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湖南省儿童医院 ( 41 0 07 )
主题词 @ 黄花倒水莲 /药理学
黄花倒水莲对乙肝病毒表面抗原 (日s BAg )具有体外
抑制作用 `” , 为了探讨其是否对乙肝病毒 !日BV) 有比较全
面的体外抑制作用 . 我们对其进行了体外抑制 日Be A g 的
实验 . 现将结果报道如下 .
1 材料与方法
1
.
! 药物制备 黄花倒水莲生药由湖南中医学院药学分
院提供 , 按通常煎煮方法将生药置三角烧瓶内 , 加适量
蒸馏水浸泡 30m . n 在火上加热煮沸 15 一 20 m . n 冷却后
经纱布过滤去渣并浓缩成 10 % (每 l o ml 含生药 10rn g )剂
量的药液 (原液 ) , 4 ℃保存备用 。
1
.
2 HBe gA 阳性血清 日Be A g 阳性血清由湖南省儿童
医院传染科提供 。 通过反向间接血凝抑制实验 (RP HI )选
用 日B e A g 滴度在 1 8 0 0 一 1 : 32 0 0 的血清 . 并用中和实验
证实 . 将阳性血清混匀 . 置超低温冰箱 (美国 日A R sI 公
司生产 ) 一 7 0 ℃ 冻存 。 实验前再经 E LI S A 实验证实为
日日e A g 强阳性 。
,
.
3 试剂 阳 e A g EL sI A试剂盒购自华美生物工程有
限公司 . 批号为 9 7 06 08 。
!
.
4 主要仪器 O G一 3 0 2 A型酶联免疫检测仪 华东电
子管厂生产 .
!
.
5 实验方法 参照文献 (2) 改进而成 。
1
.
5 1 药物 分为原液 (药物浓度为 IOm g 1/ OOm } ) , 1 . 2
稀释 ( 5腼 g 1/ O听 }I) 1 :4稀释 ( 2 5m g 1/ 印 m l ) 3个剂量组 。
1
.
5
.
2 血清 分为原液 , 1 : 2稀释 . 1 :4 稀释 3 组 。
1 5 3 作用时间 分为 l h , h2 , 4 h3 组 。
1
_
5 4 实验过程 取不同浓度药液加入96 孔细胞培养板
中 . 以生理盐水 (N s) 作为阴性对照 , “ 84 “ 消毒液作为阳
性对照 , 每组均做 20 孔 。 每孔均加入 1 : 2 稀释的 日Be A g
阳性血清 50 林 l , 震荡混匀后置 37 ℃培养箱内接触 h4 。
将未经稀释 (原液 ) 、 2 倍 ( 1 : 2) 及 4 倍 ( 1 : 4) 稀释的
朋 e A g 阳性血清 5 0 林 l 加入 9 6 孔细胞培养板孔内 . 每
组 20 孔 . 分别加入药物原液 50 林 } . 37 ℃接触 h4 。
将药物原液 50 林 }加入 96 孔培养板孔内 , 再加入 1 :
2稀释的 HB e A g 阳性血清 5 0 林 I , 3 7 oC 分别接触 l h 、 Z h
湖南中医学院第一附属医院
李梨平 王伟华 *
乙肝病毒 〔 抗原 / 药物作用
和 4 h . 每一时间均作 2 0 孔 。
上述各组达到预定接触时间后 , 吸取 50 林 }药物与
血清的混合液加入到已预包被处理好的酶标板孔内 (试剂
盒已提供 ) 按试剂盒说明书继续操作 。 最后在酶标仪上
使用波长 4 9 2 n m 滤光片 经空白孔调零后检测 。 将所测
得的每组 (吸光度 ) 0 0 值进行均数 t 检验 。
2 结果
2
.
