全 文 ：中 药 研 究
接骨木总苷片的质量标准研究
杨炳友，卢清秀，朱晓清，杨柳，韩华，王秋红，匡海学*
(黑龙江中医药大学北药基础与应用研究省部共建重点实验室，
黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:建立接骨木总苷片的质量标准研究方法。方法:采用 TLC 方法对莫诺苷进行鉴别;HPLC
法对接骨木总苷片进行了含量测定;并用浆法测定了接骨木总苷片中莫诺苷的溶出度。根据 2010 版
《中国药典》有关片剂的规定，建立了对重量差异、崩解时限、重金属、砷盐和微生物限度的检查方法。
结果:TLC法可很好的鉴别莫诺苷，阴性对照液无干扰;采用 HPLC 法确定莫诺苷的含量检测限度不得
少于 4． 0%。精密度为 3． 206%，稳定性 2． 776%，重现性 1． 427%，平均回收率为 99． 63%。建立的方法
都符合药典相关规定。结论:建立的分析方法准确、可靠，很好地满足了分析方法中的各项分析要求。
关键词:接骨木总苷片;莫诺苷;薄层色谱
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2014)03 － 0049 － 03
收稿日期:2014 － 03 － 09 修回日期:2014 － 03 － 25
基金项目:国家自然科学基金面上项目(81173501);黑龙江中医药大学
“优秀创新人才支持计划”项目(B201201);黑龙江中医药大
学博士创新基金(B201003)
作者简介:杨炳友(1970 －)，男，博士，教授，博士研究生导师。主要研
究方向:中药及复方药效物质基础研究。
* 通讯作者:匡海学(1955 －)，男，博士，教授，博士研究生导师。主要
研究方向:中药及复方药效物质基础研究、中药性味理论
研究。
接骨木(Sambucus williamsii Hance)别名公道老、
扦扦活、马尿骚、大接骨丹等，为忍冬科(Caprifoliace-
ae)接骨木属(Sambucus linn)植物［1］。接骨木性味甘、
苦，平，无毒;具有活血止痛、祛风利湿、接骨续筋之功
效。主要用于治疗骨折、跌打肿痛及创伤出血［2］。课
题组的前期研究亦表明［3 － 4］，接骨木根皮具有明显的
促进骨折愈合的作用，并阐明其药效物质基础为总苷
类成分。因为片剂有剂量准确、质量稳定，生物利用度
好等优点，是中药新药研究常用剂型［5］;课题组根据
剂型的需要将接骨木的有效部位(接骨木总苷)制备
成片剂，并对其初步稳定性进行了研究［6］，以便临床
患者服用。为了控制接骨木总苷片的质量，确保临床
用药的安全有效，本文建立了接骨木总苷片的质量
标准。
1 仪器与与试药
Waters － 2695 型高效液相色谱仪;SB － 5200D 型
超声波清洗器(宁波实验仪器厂有限公司);电子分析
天平(瑞士 METTLEＲ TOLEDO 公司);Milli － Q 纯水
器(密理博上海贸易有限公司)。莫诺苷对照品，黑龙
江中医药大学中药化学教研室自制(经 HPLC法测定，
面积归一化法计算纯度达 98%以上);接骨木总苷片，
黑龙江中医药大学中药化学教研室自制(批号:
20100001、20100002、20100003，0． 36g /片);甲醇为色
谱纯(美国 DIKMA公司);其它溶剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 莫诺苷的薄层鉴别
2． 1． 1 对照品、供试品及阴性对照液的制备
对照品溶液:精密称取莫诺苷对照品 25mg，置于
5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得储备液(5mg /
mL)。供试品溶液:取接骨木总苷片 10 片，研细，混
匀，精密称取 0． 1g，加甲醇 10mL，超声处理 30min，滤
过，作为供试品溶液。阴性对照液的制备:除接骨木总
苷外，按处方(接骨木总苷 32g，乳糖 288g，MCC 32g，
PVPP 7g，硬脂酸镁 3． 5g)比例称取其它辅料，按优化
的片剂成型工艺制成片剂，按照供试品项下操作制成
阴性对照液。
2． 1． 2 薄层层析
按照 2010 年版《中国药典》薄层色谱法试验，吸
取上述三种溶液各 5μL，分别点于同一硅胶 GF254薄层
板上，以三氯甲烷 －甲醇(3∶ 1)为展开剂，置紫外光灯
(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相
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应的位置上显相同的紫色斑点。而阴性空白对照品色
