全 文 ：2003，1010:195-215．
［16］ Kemppinen A，Kalo P． Quantification of triacylglycerols in but-
terfat by gas chromatography-electron impact mass spectrometry u-
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atogr A，2006，1134:260-283.
双波长 HPLC法同时测定茱苓草中马钱苷酸和龙胆苦苷
崔春利1， 王继涛1， 王 敏2， 刘文中3， 唐志书1， 郭东艳1
(1. 陕西中医学院，陕西 咸阳 712046;2. 陕西中医学院第二附属医院，陕西 咸阳 712000;3. 浙江工业
大学，浙江 杭州 310014)
收稿日期:2011-09-19
基金项目:《陕西省中药材标准》茱苓草起草任务 (陕食药监安函 ［2009］ 94 号) ;陕西教育厅项目 (09JK388)
作者简介:崔春利 (1977—) ，男，硕士，实验师，从事中药新制剂新技术研究工作。Tel: (029)38185180，E-mail:ccl906@ 163. com
摘要:目的 建立 HPLC同时测定茱苓草中马钱苷酸和龙胆苦苷的方法。方法 采用双波长 HPLC法，以 Hypersil C18
柱 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)为色谱柱，以甲醇-0. 1%磷酸溶液 (20∶ 80)为流动相，检测波长为 233 nm (测定马
钱苷酸)和 272 nm (测定龙胆苦苷) ，体积流量为 1 mL /min。结果 马钱苷酸在 0. 498 ～ 3. 32 μg 的范围内线性关系
良好，相关系数为0. 999 1，平均回收率为 98. 33%，RSD 为 1. 14%;龙胆苦苷在 0. 657 ～ 4. 38 μg 线性关系良好，相
关系数为 0. 999 9，平均回收率为 97. 74%，RSD为 1. 25%。结论 本方法快速，简便，准确，可靠，可用于茱苓草的
质量控制。
关键词:茱苓草;双波长高效液相色谱法;马钱苷酸;龙胆苦苷
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)07-1315-04
Simultaneous determination of loganic acid and gentiopicroside in Gentianae api-
atae Herba by Dual-wavelength HPLC
CUI Chun-li1， WANG Ji-tao1， WANG Min2， LIU Wen-zhong3， TANG Zhi-shu1， GUO Dong-yan1
(1. Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046，China;2. The Second Hospital Affiliated to Shaanxi University of Traditional
Chinese Medicine，Xianyang 712000，China;3. Zhejiang University of Technology，Hangzhou 310014，China)
ABSTRACT:AIM To simultaneously determine loganic acid and gentiopicroside in Gentianae apiatae Herba
samples by HPLC． METHODS Dual-wavelength HPLC analysis was performed on a C18 column (Hypersil，250
mm ×4. 6 mm，5 μm partile size)with isocratic elution 0. 1% phosphoric acid-methanol (80∶ 20)as the mobile
phase at a flow-rate of 1 mL /min，The detection wavelenth was set at 233 nm for loganic acid and at 272 nm for
gentiopicroside． RESULTS The experiment showed a good linear relationship in the range of 0. 498-3. 32 μg (r
= 0. 999 1)for loganic acid，the average recovery was 98. 33%，and RSD was 1. 14% (n = 6)． Gentiopicroside
was linear in the range of 0. 657-4. 38 μg (r = 0. 999 9) ，the average recovery was 97. 74%，and RSD was 1. 25%
(n = 6)． CONCLUSION The method is rapid，simple，accurate，reliable and suitable for simultaneously analy-