! 不同药物剂量时抑制能力的影响 血清稀释度 ( 1 :2)
与接触时间 ! h4 )不变 . 黄花倒水莲水煎液 3个不同剂量组
(原液 、 1 : 2稀释 、 1 4 稀释 )的吸光度值 ( 0 0 值 )与N S 对照
组相比 , 具有明显差异 (尸均 < 0 0 5 ) , 而且 3 个不同剂量
之间两两比较 . 亦有明显差异 (尸< 0 0 5卜 结果见表 1 。
表 1 不同料斌药物对 HBe A g 抑制作用的观寒
药物剂量 孔数 o D 值 ( X 士 S ) 尸值
N S 对照 20 0 6 7 土 0 0 3
原液 20 0 4 0 士 0 0 2 < 0 0 5
1 2 稀释 20 0 5 0 士 0 0 3 * < 0 0 5
1 4 稀释 20 0 6 0 士 0 0 3 △ < 0 0与
一
8 4
“ 消毒液 20 0 12 士 0 0 1
* 和原液相比 , 尸< O 一05 ;△和原液及 1 :2 稀释相比 p
均 < 0 0 5 。
2
.
2 HB eA g 不同滴度对药物抑制 能力的影响 日eB A g
阳性血清未经稀释 (原液 ) 、 2倍及 4倍稀释时 . 药物浓度
(原液 )与接触时间 ( h4 )不变 ,其抑制能力3组间两两比较
具有明显差异 ( P< O 05 ) . 见表 2 。
表 2 不同 HB . A g 滴度对药物抑制作用的影晌
H Be A g 滴度 孔数 O D值 (X 士 S )
原液 20 0 5 2 士 0 0 3
1 2 稀释 20 0 40 士 0 0 2*
1 4 稀释 20 0 3 2 土 0 0 2 △
* 和原液相比 , 尸< 。 . 0 5 ;△和原液及 1 : 2 稀释相比 P
均 < 0 0 5 。
2
.
3 不同接触时间对药物抑制能力的影响 药物浓度
(原液 )与 HB e A g 滴度 ( 1 :2 )不变时 . l h 、 Z h 、 4 h3 组之 l’de ,
随着接触时间延长 其 0 0 值逐渐降低 , 经两两比较发现
不同接触时间组之间有显著性差异 ( p < 0 . 05 ) 见表 3 。
DOI : 10. 13862 /j . cnki . cn43 -1446 /r . 1998. 10. 021
第4 卷第摊期
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湖南长沙市药品检验所 (41 0 0 0 4) 李立荣 龚建夫* 张仁志 * *
主题词 薄层层析法 桅子武 / 分析 柱层析法
桅子来源于茜草科植物桅子 G a「d e n .。 一a s m .。 n . d e s
〔 , ls 的成熟果实 . 桅子化学成分复杂 , 有效成分主要为
8 种桅子贰类化合物 , 它们都是环烯醚菇试类 . 结构较
相似 一般方法难以从中分离出桅子贰单体 . 据文献报
道 :用柱层析和薄层层析来分离 , 都很理想地分离出了桅
子贰单体 . 有文章载 :桅子贰的 9 5 % 的乙醇溶液 . 在
23 7二处有最大吸收峰 。 通过对这两种不同分离方法分
离所得桅子贰的紫外吸收度的测定 , 分别计算出所得含
量 , 由含量值来比较这两种分离方法的优劣 。
1 实验条件
药材 :桅子 (购于药材市场 ) . 仪器 : 岛津 u v 一 2 6 5 Fw
湖南益阳制药厂 * * 湖南零陵地区制药厂
型 自动记录紫外分光光度计 万分之一全 自动电光天平 .
试剂 :甲醇 、 乙醇 、 正丁醇 、 氯仿 、 高锰酸钾等为 A日级
中性氧化铝 ( 10 一2 0 目 ) . 硅胶 G( 青岛海洋化工厂 ) . 活
I胜炭 1 50 ℃活化 h4 . 桅子贰标准品 :中国药品生物制品检
定所出品 。 层析法 :活性炭与氧化铝按 0 . 5 :2的质量比例混
匀 , 装柱 柱长 1c0 m , 柱径 I c m . 硅胶 G 板 :硅胶 G 加 3
倍量蒸馏水研合均匀 . 板厚约 o . sm m 105 ℃活化 30nr in 。
2 实验方法
2
.