谱中无斑点。结果见图 1。
1:对照品;2、3、4:三批供试品;5:阴性空白对照
图 1 接骨木总苷片的薄层色谱图
2． 2 莫诺苷的含量测定及方法学考察
2． 2． 1 含量测定
色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18 柱(250mm ×
4. 6mm，5 m，迪马公司)，流动相:甲醇 －水(30:70 v /
v)，检测波长:240nm，流速:1． 0mL /min，柱温:室温，进
样量:10μL。测定方法:对照品溶液、供试品溶液及阴
性对照液的制备同 2． 1． 1。分别精密量取上述 3 种溶
液，注入液相色谱仪中，记录色谱图中莫诺苷的峰面
积。色谱图见图 2、3、4。
图 2 对照品的 HPLC色谱图
图 3 供试品的 HPLC色谱图
图 4 阴性液的 HPLC色谱图
2． 2． 2 方法学考察
2． 2． 2． 1 阴性样品干扰考察
分别取对照品溶液和阴性对照液各 10μL，注入液
相色谱仪中，结果表明阴性对照液无干扰。
2． 2． 2． 2 线性关系考察
取上述 0． 1、0． 3、0． 5、0． 7、0． 9、1． 2mg /mL6 个浓
度的对照品溶液，分别进样 10μL。测定峰面积，以对
照品含量 X为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标，绘制标准
曲线。得回归方程:Y = 2． 012 × 106X + 600 633(Ｒ2 =
0． 999)，表明对照品在 1 ～12μg范围内线性关系良好。
2． 2． 2． 3 精密度试验
取同一对照品溶液，连续进样 6 次，测定莫诺苷的
峰面积，计算相对标准偏差，结果 ＲSD 值为 3． 206%，
表明仪器系统的精密度高。
2． 2． 2． 4 稳定性试验
取放置 0、1、3、6、12、18h的供试品溶液，测定莫诺
苷的峰面积，以考察其稳定性。计算相对标准偏差，结
果 ＲSD值为 2． 776%，表明供试品溶液至少在 18h 内
稳定。
2． 2． 2． 5 重现性试验
取本品 6 份，精密称定，按 2． 2 项下的方法操作，
制备供试品溶液，测定莫诺苷的峰面积。计算相对标
准偏差，结果 ＲSD 值为 1． 427%，表明该方法重现
性好。
2． 2． 2． 6 回收率试验
精密称取已知含量同批样品 9 份，精密加入莫诺
苷对照品，按 2． 1 项下的方法操作，制备供试品溶液，
测定莫诺苷的含量，计算回收率。结果平均加样回收
率为 99． 63%，ＲSD值为 1． 43%。表明该方法准确、可
靠。
2． 3 样品的测定与含量限度的制定
取 10 批接骨木总苷片，按 2． 1． 1 项下的方法操
作，制备供试品溶液，测定莫诺苷的含量。测定结果表
明，片剂中莫诺苷含量基本稳定，平均莫诺苷含量为
4． 595%，故限定干燥品中莫诺苷含量不得少于 4%。
2． 4 溶出度测定
2． 4． 1 溶出介质的选择
接骨木总苷的水溶性很好，因此选用脱气处理后
的蒸馏水为溶出质。
2． 4． 2 溶出曲线的测定
表 1 3 批接骨木总苷片中莫诺苷溶出曲线测定结果
批号
时间(min)
15 20 30 45 60 75
20100001 41． 5 81． 6 92． 4 101． 6 102． 4 102． 3
20100002 39． 7 79． 8 93． 1 100． 8 102． 1 102． 8
20100003 42． 3 80． 4 90． 5 99． 7 101． 3 101． 9
取接骨木总苷片，采用浆法测定溶出度，以脱气处
理后的蒸馏水为溶出介质，体积选用 900mL，转速为
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100r /min，温度为 37℃，依法操作。分别在 15、20、30、
45、60、75min 时取样，每次取样 5mL，经 0． 45μm 微孔
滤膜滤过，同时补充同体积同温度的溶出介质。采用
HPLC测定方法在 240nm下测定指标性成分莫诺苷的
吸收度，计算累积溶出率。结果见表 1 和图 5。由图 5
可以看出在 30min时接骨木总苷片的溶出度就可以达
到 90%。
图 5 接骨木总苷片的溶出曲线
2． 5 检测
2． 5． 1 重量差异
表 2 3 批接骨木总苷片重量差异测定结果
样品批次 标准规定 差异范围 结论
20100001 ≤ ± 5． 0% －3． 69% ～3． 57% 符合规定
20100002 － 3． 46% ～3． 73% 符合规定