zing loganic acid and gentiopicroside，and can be used for the quality control of Gentianae apiatae Herba．
KEY WORDS:Gentianae apiatae Herba;Dual-wavelenth HPLC;loganic acid;gentiopicroside
茱苓草，系龙胆科龙胆属植物秦岭龙胆 Genti-
ana apiata N． E． Br． 的全草，为秦巴山区特有的
药用植物资源，其味苦，性平，入肝、大肠、膀胱
三经，具有调经活血，清热明目，利小便之功，用
于治疗头昏、失眠、小便不利、淋症、月经不调、
痛经、崩漏、白带、痢疾、腹痛等［1］。其主要化
学成分有萜类，黄酮类，三萜，糖类及谷甾醇类
等［2-3］，其中环烯醚萜和裂环环烯醚萜类为龙胆属
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植物特征性成分，大多具有较强生理活性:马钱苷
酸有提高皮肤机能、促进毛发生长、抑制中枢神
经、镇痛和抗炎等作用;龙胆苦苷有促进胃液分
泌、抗原虫和抗炎作用［4］。目前对于茱苓草的文
献报道较少，多是化学成分的研究，但关于茱苓草
定量测定尚未见相关文献报道，本实验结合文献
［5-10］报道方法，建立了双波长 HPLC 法同时测定
茱苓草中马钱苷酸和龙胆苦苷，且对茱苓草全草和
地上部分两个部位进行了比较，方法的准确度与重
复性考察均获得较满意的结果，适用于茱苓草中马
钱苷酸和龙胆苦苷的定量分析。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters2695 高效液相色谱仪 (美国
Waters 公司，Empower 色谱工作站，Waters 2996
DAD) ;UV-2550 紫外可见分光光度仪 (日本岛
津) ;BT 25S (十万分之一)电子天平 (北京赛多
利斯仪器有限公司) ;KDE型高功率数控超声波清
洗器 (昆山禾创超声仪器有限公司)。
1. 2 试药 马钱苷酸及龙胆苦苷对照品 (中国药
品生物制品检定所，批号分别为 111865-201001、
110770-201013;纯度分别为 90. 9%、96. 9%，供
定量测定用) ;茱苓草全草药材 2010 年 7 月采自太
白鳌山、市售茱苓草地上部分药材购自太白县药材
收购门市部 (均由陕西中医学院王继涛高级实验
师鉴定为龙胆科龙胆属植物秦岭龙胆 Gentiana api-
ata N． E． Br．) ;甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，
其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 Hypersil GOLD
aQ C18柱 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;以甲醇-
0. 1%磷酸溶液 (20∶ 80)为流动相;体积流量为 1
mL /min;柱温为 30 ℃;检测波长为 233 nm与 272
nm。在此色谱条件下，马钱苷酸和龙胆苦苷均与
样品中其他组分色谱峰基线分离，见图 1。按马钱
苷酸峰计算，理论板数为4 595，按龙胆苦苷峰计
算，理论板数为9 648。
图 1 高效液相色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms
A． 马钱苷酸对照品 (233 nm) B． 龙胆苦苷对照品 (272 nm) C． 茱苓草样品 (233 nm) D． 茱苓草样品 (272 nm)
A． loganic acid (233 nm) B． gentiopicroside standard (272 nm) C． sample of Gentianae apiatae Herba (233 nm) D． sample of
Gentianae apiatae Herba (272 nm)
2. 2 对照品溶液的制备及测定波长选择 精密称
取马钱苷酸对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 含
0. 166 mg的溶液;精密称取龙胆苦苷对照品适量，
加甲醇制成每 1 mL含 0. 219 mg的溶液。分别以所
配制马钱苷酸和龙胆苦苷对照品溶液为母液，经适
宜稀释，以甲醇为溶剂空白，采用 UV-2550 于紫
外 200 ～ 400 nm下进行扫描，结果马钱苷酸 λmax =
233 nm，龙胆苦苷 λmax = 272 nm，故采用 233 nm
和 272 nm为检测波长。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末约 0. 24 g，
精密称定，置 100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入甲
醇 20 mL，密塞，称定质量，超声处理 (功率 100
W，频率 40 kHz)20 min，放冷，再称定质量，用
甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过 (0. 45 μm) ，
