全 文 ：第 27卷 第 8期
2 0 0 9年 8月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 27 No. 8
Aug. 2 0 0 9
中华中医药
1642
学刊
猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤的抑制作用
易婷娇,徐燕丰,郑国银,辛海量,凌昌全
(第二军医大学第一附属医院中医科, 上海 200433)
摘 要:目的: 研究猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤的抑制作用及机制。方法: 建立小鼠皮下移植瘤模型, 观
察猫人参总皂苷体内抑制肿瘤作用。运用免疫组化法, 检测猫人参总皂苷对肿瘤组织中微血管的影响。结果: 猫
人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤有显著抑制作用。给药组肿瘤组织的微血管密度和 VEGF表达与阴性对照组有显
著差异。结论:猫人参总皂苷对小鼠移植瘤的生长有抑制作用,其作用机制之一可能是抗血管生成。
关键词:猫人参总皂苷;皮下移植瘤; 抗肿瘤
中图分类号: R2851 5 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2009) 08 -1642 - 02
Inh ib itory Effects of Tota l Sapon in F rom Act in id ia Valvata on Murine Transp lanted Tumor
YI T ing-jiao, XU Yang-feng, ZHEN Guo-y in, X IN H a i-liang, LING Chun-quan
( Dep artm en t of TCM, F irst Aff iliated H ospi tal of S econdM ilitaryM ed icalUn iversity, Shanghai 200433, Ch ina)
Abstrac:tObjective: To explore the inhibito ry effect of tota l saponin from actin idia va lva ta dunn on mu rine transplan-
ted tum our and its anti-tum ou rm echanism s.M ethod s: The transplant tumo rmousem ode lw as used to observe the inhibition
e ffects o f to ta l saponin from actinidia va lva ta dunn on H22 ce lls in v ivo. Immunohisto chem istry for F8 a long w ith VEGF
on the tumo r tissuew as pe rfo rm ed. Resu lts: The to tal saponin from ac tinid ia va lva ta dunn could obv iously antitumo r activ ity
in transplan t tum o rm icem ode .l The inhibition ra tesw ere 5312% and 431 5% . TheMVD, in the expe rim en tal g roups we re
significantly lowe r than contro l g roup. The expression of VEGF on the transplanted tum orw as significan tly inhibited. Con-
c lusion: To tal saponin from actinidia va lva ta dunn has m arked inhibition effec ts on the grow th of m urine transp lanted
tum o r. An ti-ang iogene sis probably is one o f the an ti-tum o rmechanism s.
Keyw ords: ac tinid ia v alvata dunn; transplanted tum o r; an ti-tum or effect
收稿日期: 2009 - 03 - 26
基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30572360 ); 上海市科委中
药现代化资助项目 ( 04DZ19808 )
作者简介:易婷娇 ( 1982 - ) ,女, 新疆人,硕士研究生,主要从事肿
瘤专业研究。
恶性肿瘤是一个全球主要的死亡原因, 且未有较好的
治疗药物。中医药对于肿瘤的治疗有其独特的优势 [1 ],显
示出明显的多靶点效应 [2]。但中药抗肿瘤的现代药理学
机制多数尚不十分清楚,有待逐一研究。猫人参总皂苷为
猕猴桃科植物对萼猕猴桃 (镊合猕猴桃 Actin idia Va lva ta
Dunn)根的提取物。前期研究发现其具有一定的抗肿瘤生
长作用 [3 ]。为进一步研究其抗肿瘤的药理作用,笔者进行
了以下研究以初步探讨其药理学机制。
1 实验材料
111 药品 猫人参原药于 2006年 10月采自浙江衢州,经
鉴定为猕猴桃科植物对萼猕猴桃 (镊合猕猴桃, Actin id ia
Valvata Dunn )的根,由本实验室经提取分离制成猫人参总
皂苷。
112 细胞株 小鼠肝癌细胞 H22购自中科院细胞所, 由本
实验室保存。
