全 文 ：中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2004, 35(10) · ·593
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Seasonal Variation of Flavonoids in Viola yedoensis Makino
DONG Ai-Wen 1, ZHU Sheng-Wen 2, HE Zheng 1
(1. Dept. of Biology Resources, Zhangjiajie School of Jishou University;
2. Sangzhi County Furongqiao Middle School, Zhangjiajie 427000)
ABSTRACT: n UV method for determination of flavonoids in Viola yedoensis Makino was established. The detection
wavelength was 510nm, and the average recovery was 99.8％. The result of variance analysis showed that the contents of
flavonoids had significant difference in the plant picked at different seasons.
Key Words: Viola yedoensis Makino; flavonoids; seasonal
量。结果得春、夏、秋季采收的紫花地丁中总黄
酮的平均含量(％，n＝3)分别为1.21、2.39和2.20。
表明夏季采收的黄酮类化合物含量最高，秋季
次之，春季最少。经单因素方差分析，得F＝ 857，
说明不同季节采收的紫花地丁中黄酮含量存在显著
性差异，因此紫花地丁采收的最佳时间是夏季。这
与湘西农民采药时间接近。
参考文献：
龚大春1，龚美珍1，刘晓玲2，张　娇1，邹　坤1
(1. 三峡大学化学与生命科学学院生物工程系；2. 三峡大学医学院基础部，湖北宜昌 443001)
中图分类号：R282.71 文献标识码：B 文章编号：1001-8255(2004)10-0593-02
兴山五味子中五味子甲素的提取及测定
收稿日期：2003-09-11
作者简介：龚大春(1967)，男，副教授，从事天然产物的分离和
手性化合物合成的研究。
Tel：025-83587330，01 813951617
E-mail：dchgong@eyou.com
五味子为木兰科植物，是应用最广泛的滋补中
药之一，具有益气、滋肾、敛肺、安神等功效，
主治肺虚咳喘、盗汗、痢疾、遗精、神经衰弱、
心悸、慢性肝火等症。湖北兴山五味子(Schisandra
incarnata)分布于湖北西部，在当地俗称“北五味
子”，但与中国药典 20 00 版收载的“北五味子”
不同[1]。五味子甲素(1)是五味子的主要活性成分
之一，有明显的促进肝糖元生成、降低转氨酶、保
护肝细胞等作用。因此，本文对兴山五味子中的 1
进行了提取分离，以求扩大五味子药材来源。
五味子中 1的提取方法主要有 3种。(1)回流提
取法，如醇提、水提等[2,3]，操作简单，成本低，
易扩大生产；(2)超临界CO2萃取法[4, 5]，设备要求
高；(3)法多索溶剂(phytosol solvent)法[6]，操作复
杂，设备容量仅 100g，不易扩大生产。本文参照
文献[2, 3]的回流提取法，并建立了 RP-HPLC法对提
取物进行分析。
1 仪器和试药
Waters高效液相色谱仪，包括 2690型高压泵、996型
二极管阵列检测器。
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兴山五味子(湖北宜昌中药材公司，由湖北宜昌药品检
验所鉴定)； 1对照品(中国药品生物制品检定所，含量大于
98％)。
2 方法与结果
2.1 分离提取
取兴山五味子 20g，磨碎，用水浸泡 24h后烘
干，加甲醇回流提取。由于甲醇浓度(A)、提取
时间(B)、提取次数(C)和甲醇 -样品的比例(D)等
因素对提取率均有影响，采用正交试验(因素水平
见表 1)进行工艺优化。结果表明，A、B、D 3
因素对五味子的分离提取影响较大。最佳条件为
A2B1C2D3(正交结果存编辑部备索)。
取按优化工艺制得的提取液，蒸干后以少量氯
仿溶解，上氧化铝柱，依次用石油醚(30～60℃)
和氯仿洗脱，收集氯仿洗脱液，蒸干后加甲醇溶解
并定容至 10ml，摇匀，作为供试品溶液。
2.2 色谱条件优化
流动相：曾采用不同配比的甲醇 -水(85∶15、
70∶30、60∶40)为流动相进行分离测定。结果
表明，随着甲醇比例的减小，1的保留时间延长，
但其它杂质峰明显较多。采用甲醇 -水(85∶15)作
流动相，线性关系和重现性均较好，且流速控制在
1ml/min时分离效果最好。
柱温：柱温对 1的色谱行为有较大影响。柱温
过高或过低都会导致 1及五味子乙素与其它杂质的
分离度减小，甚至达不到基线分离。本试验采用柱
温 30℃，分离效果较好。
检测波长：于 190～400nm波长范围内进行紫
外扫描，1在 220nm处有最大吸收，且响应最强，
故选择 220nm为检测波长。
优化所得色谱条件为：色谱柱 Nova-Pak C18
(3.9mm× 150mm，4mm)；流动相 甲醇 -水(85∶
1 5)；流速 1 m l / m i n；柱温 3 0℃；检测波长
220nm。在本色谱条件下，1保留时间约为 3min(见
图 1)。
2.3 线性试验
精密称取减压干燥至恒重的 1对照品 3mg，置
10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀。分别精
密量取 3、5、7、9、11和 15ml，进样测定。以
峰面积(A)为纵坐标，1进样量 Q(mg)为横坐标，
绘制标准曲线。得 1回归方程 A＝ 3.81× 106Q－
4.43× 104(r＝ 0.9999)。