取续滤液作为供试品溶液。
2. 4 线性范围的考察 分别进样马钱苷酸对照品
溶液和龙胆苦苷对照品溶液 3、5、10、15、20
μL，按上述色谱条件注入色谱仪，记录峰面积，
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分别以马钱苷酸、龙胆苦苷峰面积对进样量 (μg)
回归，得马钱苷酸回归方程为:A = 596 496. 102 1
C － 10 277. 941 18，相关系数 r = 0. 999 1，马钱苷
酸在 0. 498 ～ 3. 32 μg 线性关系良好。龙胆苦苷回
归方程为:A = 1 882 505. 81C － 85 636. 286 51，相
关系数 r = 0. 999 9，龙胆苦苷在 0. 657 ～ 4. 38 μg
线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液连续
进样 5 次，各 5 μL，记录峰面积，结果马钱苷酸
RSD为 0. 15%，龙胆苦苷 RSD 为 0. 12%，表明本
试验仪器的精密度良好。
2. 6 稳定性试验 称取本品适量，按供试品制备
方法制备供试液，分别于 0、4、8 h 进样 5 μL 测
定峰面积，结果马钱苷酸 RSD 为 1. 50%，龙胆苦
苷 RSD为 0. 75%。表明本品在 8 h稳定性良好。
2. 7 重复性试验 精密称取茱苓草药材 5 份，按
供试品制备方法制成供试液，依法测定，马钱苷酸
的平均质量分数为 2. 40%，RSD 为 0. 69%。龙胆
苦苷平均质量分数为 1. 92%，RSD 为 2. 98%。结
果表明该方法重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取一定量已知含有量的样
品 (马钱苷酸与龙胆苦苷质量分数分别为:
24. 556 1 mg /g、19. 688 4 mg /g)精密加入适量对
照品，依法制备供试液，测定含有量并计算回收
率，结果见表 1 和表 2。
表 1 马钱苷酸的加样回收率试验结果 (n =6)
Tab. 1 Results of recovery tests of loganic acid (n =6)
取样量
/ g
样品中含
有量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
RSD
/%
0. 107 22
0. 108 36
0. 105 41
0. 103 57
0. 101 96
0. 103 70
2. 633
2. 661
2. 588
2. 543
2. 504
2. 546
1. 8
1. 8
2. 3
2. 3
2. 6
2. 6
4. 411
4. 432
4. 868
4. 831
5. 009
5. 091
98. 76
98. 42
99. 11
99. 48
96. 34
97. 88
1. 14
表 2 龙胆苦苷的加样回收率试验结果 (n =6)
Tab. 2 Results of recovery tests of gentiopicroside (n =6)
取样量
/ g
样品中含
有量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
RSD
/%
0. 107 22
0. 108 36
0. 105 41
0. 103 57
0. 101 96
0. 103 70
2. 111
2. 133
2. 075
2. 039
2. 007
2. 042
1. 2
1. 2
1. 5
1. 5
1. 8
1. 8
3. 290
3. 304
3. 526
3. 491
3. 807
3. 790
98. 21
97. 53
96. 74
96. 82
99. 98
97. 15
1. 25
2. 9 样品测定 取茱苓草全草粗粉 0. 24 g 与其地
上部分粗粉 3. 0 g，各 6 批，按供试品制备方法制
备样品，依上述色谱条件测定，结果见表 3。
表 3 样品测定结果 (n =6)
Tab. 3 Results of contents determination of samples
编号
全草含有量 /% 地上部分含有量 /%
马钱苷酸 龙胆苦苷 两者总量 马钱苷酸 龙胆苦苷 两者总量
1 2. 20 1. 93 4. 13 0. 22 0. 11 0. 33
2 2. 42 1. 97 4. 39 0. 23 0. 12 0. 35
3 2. 33 1. 92 4. 25 0. 25 0. 12 0. 37
4 2. 46 1. 97 4. 43 0. 30 0. 10 0. 40
5 2. 42 1. 97 4. 40 0. 20 0. 15 0. 35
6 2. 33 1. 92 4. 25 0. 21 0. 13 0. 34
3 讨论
本研究通过紫外扫描确定马钱苷酸 λmax为 233
nm，龙胆苦苷 λmax为 272 nm，因而采用 233 nm、
272 nm 双波长 HPLC 同步检测技术对茱苓草中马
钱苷酸与龙胆苦苷进行测定，方法科学，又极大简
化了色谱分离检测步骤，提高了实验效率。一般高
效液相色谱—可变波长紫外检测器系统均能实现，
具有普遍适用性。最重要是，可以克服 (固定波
