全 文 ：书收稿日期:2012-06-24; 修订日期:2012-10-15
基金项目:国家自然科学基金( No． 31160213)
作者简介:邹晓琴( 1978-) ，女( 汉族) ，江西高安人，现为江西赣南医学院
讲师，硕士学位，主要从事慢性痛的基础研究工作．
* 通讯作者简介:黄 诚( 1968-) ，男( 汉族) ，江西吉安人，现为江西赣南
医学院教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事针刺镇痛与免疫研究
工作．
臭牡丹根提取物对神经病理性痛的镇痛作用
邹晓琴，欧阳娟，黄 诚*
(赣南医学院，江西 赣州 341000)
摘要:目的 探讨臭牡丹根提取物对大鼠神经病理性痛的镇痛作用。方法 清洁级雄性 SD 大鼠 48 只，体质量 180 ～ 220
g，随机分为 6 组，每组 8 只。各组分别于术前 1 天和术后 1，4，7，10，14，21 天观察机械缩足反射阈值( MWT) 和热缩足反
射潜伏期( TWL) 。各组于术后 21 天处死大鼠，通过酶联免吸附法测定大鼠腰段脊髓中细胞因子的含量。结果 与模型
组比较，术后低剂量组和中剂量组机械缩足反射阈值( MWT) 升高( P ＜ 0． 05) ，大鼠腰段脊髓 TNF － α、IL － 1β、IL － 6 降
低。中剂量组术后热缩足反射潜伏期( TWL) 升高( P ＜ 0． 05) ; 与低剂量组比较，中剂量组术后热缩组反射潜伏期升高，
TNF － α、IL － 1β、IL － 6 含量均下调( P ＜ 0． 05) ，机械缩足反射阈值( MWT) 差异无统计学意义( P ＞ 0． 05) 。结论 臭牡丹
根提取物低剂量( 10 g /kg) 、中剂量( 30 g /kg) 可减轻大鼠神经病理性痛，中剂量( 30 g /kg) 效果更明显，其机制可能与抑
制 TNF － α、IL － 1β、IL － 6 表达上调有关。
关键词:臭牡丹根提取物; 神经病理性痛; 细胞因子
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 01． 006
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 01-0012-03
Effect of Clerodendron bungei steud roots extract on neuropathic pain in rats
ZHOU Xiao-qin，OU Yang-jan ，HUANG Cheng*
( Gannan Medical University，Ganzhou Jiangxi 341000，China)
Abstract: Objective To investigate the effect of clerodendron bungei steud roots extract on neuropathic pain in rats．Methods -
Fourty － eight male SD rats weighing 180 ～ 220g were randomly divided into 6 groups ( n = 8 each) : I control group;Ⅱ sham oper-
ation group; Ⅲ spinal nevel ligation group andⅣ，Ⅴ，Ⅵ clerodendron bungei steud roots extract treatment groups． Mechanical
withdrawal threshold ( MWT) and thermal withdrawal threshold( TWL) were measured at day 1 before operation and day 1，4，7，
10，14 and 21 after operation ． The animals were deeply anesthetized and decapitated at day 21 after operation ． The lumbar seg-
ment of the spinal cord was removed for determination of TNF － α、IL － 1β、IL － 6 expression by euzymelinked immunosorbent as-
say ． Ｒesults Clerodendron bungei steud roots extract of 10、30g /kg significantly increased the mechanical withdrawal threshold