113 试剂 RPM I1640培养液购自 G IBCO; 二甲基亚砜
( DMSO ) 购自 S igm a;小牛血清购自 PAA公司。
11 4 动物 封闭群昆明种小鼠, 30只,雄性, 体重 ( 20 ? 2)
g,由第二军医大学动物试验中心提供 (许可证号: SCXK沪
2002 - 0002)。
2 实验方法
21 1 药品配制 称取一定质量的猫人参总皂苷, 以含
01 5% CMC -Na和 015% Tween - 80的蒸馏水配成一定浓
度的混悬液。
21 2 荷瘤动物模型的建立 小鼠肝癌细胞株 H22复苏后
培养并传代,收集对数生长期的细胞,以生理盐水调整至 1
@ 106个 /m L,以每只 015m L接种于小鼠腹腔中。7天后抽
取小鼠腹水,用生理盐水调整至 2 @ 107个 /mL制成细胞悬
液,接种于小鼠左前肢腋部皮下, 每只 01 2mL。分组和给
药:接种后 24h将小鼠随机分为 3组:高剂量组 ( 1g /kg)、低
剂量组 ( 01 5g /kg )和阴性对照组 (含 015% CMC - Na和
01 5% Tw een - 80的蒸馏水 )。腹腔注射给药 1次 /日,连续
给药 10天,停药后 24h颈椎脱臼法处死小鼠。
计算各组瘤重和抑瘤率 处死小鼠后称重并称量瘤重,
按下式计算抑瘤率: 抑瘤率 = (空白对照组平均瘤重 -治
疗组平均瘤重 ) /空白组平均瘤重 @ 100%。
21 3 免疫组化 收集移植瘤标本,用 F8因子和血管内皮
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DOI：10.13193/j.archtcm.2009.08.76.yitj.035
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生长因子分别标记行免疫组化并运用 IQAS医学图象定量
分析系统、医学图象定量分析软件, 定量检测 F8标记肿瘤
组织微血管密度 ( MVD ) [4 ]、血管内皮生长因子 ( VEGF )的
阳性表达率,对 MVD、VEGF结果进行分析。
214 统计学处理 计数数据用 €x ? s表示, 数据处理
Kruska l-W a llisH检验, 两两均数比较用 Nem eny i检验,计量
资料用 V 2检验。
3 结 果
311 各组肿瘤重量的比较 见表 1, 给药组瘤重与阴性对
照组相比显著降低 (P < 01 05), 而给药组之间未有显著差
异 (P > 0105)。高剂量组与低剂量组的抑瘤率分别是
531 2%和 4315%。
表 1 猫人参皂苷对小鼠肝癌细胞 H22
皮下移植瘤的抑制作用
组别 n 瘤重 ( g, €x ? s)
高剂量组 10 0. 942 ? 0. 508a
低剂量组 10 1. 141 ? 0. 48a
阴性对照组 10 2. 018 ? 1. 18
注:通过 K ruskal-Wal lisH 检验并进行两两比较, 与对照组相
比, aP < 0105。
312 各组肿瘤组织微血管血管密度 见图 1、表 2。图像
分析结果显示给药组小鼠肿瘤新生血管数与阴性对照组相
比显著减少 (P < 0105)。给药组之间未有显著差异 (P <
0105)。
表 2 肿瘤组织 MVD结果
组别 n MVD(€x ? s)
高剂量组 10 312 ? 0186a
低剂量组 10 4142 ? 2106a
阴性对照组 10 6141 ? 1172
注:通过 K ruskal-Wal lisH 检验并进行两两比较: 与对照组相
比, aP < 0105。
图 1 各组瘤组织 F8免疫组化标记
313 各组肿瘤组织 VEGF 见图 2、表 3。给药组小鼠
VEGF阳性表达率与对照组相比显著减少 (P < 01 05)。给
药组之间未见明显差异。
表 3 肿瘤组织 VEGF阳性率结果
组别 n VEGF阳性指数 VEGF阳性率 (% )
高剂量组 10 45684. 36 2. 2a
低剂量组 10 57102. 41 2. 4a
阴性对照组 10 69968. 17 2. 8
注:通过 V2 检验并两两比较,与对照组相比, aP < 0105。
图 2 各组瘤组织 VEGF的表达
4 讨 论
1971年 Fo lkm an提出肿瘤的发生发展依赖于新生血管
的供养,之后肿瘤血管生成抑制剂得到了长足发展 [5 ]。找
到一种有效且毒副反应较少的血管抑制剂,具有现实的临
床意义。中医药在治疗肿瘤和血管生成方面相关的病证有
着悠久的历史 [6], 且毒副反应较少, 适用于较多的人群。
血管内皮细胞 ( endo the lia l ce ll)的生存和增殖都离不
开 VEGF。在正常组织中, VEGF及类似分子的协同作用,
往往会被另一些因子拮抗, 使血管的生成处于一种动态的
平衡。任何时候,只要某个组织需要新生血管, 它就会主动
打破上述平衡,使它偏向血管生成的一方。一旦有了足够
的新生血管,促进和抑制血管生成的两股力量又会重新达
到平衡。但在肿瘤中,不平衡状态持续存在, 大多数实体瘤
中的 VEGF含量较高, 因此新生血管越来越多。依靠这些
新生血管的供养,实体瘤快速的生长。
笔者建立小鼠 H
22
细胞皮下移植性肿瘤模型, 腹腔注
射猫人参总皂苷,观察各组间肿瘤质量的变化。运用免疫
组化检测肿瘤组织微血管密度 ( MVD ) 、血管内皮生长因
子 ( VEGF )阳性表达。结果显示, 给药组较阴性对照组瘤
重、MVD和 VEGF阳性表达显著减少。这可能是因为肿瘤
的发生发展依赖与新生血管, 而 VEGF的降低使得新生血
管的数量减少。从而表现出抑制肿瘤生长的作用。
综上所述,笔者认为猫人参总皂苷具有抑制肿瘤生长
的作用,其作用机制之一可能是抗血管生成。
参考文献
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