长)单波长 254 nm［11］同时检测这 2 个成分检测灵
敏度较低的缺陷。
流动相系统的选择中，鉴于 2010 年版 《中国
药典》一部秦艽含量测定项中流动相采用乙腈-
0. 1%醋酸溶液［11］，考虑到系统 0. 1%醋酸溶液相
对 0. 1%磷酸溶液有紫外本底吸收，同时鉴于醋酸
具有挥发性，可随时间造成流动相 pH 缓慢改变，
故最终选择 0. 1% 磷酸溶液作为色谱系统的流
动相。
从样品测定结果，茱苓草全草与茱苓草地上部
分 2 个药材部位含有量差异悬殊，无论马钱苷酸还
是龙胆苦苷，推测其所含有的这 2 种环烯醚萜苷类
成分主要集中于其根部，提示以全草入药为好。
与茱苓草同属的龙胆药材 (Gentianae Radix et
Rhizoma) ，系龙胆科植物龙胆 (Gentianae scabra
Bge．)的根及根茎，临床主要以其干燥根和根茎
入药。李文龙［12］对全国 6 个不同产地的龙胆药材
中龙胆苦苷和马钱子苷酸含有量进行了比较研究，
将其结果与本实验茱苓草含有量比较，可以看出陕
西太白山特有这个种的茱苓草的全草中马钱苷酸量
高出龙胆药材 6 个产地中任一产地，而龙胆苦苷含
有量略低于其 6 个产地的平均值，显而易见，龙胆
属这 2 个不同种的药材中环烯醚萜苷成分差异明
显，提示两者的药理效应可能存在差异，那么今后
有待对茱苓草药理效应进一步研究。
参考文献:
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鹿尾中 5 种有害元素的测定
张高慧，王 峰* ，姜 英，王玉方，李淑芬
(中国农业科学院特产研究所，吉林 吉林 132109)
收稿日期:2011-10-24
基金项目:农业部标准制定项目 －鹿茸及鹿副产品品质评定技术规范 (200305214-Q-326)
作者简介:张高慧 (1985—) ，男，硕士生，研究方向:特种经济动物产品学。E-mail:zhanggh_ fly@ 126. com
* 通信作者:王 峰 (1962—) ，男，研究员，硕士，研究方向:特种经济动物饲养及产品。E-mail:tcswf@ 126. com
摘要:目的 通过测定 2 种鹿尾药材中铜、铅、镉、汞、砷 5 种有害元素，对鹿尾药材进行质量和食用安全性评价。
方法 采用微波消解前处理，用火焰原子吸收分光光度法测定铜，用石墨炉原子吸收分光光度法测定铅、镉，用原子
荧光法测定汞、砷。结果 花鹿尾中铜、铅、镉、汞、砷平均质量分数分别为 4. 41、0. 68、0. 054、0. 030、0. 022
mg /kg;马鹿尾中铜、铅、镉、汞、砷平均质量分数分别为 4. 57、1. 08、0. 058、0. 040、0. 018 mg /kg;所有样品中的
5种有害元素均在规定的安全标准范围之内。结论 该实验证明鹿尾应用具有一定的安全性;本方法操作简单，结果
准确，可以作为鹿尾药材质量控制中有害元素的定量方法。
关键词:鹿尾;有害元素;火焰原子吸收分光光度法;石墨炉原子吸收分光光度法;原子荧光法
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)07-1318-04
Determination of five harmful elements in Cervi Cauda
ZHANG Gao-hui， WANG Feng* ， JIANG Ying， WANG Yu-fang， LI Shu-fen
(Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science，CAAS．，Jilin 132109，China)
ABSTRACT:AIM To aim at making the assessment of quality and edible safety of Cervi Cauda by determining
five deleterious elements content． METHODS Samples were pretreated by microwave digestion and Cu was deter-
mined by flame atomic absorption spectrometry，graphite furnace atomic absorption spectrometry was used for the
determination of Pb，Cd and atomic fluorescence spectrometry was applied to the determination of Hg，As． RE-
SULTS The average contents of Cu，Pb，Cd，Hg，As were 4. 41，0. 68，0. 054，0. 030，0. 022 mg /kg and
4. 57，1. 08，0. 058，0. 040，0. 018 mg /kg，respectively，in Cervus nippon Temminck and Cervus elaphus Linnae-
8131
2012 年 7 月
第 34 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2012
Vol. 34 No. 7