( MWT) and clerodendron bungei steud roots extract of 30g /kg siginificantly increased thermal withdrawal threshold( TWL) com-
pared with control group ． The expression of TNF － α、IL － 1β、IL － 6 in the spinal cord was significantly increased in chronic con-
strictive injury group ． clerodendron bungei steud roots extract of 10、30g /kg obviously decreased the expression of TNF － α、IL －
1β、IL － 6 in the spinal cord ． Conclusion Clerodendron bungei steud roots extract of 10，30 g /kg can relieve neuropathic pain by
inhibiting the up － regulation of TNF － α、IL － 1β、IL － 6 expression in the spinal cord．
Key words: Clerodendron bungei steud roots extract; Neuropathic pain; Cytokine
据 WHO的一项数据显示，在 2005 年，全世界的神经病理性
痛患者大约为 3 760 万，而到 2011 年预计增加至 3 910 万人，不
容置疑，有效控制和治疗神经病理性痛仍然是当今临床面临的最
大挑战。由于神经病理性痛是临床上的常见病和慢性病，严重影
响患者的生活质量，且目前临床治疗效果不甚理想。因此，对神
经病理性痛发病机制进一步的理解和认识将有助于控制和治疗
该疾病，当今神经病理性痛已成为国际疼痛医学研究的热点，阐
明神经病理性痛的发生发展过程以及寻找其新的治疗靶点和药
物将具有很重要的现实意义。臭牡丹属马鞭草植物，分布于我国
江西、四川、福建、广东等省，有资料记载臭牡丹具有活血散瘀、消
肿解毒等功能。本研究拟探讨臭牡丹根提取物对大鼠神经病理
性痛镇痛作用的影响。
1 材料与方法
1． 1 药材 新鲜臭牡丹采自赣州，取适量臭牡丹根加两倍量的蒸
馏水煮沸 1 h后过滤，残渣再用蒸馏水加热提取 1 次。合并两次
滤液，通过旋转蒸发仪浓缩后 3 倍量 95%的乙醇放置 48 h，通过
旋转蒸发仪和减压抽滤器过滤并回收滤液中的乙醇至无醇味，备
镇痛试验用，调整至 4g /ml的生药业备用［1］。
1． 2 仪器 Ｒ － 210 /215 旋转蒸发仪(瑞士 Buchi)、手动匀浆机、
酶标仪(Moae1550，美国 BIO － ＲAD 公司)、超速低温离心机、电
热恒温鼓风干燥箱 (上海跃进医疗器械厂)、2390 Electro Von
Frey 测痛仪(美国 Tc公司)、热痛刺激仪(中国科学院生物医学
工程公司)。
1． 3 动物分组 清洁级雄性 SD大鼠 48只，体质量 180 ～220 g，由
江西中医学院动物中心提供。随机分为 6 组，每组 8 只。对照组
(腹腔注射生理盐水) ，假手术组(分离脊神经但不结扎 +腹腔注
射生理盐水) ，模型组(脊神经结扎 +腹腔注射生理盐水) ，低剂量
治疗组(脊神经结扎 +腹腔注射臭牡丹根提取物 10g /kg) ，中剂量
治疗组(脊神经结扎 +腹腔注射臭牡丹根提取物 30g /kg) ，高剂量
治疗组(脊神经结扎 +腹腔注射臭牡丹根提取物 60g /kg)。各组
分别于术前 1天和术后 1，4，7，10，14，21天观察机械缩足反射阈值
(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。各组于术后 21 天处死大
鼠，通过酶联免吸附法测定大鼠腰段脊髓中细胞因子的含量。
1． 4 动物模型制备 按 Kim 和 Chung 报道的方法建立大鼠神经
病理性痛模型［2］。腹腔注射 10%水合氯醛 0． 3 ml /100 g，消毒、
铺巾，在大鼠 L4 ～ S1 水平切取一侧椎旁肌肉，切除 L6 脊椎横突，
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1
书分离 L4 ～ L6 脊神经，用 4 ～ 0 医用丝线分别紧紧结扎 L5 和 L6 脊
