全 文 ：臭梧桐薄膜包衣片中黄酮类成分的含量测定
上海中医药大学 (2 0 03 0)2 范广平 王新宏 魏春敏 王智华 洪筱坤
提要 采用 U V法及 E L rC 法分别对臭梧桐薄膜包衣片中的总黄酮及海常素进行定量测定 ,
平均回收率为 97 . 。%和 95 . 7% 。 前者简便易行 ,后者对有效成分控制准确可靠 ,两者结合可为
控制该制剂的内在质量提供可靠的依据 。
关键词 臭梧桐薄膜包衣片 黄酮类 海常素
臭梧桐 , 学名海州常山 (口 e代以胡d ,
t
icr ho
t溯 u m T hu bn . ) , 系马鞭草科 ( V云月坛-
an ~
心 )植物 , 历代 医家用以治疗风湿 、 半肢
风 、 半边头痛 、 高血压等症 。五十年代以来 ,我
国学术界对其降血压作用进行了一系列研
究 ,证明臭梧桐对麻醉或不麻醉动物均有降
压作用 , 并以第二度降压作用为主 ,该作用温
和持久 , 且无副作用 l[, 2, 3〕。 曾广方 、陈泽乃等
曾在臭梧桐叶中提取分离出海常素 ( lC er 。 -
de
n d ir n)
, 初步 药理实验证明其有降压作
用 [’. 5〕 。本文以总黄酮和海常素为定量指标对
臭梧桐薄膜包衣片进行了含量测定 , 结果表
明 ,本法操作简便 ,重现性好 , 回收率 95 %以
上 , 为制订该抗高血压新药的质量标准提供
了可靠的科学依据 。
1 仪器 、 试剂与材料
1
.
1 仪器 : 高效液相色谱仪 (平流泵 Y S B一
2 型 ,检测仪 D Z一 1 型 , 2 54 紫外检测器 ) , 中
科院上海分院科学仪器厂 。 数据处理机
( C DM C一 I A 色谱数据处理机 ) ,上海计算技
术研究所 。 紫外分光光度计 ( U v 一7 5 4 ) ,上
海第三分析仪器厂。
1
.
2 试剂与材料 : 臭梧桐 (购自徐汇中药饮
片厂 ,经本校生药教研室周秀佳教授鉴定 ) ;
海常素标准对照品 (按文献方法 [’j 由臭梧桐
叶中提取分离得结晶后 ,经 T L C 证实为单一
组分 , U V 光谱 、 IR 光谱及熔点鉴定确为海
常素 , H r 1J C 测定纯度为 90 . 5 % ) ;模拟样品
(臭梧桐干浸膏粉 : 自制 ) ;样品 (臭梧桐薄膜
包衣片 : 上海中药一厂提供 ) ; 甲醇 (色谱纯 ) ;
一, 5 5年第 1 7 卷第 1 1期
U V H P L C
其他试剂均为 A R 。
2 总黄酮的含 t 测定 : 紫外分光光度法
( U V )
2
.
1 标准溶液的制备 :精密称取海常素对照
品 s m g , 溶于甲醇并定容至 1 0ml , 得 0 . s m g /
而 的标准贮备液 ,使用时按需要逐级稀释至
0
.
I n l g /而 , 0 . 05 m g /d 及 0 . ol m g /而 。
2
.
2 供试液的制备 : 精密称取模拟样品 0 . 5
g , 用 5而 5%氢氧化钠溶液溶解后 , 用乙酸乙
醋提取 2 次 (每次 5而 ) ,弃去有机层 ,水层用
6mo l/ I
, 盐酸调至 p H Z一 3 ,立即过滤后再用乙
酸乙醋提取 3 次 (每次 5而 ) , 取乙酸乙醋层
于水浴上蒸干 , 残渣用 甲醇溶解 , 定容至
1 0 n il
。
2
.
3 测定波长的确定 : 用 0 . ol grn /而 的海
常素标准液在 2 20 一 40 0 l l m 范围内以甲醇为
参比 , 测定吸光度 , 得吸收曲线 (图 1 ) , 在
26 8~ 及 3 3 8 n m
, 处有最大吸收 。 将供试液
稀释 10 倍后于 220 一 40 0 n m 范围内测定吸
光度 , 在 264 一 27 o n n 、 处有最大吸收 。 因此 ,
确定 2 68 nr 为测定波长
。
0
.
3 0
\ 人 ; n 。 ,
3 3 8 4 0 0
,
图 1 海常素紫外吸收曲线
2
.
4 标准曲线的制备 :精密吸取 0 . 05 n r g/
而 的标准液 1, 2 , 3 , 4 , s d ,分别用甲醇定容
至 1 0 lrn ,在 2 6 8urn 处测定吸光度 ,见表 1 。
表 1 标准曲线的制备 ( UV )
V ( lrn ) 1 2 3 4 5
A 0
.
13 6 0
.
2 6 6 0
.
4 0 2 0
.
5 4 7 0
.