20100003 － 3． 55% ～3． 81% 符合规定
按照《中国药典》2010 年版一部附录Ⅰ制剂通则
片剂项下的检查方法和标准进行。取本品 20 片，精密
称定总重量，求得平均片重，再分别精密称定每片的重
量，每片重量与平均片重相比较，计算重量差异百分
比，实验 3 批样品，结果见表 2，可知，3 批样品的平均
片重在 0． 36g左右，差异范围均不超过 5． 0%，结果见
表 2，符合药典规定。
2． 5． 2 崩解时限
由于片剂的成分组成与性质，以及加工工艺和储
存条件等都可能影响其崩解时间［7］。所以按照《中国
药典》2010 年版一部附录Ⅻ A 崩解时限检查法检查。
打开崩解仪，温度设置为 37℃，待烧杯中水的温度达
到 37℃后，取本品 6 片，分别置崩解仪吊篮的玻璃管
中，吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，加挡
板，烧杯中装入 1 000mL 水，将吊篮浸入烧杯中，启动
崩解仪，实验 3 批样品，结果见表 3。
表 3 3 批接骨木总苷片崩解时限测定结果
样品批次 崩解时间(min)
20100001 13 14 15 12 11 14
20100002 16 15 14 18 11 14
20100003 16 14 15 15 14 12
由表 3 可知，3 批样品的所有供试品崩解时间均
在 20min以内，符合药典规定。
2． 5． 3 重金属
鉴于重金属和砷盐的毒性较强，有害于人体健康，
检测和控制毒性元素在药物中的含量限度十分重
要［8 － 9］。取本品 2g，小火灼烧炭化，于 550℃灼烧灰
化。精密量取铅溶液 2mL，按照《中国药典》2010 年版
一部附录Ⅸ E(第二法)重金属检查法检查，实验 3 批
样品，含重金属量均未超过百万分之十。
2． 5． 4 砷盐
取本品 1g，加 2g 无砷氢氧化钙，小火灼烧炭化，
于 550℃灼烧灰化，用盐酸中和显中性，作为供试品溶
液。精密量取砷溶液 2mL，同法处理，作为对照溶液。
按照《中国药典》2010 年版一部附录Ⅸ F(第一法)砷
盐检查法检查，实验 3 批样品，含砷量均未超过百万分
之二。
2． 5． 5 微生物限度
表 4 3 批接骨木总苷片微生物限度检查结果
样品批次
细菌总数
(个 / g)
霉菌 /酵母菌
总数(个 / g)
大肠杆菌 活螨
20100001 460 0 未检出 未检出
20100002 370 0 未检出 未检出
20100003 450 0 未检出 未检出
按照《中国药典》2010 年版一部附录ⅫⅠ C 微生
物限度检查法检查，实验 3 批样品，由表 4 可知，3 批
样品均符合药典规定。
3 讨论
测定溶出度的方法有两种，分别为浆法和转篮
法［5］，在对接骨木总苷片中莫诺苷的溶出曲线的测定
试验中，浆法的溶出效果明显优于转篮法，故选用浆法
测定溶出度。根据 2010 版《中国药典》有关片剂的规
定，建立了对重量差异、崩解时限、重金属、砷盐和微生
物限度的检查方法，结果表明均符合药典规定。采用
浆法，以 900mL 的蒸馏水为溶出介质，在 37℃、100r /
min的条件下，通过 HPLC 法在 240nm 下测定了接骨
木总苷片中莫诺苷的溶出度，由溶出曲线可知接骨木
总苷片在 30min时溶出度就可以达到 90%，符合药典
相关规定。
参考文献:
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Quality Standard of Total Jiegumu Glycosides Tablets
YANG Bing － you，LU Qing － xiu，ZHU Xiao － qing，YANG Liu，HAN Hua，WANG Qiu － hong，KUANG Hai － xue
(Key Laboratory of Chinese Materia Medica，Heilongjiang University of Chinese Medicine，
Ministry of Education，Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and Natural
Medicine Pharmacodynamic Material Base，Harbin 150040，China)
Abstract:Objective:To study the quality standard of total Jiegumu glycosides tablets． Method:Ast ragalus morroniside
