. 4425 0. 69 0. 5662
10 0. 4483 0. 72 0. 5842
12 0. 4417 0. 75 0. 5958
15 0. 4500 0. 77 0. 6100
由上表数据,随着乙醇用量的增加,加权评分越高,提取
药材时每次选择 15 倍量的乙醇为最适提取用量。
2. 2. 3 提取时间 取水提后烘干的药渣 10g,按照提取工
艺,加入 15 倍量浓度为 95%的乙醇溶液浸泡药渣 2h 后,
分别 80℃加热回流 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5h,过滤,收
集滤液,滤渣同法提取 1 次,合并滤液,减压回收溶剂至
干,称定浸膏量及测定总黄酮含量,结果见表 4。
表 4 醇提时间考察
醇提时间 /h 干浸膏含量 / g 总黄酮含量 /% 加权评分
0. 5 0. 4253 0. 77 0. 5976
1. 0 0. 4321 0. 78 0. 6060
1. 5 0. 4395 0. 79 0. 6148
2. 0 0. 4417 0. 85 0. 6458
2. 5 0. 4452 0. 88 0. 6626
由上表数据,乙醇提取时间越长,浸膏含量越高,加权评
分越大,但随着提取时间的增加,经济成本增加,因此本
工艺选择乙醇提取时间为每次 2. 5h。
2. 2. 4 醇提优选试验方案 由以上单因素考察的结果可
知,药材的醇提最佳提取工艺条件为:95%的乙醇提取烘
干的水提药渣,乙醇用量为 15BV /次,提取次数为 2 次,
每次 2. 5h。
2. 3 乙醇提取小试结果 取水提后烘干的药渣 5 份,每份
10g,加入 15 倍量浓度为 95%的乙醇溶液浸泡药粉 1h 后,
分别 80℃加热回流 2. 5h,过滤,收集滤液,滤渣同法提取
1 次,合并滤液,减压回收溶剂至干,测定浸膏出膏率及总
黄酮含量,结果见表 5。
表 5 醇提小试结果
提取药材编号 干浸膏含量 / g 总黄酮含量 /% 加权评分
1 0. 425 0. 71 0. 568
2 0. 445 0. 72 0. 582
3 0. 436 0. 78 0. 608
4 0. 410 0. 69 0. 550
5 0. 429 0. 75 0. 490
均值 0. 429 0. 73 0. 560
RSD /% 3. 04 4. 84 7. 92
由小试结果看出,醇提取工艺重复提取 5 份药材 RSD
值满足要求,表明该提取工艺稳定可行。
3 结论
3. 1 猫须草中化合物的类型主要为总黄酮及黄酮苷类化合
物,其中脂溶性成分主要为黄酮类化合物,因此本实验在
水提取后的基础上,将水提取后的药材烘干后再用醇提取
能得到纯度较高的醇提取物。
3. 2 采用紫外分光光度法对猫须草中总黄酮含量进行测
定,操作简单、准确度高、重现性好,所建立的标准曲线
线性范围能满足同时测定药材、水提取物、醇提取物中总
黄酮的含量。
猫须草是我国西南地区特有的少数民族药,经过长期
实践,猫须草在治疗泌尿系统疾病方面具有显著的疗效。
然而,由于缺乏系统完整的研究,大多数民族药还停留在
地区甚至更小的范围内用药,一些具有显著疗效的民族药
还没有得到充分的推广使用。对猫须草提取工艺的研究,
不仅有利于民族医药的推广使用,而且也对民族医药的发
展起到极大的推动作用。
参考文献
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(5) :12 - 16.
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44 (20) :2946 - 2950.
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对比 [J] . 北京中医药大学学报,1999,22 (5) :78 - 79.
[4]颜文祝,吕于谋,沈文通. 猫须草主要化学成分初步预试 [J] . 海峡
药学,1995,7 (3) :3 - 4.
(收稿日期:2015. 03. 03)
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