1 标准曲线的制备 精密称取桅子贰标准品 S Om g ,
溶于 95 % 乙醇中 . 定容于 25 ml 容量瓶中 , 精密移取。 . Oml ,
。 . sml , 1 5ml . Z Oml , 2 5ml 放于 I Oml 容量瓶中 稀释
至刻度 . 于 2 3 7n m 处作标准曲线 , 曲线如图 ( 1 ) 。
线性方程 ; C O N E = A 日S * K + B , K = O _ 0 4 0 7 B = 一
表 3 不同接触时间对药物抑制作用的影晌
接触时间 孔数 O D 值 ( X 士 S )
0 5 5 士 0 04
0 4 8 士 0 0 2 *
0 4 0 士 0 0 2 △
0
n勺之乙62
1 h
2 h
4 h
* 和 l h相比 , P < 0 0 5 ;△和 l h及 Zh相比 , P均 < 0 0 5 。
3 讨论
黄花倒水莲水煎液 3 种不同浓度对乙肝病毒日eB A g
均具有体外抑制作用 , 但随着药物稀释度的增加 (亦即浓
度降低 ) . 其 0 0 值逐渐增加 , 且差异具有显著性 。 说明
药物浓度越低对 日日e A g 的体外抑制作用越弱 , 提示在
服用黄花倒水莲口服液时 . 应注意有效浓度 . 不要过度
稀释 .
日eB A g 阳性血清无论是否稀释 , 黄花倒水莲水煎
液对其均具有明显的体外抑制作用 , 但是当 日Be A g 稀
释度逐渐增大时 . 抑制作用亦逐渐增强 . 因 日Be A g 是
日B V 的复制指标之一 , 日B e A g 滴度高说明 日日V 复制活
跃 . 病毒数量多 , 反之亦然 。 据此可推测黄花倒水莲对
血清日Be A g 低滴度的患者 . 亦即 日B V 低复制 、 病毒数
量少的人其疗效可能优于 日B V 高复制者 。
药物与病毒接触时间越长则抑制作用越强 .
中草药对乙肝病毒体外抑制作用的报道较多`”一 5 ’ 。 黄
花倒水莲 ( P o l丫g a la a u 「e o e a u d a d u n n )为远志科植物黄
花倒水莲全草 . 我们 曾经报道过黄花倒水莲水煎液对
日日s A g 的体外抑制作用川 . 从本实验结果初步看来 . 黄
花倒水莲水煎液对 HBe A g 亦具有一定程度的体外抑制作
用 , 这为扩大黄花倒水莲的临床适应证提供了初步的实
验依据 。 但体外抑制实验受 “ 体外 “ 及方法的局限 , 黄花
倒水莲进入体内后对 日BV 是否仍具有抑制作用 , 尚须进
一步探讨 。
参考文献
! 王伟华 . 褚裕义 . 刘伟士 . 等 黄花倒水莲对乙肝病毒体外
抑制作用的初步观察 . 湖南中医药导报 . 1 9 96 ;2 ( 6) :31
2 Z h e
n g M
l n s h 一 e t a l A n e x P e r i m e n t a l s t u d y o n a
V a s t S e u l e o n HB s A g In h 一b l t 一o n U s i n g 1 0 0 0 H e o b s
.
T h
e
M
一e r o b . o lo g l e a l J o u r n a }
,
1 9 90门( 3 ) : 2 9
3 郑民实 EL IS A 技米检测中草药抗 HBs A g 中西医结合杂志 .
1990 ; 10 ( 9 )
: 560
4 杨斌武 中药对 日Bs A g 抑制作用的观察 甘肃中医学院学
报 , 19 93 ; 10 ( 2 ) :52
5 蒋锡源 50 种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制日Bs A g 活性
的比较 现代应用药学 . 19 92 ;9 (5 ) : 20 8
(收稿 日期 : 一9 9 8 年 8 月 3 日)