神经，或仅结扎 L5 脊神经。术后动物出现步态异常，但手术侧后
肢除了轻度外翻、足趾紧收外，无其他畸形改变。术闭放回原笼，
单笼饲养。
1． 5 检测指标测定
1． 5． 1 热痛敏测定 将大鼠置于一底部为 2mm 厚玻璃板的
20cm × 20cm × 25cm的透明有机玻璃箱中，并放置于高于实验台
30cm的架子上以便观察，待测大鼠于箱中适应 30min 以上，使之
从不安到逐渐安静下来。应用 ＲTY － 3 型辐射热刺激仪，内装
100W卤素投射灯，调节电压至 10V，调节灯源与玻璃板之间的距
离，使落在足底的照射光圈直径为 5mm，记录从照射开始至出现
缩足逃避反射时间(s) ，此即为 PWTL;重复测量 3 ～ 5 次，同一部
位间隔 10min，不同部位间隔 5min，取 TWL 平均值。如果大于
40s大鼠仍无反应则停止照射，以免导致足底组织热损伤。
1． 5． 2 机械痛敏测定 采用 2390 Electro Von Frey 测痛仪测定大
鼠机械痛敏［3］。将大鼠置于透明的有机玻璃箱中，底为 1 cm × 1
cm的铁丝网，实验前先适应 15 min。采用测痛仪由下往上垂直
刺激大鼠足底光滑皮肤，逐渐加大刺激强度，记录出现缩足反应
(如舔足、甩腿等)时的刺激强度为机械缩足反射阈值(Mechani-
cal Withdrawal Threshold，MWT) ，最大刺激强度不超过 90g，每只
大鼠测定 5 次，每次间隔 10s，取其平均值。
1． 5． 3 细胞因子测定 各组于术后 21 天处死大鼠，从背部将脊
柱两侧的肌肉剪除，然后在 T8 ～ T9 剪断，下在 L5 ～ L6 剪断，从下
端可以看到椎管下孔并有尾丝露出，此时用 20ml 的注射器抽取
5 ～ 10ml的生理盐水，将针头插进下孔 0． 5cm，向上端助推注射
器，很快可以看到脊髓从上端涌出非常完整的脊髓(包括腰膨
大)。取腰段脊髓，加入一定量的 PBS(pH = 7． 4) ，用手工匀浆机
将标本匀浆充分(此项操在碎冰上进行)。通过高速离心机
(2 000 ～ 3 000 r /min)离心 20 min。仔细收集上清。分装后一份
待检测，其余超低温冰箱内保存。通过酶联免吸附法检测腰段脊
髓中的肿瘤坏死因子(TNF － α)、白细胞介素 － 1(IL － 1β)、白细
胞介素 － 6(IL － 6)的含量。具体检测方法按酶联免吸附法试剂
盒操作说明书。
1． 6 统计方法 用 SPSS 10． 0 进行统计学分析，所有数据用 珋x ± s
表示，组间比较采用单因素方差分析，P ＜ 0． 05 认为有统计学
意义。
2 结果
2． 1 臭牡丹根提取物对神经病理性痛机械痛敏和热痛敏的影响
结果显示:剂量为 10 g /kg 和 30 g /kg 的臭牡丹根提取液可显著
减轻大鼠神经病理性痛模型的机械痛敏(MWT) (P ＜ 0． 05) ，尤
以剂量为 30 g /kg 效果更明显(见图 1)。30 g /kg 的臭牡丹根提
取液可显著减轻大鼠神经病理性痛模型的热痛敏(MWT) (P ＜
0． 05)。见图 2。
给药组和模型组比较，* P ＜ 0． 05;模型组和假手术组比较，△P ＜ 0． 05
图 1 各实验组在不同时间点机械痛敏测定的比较
给药组和模型组比较，* P ＜ 0． 05;模型组和假手术组比较，△P ＜ 0． 05
图 2 各实验组在不同时间点热痛敏测定的比较
2． 2 臭牡丹根提取物对神经病理性痛细胞因子含量的影响 结
果表明:剂量为 10g /kg 和 30g /kg 的臭牡丹根提取液作用于模型
大鼠后，细胞因子(TNF － α、IL － 1β 和 IL － 6)的含量均显著下降
(P ＜ 0． 05) ，尤以剂量为 30g /kg 效果更明显(见图 3 ～ 5)。
给药组和模型组比较，* P ＜ 0． 05;模型组和假手术组比较，△P ＜ 0． 05
图 3 各实验组大鼠脊髓组织 TNF － α含量比较(n = 8)
给药组和模型组比较，* P ＜ 0． 05;模型组和假手术组比较，△P ＜ 0． 05
图 4 各实验组大鼠脊髓组织 IL － 1β含量比较(n = 8)
给药组和模型组比较，* P ＜ 0． 05;模型组和假手术组比较，△P ＜ 0． 05
图 5 各实验组大鼠脊髓组织 IL － 6 含量比较(n = 8)
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期
书3 讨论
在本研究中，模型组大鼠术后出现术侧足内收，后足轻度外
翻和跛行，机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期