were identified by TLC method;the content of total Jiegumu glycosides tablets was determined by HPLC and determine
the dissolution of morroniside in total Jiegumu glycosides tablets by slurry． According to the 2010 edition of“Chinese
Pharmacopoeia”provisions of the relevant tablets，firstly，we established inspective methods of weight difference，disin-
tegration，heavy metal，arsenic salt and microbial limit of total Jiegumu glycosides tablet． Ｒesults:TLC method could
well identify morroniside，liquid negative control without interference;determination of the detection limits of morroni-
side was no less than 4． 0% in HPLC;precision was 3． 206%，stability was 2． 776%，and repeatability was 1． 427%，
the average recovery rate was 99． 63% ． Establis hment methods were in line with pharmacopoeia． Conclusion:The anal-
ysis method is accurate，reliable and can well meet the requirements of analysis methods．
Key words:Total Jiegumu glycosides tablets;Morroniside;
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
TLC
HPSEC法检测注射用双黄连(冻干)中
的高分子量物质
裴福成1，苏德龙1，李文春1，任桂萍2*
(1．哈药集团中药二厂，黑龙江 哈尔滨 150078;2．东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030)
摘 要:目的:建立注射用双黄连(冻干)中高分子量物质的检测方法。方法:采用凝胶色谱柱(TSK －
G2000SWxl，5μm，7． 8mm ×300mm);以三氟乙酸 －乙腈 －水(0． 05:20:80)为流动相;蒸发光散射检测
器检测;流速为 0． 7mL /min。结果:注射用双黄连(冻干)中未检出高分子量物质。结论:所建立的方法
简便、准确、灵敏度好，适合检测注射用双黄连(冻干)中的高分子量物质。
关键词:注射用双黄连(冻干);高分子量物质;分子排阻色谱法
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2014)03 － 0052 － 03
收稿日期:2013 － 10 － 25 修回日期:2013 － 11 － 31
基金项目:国家科技重大专项子课题重大新药创制(2011ZX09201 － 201 － 15);黑龙江省科技计划项目(GA09C308);哈尔滨市科技攻关计划项目
(2010AA3CS025)
作者简介:裴福成(1974 －)，男，高级工程师，主要从事中药新药研发工作。
* 通讯作者:任桂萍(1974 －)，女，副教授，硕士研究生导师，主要从事基因工程及生物制药研究工作。
注射用双黄连(冻干)由连翘、金银花和黄芩组方
而成，具有清热解毒，疏风解表的功效，用于上呼吸道
感染、轻型肺炎、扁桃体炎等病毒、病菌感染性疾
病［1 － 2］。2009 年，国家食品药品监督管理局开展了
“中药注射剂安全性再评价工作”，针对可能给临床使
用带来安全隐患的高分子量物质，在《基本技术要求》
中明确提出“生产工艺过程中应对高分子杂质进行控
制”，同时在《质量控制要点》中也明确要求“必要时，
应建立高分子量物质检查项”。本研究正是基于这一
要求展开，建立一种简便快捷的方法，对注射用双黄连
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