2.4 精密度试验
精密量取 0.3mg/ml的 1对照品溶液 10ml，于1d
内连续测定 6次，得 RSD 为 0.25％。
2.5 兴山五味子中 1的测定
精密量取“2 . 1”项下供试品溶液进样测定，
见图 2。代入标准曲线计算得兴山五味子中 1的平
均含量为 0.22％(n＝ 5)。
(下转第608页)
表1 因素水平表
D(甲醇 -样品量，w/w)
3
6
9
水平
1
2
3
因素
A /％
90
80
70
B/min
120
90
60
C
1
2
3
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2的含量(标示量％)分别为102.4、101.9、103.0和
100.5、100.4、102.1，RSD(％，n＝3)分别为
0.24、0.70、1.09和0.69、1.31、0.56。
3 讨论
3.1 曾尝试在同一色谱条件下同时测定复方制剂中
1和 2 的含量，但由于两者含量悬殊，未能成功。
由于 1在 232nm波长处有最大吸收，在 300nm波长
处几乎无吸收；而 2在 229、274和 300nm波长处
均有最大吸收，在 2获得较好检测浓度时，1的浓
度很大，严重超载而影响色谱柱的使用寿命。为此
本文选择分别在 232和 300nm处测定 1和 2的含量。
3.2 在本色谱流动相中，十二烷基硫酸钠起着离子
对色谱的作用，延长 1的保留时间，有效地将其与
其它组分及杂质分离。
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Extraction and Determination of Deoxyschizandrin from Schisandra incarnata
GONG Da-Chun1, GONG Mei-Zhen1, LIU Xiao-Ling2, ZHANG Jiao1, ZOU Kun1
(1. Dept. of Biologic Engineering, College of Life and Chemistry, Three Gorges University;
2. Dept. of Basic Education, College of Medical Science,Three Gorges University, Yichang 443001)
ABSTRACT: Deoxyschizandrin was extracted from Schisandra incarnata by methanol reflux. The extraction process
and RP-HPLC separation conditions were optimized. The optimal extraction conditions were as follows: nine volumes of
80％ methanol reflux 120min, for two times. A C18 column was used with the mobile phase of methanol-water(85∶15)at
the detection wavelength of 220nm. The column temperature was 30℃ with the flow rate of 1ml/min. The average content
of deoxyschizandrin in Schisandra incarnata was 0.22％.
Key Words: Schisandra incarnata; deoxyschizandrin; reflux solvent extraction; RP-HPLC
fffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff
Determination of Metformin Hydrochloride and Glibenclamide
in Compound Metformin Hydrochloride Tablets by HPLC
GONG Yong-Jun, CHEN Mei-Rong, HE Jing, LUO Rong
(Jiangxi Province Institute of Materia Medica, Nanchang 330029)
ABSTRACT: HPLC method for determination of metformin hydrochloride and glibenclamide in compound metformin
hydrochloride tablets was established. Diclofenac sodium was used as the internal standard. A Hypersil BDS C18 column was
used with the mobile phase of methanol-3mmol/L lauryl sodium sulfate solution(containing 0.1％ triethylamine, pH 3.5)
(67∶33). The flow rate was 1ml/min. The detective wavelengths were 232nm and 300nm, respectively. The calibration
curves of metformin hydrochloride and glibenclamide were linear in the range of 0.03～0.3mg(r＝0.9998) and 0.5～4mg
(r ＝0.9999), respectively. The average recoveries were 100.1％(RSD 0.22％)and 99.9％(RSD 0.36％), respectively.
Key Words: metformin hydrochloride; glibenclamide; HPLC; determination