(TWL)均下降，说明神经病理性痛模型制备成功。臭牡丹根提取
物通常以生理盐水作为溶剂，为了排除溶剂效应的干扰，本研究
各组均腹腔注射生理盐水。本研究根据预实验和臭牡丹根提取
物腹腔注射常用剂量，选择腹腔注射低剂量(10 g /kg)、中剂量
(30 g /kg)、高剂量(60 g /kg)臭牡丹根提取物，观察其对神经病
理性痛的影响。结果表明，30 g /kg 的臭牡丹根提取液可显著减
轻大鼠神经病理性痛模型的热痛敏(TWL)和机械痛敏(MWT)
(P ＜ 0． 05) ，说明臭牡丹根提取物对神经病理性痛具有明显的镇
痛效果。其机制可能与降低大鼠腰段脊髓的肿瘤坏死因子(TNF
－ α)、白细胞介素 － 1β(IL － 1β)、白细胞介素 － 6(IL － 6)的表达
上调有关。
目前对神经病理性痛发病机制的研究主要集中在外周和中
枢两个方面。研究认为神经损伤后，外周异位冲动长期持续地兴
奋脊髓及其上位中枢，使中枢神经系统发生可塑性变化，即结构
和生化功能发生改变，引起中枢敏化［4 ～ 6］;有资料表明神经免疫
系统的激活参与了神经病理性痛的过程［5］。神经系统与免疫系
统之间可通过递质、神经肽、细胞因子及其受体产生相互作用，其
中细胞因子是联系神经 －免疫反应的关键分子，尤其一些致炎
细胞因子(TNF － α、IL － 1β、IL － 6)和某些趋化因子在神经病理
性痛的形成和维持中起着重要作用［7，8］，如 TNF － α 参与了神经
病理性痛热痛敏和机械痛敏的形成［7，8，10］。有实验显示，TNF － α
是外周神经损伤后最先表达的炎性因子之一，且其水平显著升
高［7，8］，同时它可诱导 IL － 1β、IL － 6 等细胞因子以及 SP、CGＲP
和 NGF 的产生［8］。而且 IL － 1β 可以通过诱导初级感觉神经产
生 COX － 2、iNOS 和 SP 等炎症介质及谷氨酸［9，10］，引起中枢敏
化，从而形成持续性疼痛。
炎性细胞因子 TNF － α、IL － 1β、IL － 6 作为典型的脊髓中的
免疫信号具有双向调节的作用，可通过与特异性受体结合激活神
经元和胶质细胞。其可能的机制为激活炎症细胞，促进缓激肽、
兴奋性氨基酸、氧自由基等的释放，敏化脊髓背角神经元，也可改
变细胞膜上的钠、钙通道的通透性，迅速提高神经元的兴奋性，诱
发疼痛产生［7］。在病理情况下，初级传人纤维终末释放的神经
递质和痛觉传递神经元释放的疼痛物质都可激活胶质细胞。在
激活状态下，星形胶质细胞和小胶质细胞释放大量神经活性物质
如炎性细胞因子(TNF － α、IL － 1β、IL － 6)。这些物质作用于脊
髓背角痛觉传递神经元引起兴奋性氨基酸和 P 物质等的释放。
随着痛信号的不断传入，痛觉传递神经元细胞膜上的 NMDA 受
体也被激活 NO合成增多;扩散至周围细胞之间的 NO 既作用于
突触前终末，增强兴奋性氨基酸和 P 物质进一步释放，又作用于
突触后的痛觉传递神经元使痛觉传递神经元处于敏化状态，引起
中枢致敏［9］。
在病理状态下，炎症因子彼此之间互相促进，存在协同效应，
导致疼痛持续状态的产生。总之，细胞因子与神经病理性疼痛之
间的研究还处于开始阶段，细胞因子对损伤神经的免疫调控作用
已经引起广大研究人员的注意。通过抑制 TNF － α、IL － 1β和 IL
－ 6 等致痛因子的产生，阻滞它们的作用通路必定会成为今后治
疗神经病理性疼痛的研究热点。
尽管对神经病理性痛的形成和维持过程及机制研究有了很
大的进步，但目前在国际和国内仍然缺乏合适的治疗措施。据文
献报道，目前有关神经病理性痛治疗主要以药物为主，常用的有
抑郁药、抗炎药、局麻药及其衍生物、辣椒素、阿片物质和 NMDA
受体拮抗剂等［11］，迄今为止，吗啡仍然是治疗神经病理性痛的首
选药，考虑到神经病理性痛治疗的长期性，这些药物治疗的副作
用较大，比如阿片受体激动剂长期应用易发生耐受和成瘾等，因
而极大地限制了它们对神经病理性痛治疗的有效性。近年来，为
弘扬祖国传统医学，国家加大了对中医药的研究力度，以期充分
挖掘它们的作用功效及机理。因此，对目前尚未有合适治疗效果
的神经病理性痛来说，寻求中医药的治疗途径值得尝试。臭牡丹
属马鞭草植物，分布于我国江西、四川、福建、广东等省，有资料记
载臭牡丹具有活血散瘀，消肿解毒等功用。臭牡丹根的化学成分
预试结果表明，其根茎具有生物碱和明显的黄酮反应［12］。刘建
新等的研究表明臭牡丹根提取液具有较强的镇痛作用，该作用不
能被纳络酮所阻断，提示臭牡丹是通过非阿片受体来发挥镇痛效
应的［3］。结合本研究结果，这预示着臭牡丹在治疗慢性痛方面
有很好的开发应用前景。
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