6 8 3
得回归方程 : A - 一 4 . 2 X 1 0一 3 + 6 . 13 7
V
, r
= 0
.
9 999
。
其中 : A一吸光度 , V一 0 . Os m g /而 标准
液的毫升数 。 上述结果说明标准对照品浓度
在 5、 g /耐一 2 5、 g /而 范围内 , A一 v 具有 良
好的线性关系 。
2
.
5 样品提取方法的确定 : 按 2 . 2项下的方
法制备供试液 , 至 “ 用乙酸乙醋提取 2 次 ,弃
去有机层 ” ,取水层按以下不同条件分别用乙
酸乙醋进行提取 :
2
.
5
.
1 不同 p H 条件的比较 : 分别在 pH I ,
p H Z
一
3
,
p H 6一 7 条件下立即过滤后 , 用乙酸
乙醋提取 3 次 (每次 s d ) ,取有机层 ,挥去溶
剂 , 用甲醇溶解并定容至 1 0 xn l , 稀释 10 0 倍
后测定总黄酮含量 , 结果表明 p H Z一 3 为最
佳 , 见表 2 。
2
.
5
.
2 提取次数的比较 : 在 p H Z一 3 条件下
立即过滤后用乙酸乙醋分别提取 1 , 3 , 5 次
(每次 5而 ) , 取有机层 , 同 2 . 5 . 1 法定容并测
定之 ,结果表明提取 3次即可 ,见表 2 。
表 2 样品提取条件的比较 n ~ 3
提取条件不一嗜乌若万下粤兴女架黯
总黄酮含 3 4 . 34 25 . 4 8 3 4 . 8 1 3 3 . 4 5量 (吨 g/ ) 3 5 . 0 5 2 7 . 8 2 3 5 . 2 6 3 1 . 9 9
2
.
5
.
3 放置时间的比较 : 文献报道 ,稀氢氧化
钠水溶液浸出能力较大 ,但浸出杂质多 ,如将
其浸出液酸化 ,半小时内先析出的沉淀物多
半是杂质 ,半小时后滤液中再析出的可能是
较纯的黄酮类化合物川 。 因此 , 在 pH Z一 3 条
件下 ,分别在半小时内及半小时后过滤 ,再用
乙酸乙醋提取 3 次 (每次 5而 ) , 取有机层 , 同
2
.
5
.
1 法定容并测定之 , 结果表明放置时间
对提取效果无影响 ,见表 2 。
因此 , 确定按 2 . 2 项下的步骤制备供试
·
3 8
·
液 ,然后稀释 10 倍 , 于 2 68n m 处测定吸光
度 ,并由标准曲线计算总黄酮含量 。样品中总
黄酮含量 (以海常素计 )按下式计算 :
总黄酮 ( grn / g ) ~ s v /ws式中 , V 一样品相当于 0 . 0 5mg /而 标准
液的毫升数 ,做一样品重 ( g ) 。
2
.
6 重现性的测定 :依上法对同一样品进行
5 次平行测定 ,结果见表 3 。
表 3 盆现性的测定
样品编号 实侧值 平均值 R SD (写 )
3 1
3 l
3 3
9 9
6 0 3 0
.
88 2
.
2 7
3 0
.
4 5
3 0
.
0 1
2
.
7 回收率的测定 : 精密称取 2 份模拟样品
(每份 5伪m g ) , 其中一份精密加入一定量的
标准溶液 ,按 2 . 5 项下确定的方法测定总黄
酮含量 ,计算回收率 ,结果见表 4 。
衰 4 回收率的侧定
侧定祥品中总黄阴加标量次序 t (叱 5/ 伪1堪 ) (mg )
侧得t
(
n堪 )
2
.
5 1 2
3
.
0 2 4
3
。
4 1 0
回收率 平均回 R S D
(肠) 收率 (肠 ) (% )
10
.
2
9 6
.
9 9 7
.
0 2
.
6
9 4
.
0
0
ù勺…1占`.上,自,上叮尸丹」ó勺ù眨」…. .几,二,人,人匀丹」
2
.
8 样品测定 : 依 2 . 5 项下确定的方法对 3
批臭梧桐薄膜包衣片样品进行总黄酮含量测
,结果见表 5 。
批号
样品侧定 n ~ 3
总黄酮含量 ( mg / g )
定表
RS D (% )
93 10 9
93 12 0 6
94 0 1 14
1 8
.
4 7
1 7
.
14
1 7
.
17
2
.
90
2
.
4 6
2
.
1 9
3 海常素的含 t 测定 : 高效液相色谱法
( H F I一 )
3
.
1 测定条件 : 色谱柱 : C I。反相柱 , 4 . 6 X
20 0 n u 刀 (国产 ) ;流动相 : 甲醇一水一冰乙酸
( 3 0
,
58
,
8 ) ; 流速 : 1而 /而 n ;检测波长 :
25 4mn
;灵敏度 : .0 04 ;室温下操作 。
3
.
2 标准对照品及样品 H P I刃 色谱图 : 精
密吸取 0 . l m g /而 标准溶液 2 0时 及 2 . 2 项
下制备的供试液 5以 , 在高效液相色谱仪上
分别进样 ,得图谱见图 2 、 图 3 、 图 4 。
中 成 药
(每份 0. 5 9 ),其中一份精密加入一定量的标
准溶液 , 按 2 . 2 项下的方法制备供试液 , 按
3
.
4 项下的方法测定含量 , 并计算回收率 , 结
果见表 8 。
表 8 回收率的测定
测定样品中海常素次 J翔量 (mg 0/ · g5 加标量 测得量n堪
1
。
0
(
n堪 )
回收率 平均回 SR D
( % ) 收率 (% ) (% )
2 2
.
3 6
3 2
.
4 7
3
.
48 9 4
.
3
.
8 1 9 6
.
7 9 5
.
7 1
.
2 8
图 2 海常素 图 3 供试液 图 4 加标供试
H r L C 图谱 H卫 L C 图谱 液 H P L C 图谱
3
.
3 标准曲线的制备 :精密吸取 0 . lmg /而
标准溶液 1 0 , 1 5 , 20 , 25 以在高效液相色谱仪
上进样 ,得积分数据见表 6 。
表 6 标准曲线的制备 (H P L C )
V (协l ) 10 1 5 20 25
A 8 9 46 1 5 7 7 8 2 40 0 7 3 14 12
得回归方程 : A - 一 6 4 3 3 . 7+ 1 5 1 2 . 54 V
r
= 0
·
9 9 9 4
。
其中 : V一标准溶液进样 以数 , A一色谱
峰面积 。
上述结果说明标准对照品进样量在 1一
.2 5 0 9 范围内 A一 v 呈良好的线性关系 。
3
.
4 定量方法的确定 : 采用标准加入法对海
常素含量进行测定 。 精密吸取 2 . 2 项下制备
的供试液 1而 , 加入 0 . 25 耐 标准液 (0 . smg /
而 ) , 混匀后吸取 10 叭进样 (图 4 ) , 由标准曲
线计算海常素含量 ,并扣除加标量 ,即得样品
含量 . 样品中海常素含量按下式计算 :
海常素 (叱 / g ) = l o x ( 0 . o l z sv 一
0
·
0 7 5 ) /W
s
式中 : V一样品相当于 0 . l grn /而 标准
溶液的 口数 , W s一样品重 ( g ) 。
3
.
5 重现性的测定 : 依上法对同一样品进行
3 次平行测定 ,结果见表 7 。
表了 盆现性的测定
4
.
4 0 9 6
.
5
匕d
o
:
ù .工Q口
样品编号 嗜黯宣壑耀裔一 ~ 、
2
.
5 7
2
.
4 9
2
.
6 1
2
.
5 5 1
.
7 8
3
.
6 回收率的测定 : 精密称取模拟样品 2份
3
.
7 样品测定 : 依 3 . 4 项下确定的方法对 3
批臭梧桐薄膜包衣片样品进行海常素含量测
定 ,结果见表 9 。
表 9 样品测定 n ~ 3
样品批号 海常素含量 (哪 /砂 R SD ( % )
9 3 10 0 9 1
.
5 8 1
.
9 9
9 3 1 2 0 6 1
.
4 8 1
.
8 7
9 4 0 1 1 4 1
.
5 2 1
.
6 4
4 讨论
由于海常素含量较低 ,本文采用标准加
入法 ,使测量的峰面积数值增大 ,减小了测定
误差 ,可获得满意的结果 。标准溶液的加入量
应视样品中实际含量而定 , 约为实际含量的
1一 2 倍为宜 。
鉴于海常素是中药臭梧桐中研究较多的
有效成分 , 属黄酮类结构 , 为此本文设计了
U v 和 H p l .C 方法分别测定总黄酮和海常素
的含量 。 前者方法简便易行 , 但因将 268 ~有吸收的物质均计量在内 , 因此所得结果较
高 ;而后者对有效成分含量控制 , 准确可靠 。
作者认为 ,两者的结合能更全面地反映和控
制黄酮类成分的含量 ,从而为控制该制剂的
内在质量提供可靠的依据 。
参 考 文 献
l 徐叔云 ,等 . 药学学报 , 1 9 6 2 , 9 ( 1 2 ) : 7 3 4
2 王孝路 ,等 . 药学学报 , 19 60 , 8 (2 ) : 87
3 沈家麟 ,等 . 上海中医药杂志 , 19 57 , ( 4) : 5 ~ 10
4 曾广方 ,等 . 药学学报 , 1 9 6 3 , ( 1 0 ) 8 : 4 8 0~ 4 8 6
5 陈泽乃 ,等 . 药学学报 , 1 9 8 8 , 2 3 ( 1 0 ) : 7 8 9一 7 9 1
6 肖祟厚主编 . 中药化学 , 上海科学技术出版社 , 19 87 :
2 0 7
1 9 9 5 年第 1 7 卷第 1 1期
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.
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5 5 3
.
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.
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