全 文 ：吉林农业大学学报　2001 ,23(1):54 ～ 57
Journal of J ilin Agricultural Universi ty
旱柳叶中 3种化学成分的药理活性研究
张　晶1 　郑毅男1 　韩立坤2 　张新凤1
(1.吉林农业大学中药材学院　长春 130118;2.日本爱媛大学医学部　日本国松山市 791-02)
摘　要:对自旱柳叶中分离出的 3 种单体化合物进行了药理活性研究 ,测定它们对花生四烯酸代谢及其对脂
肪细胞脂肪分解活性的影响 ,结果发现:它们均可选择性抑制花生四烯酸代谢产物 12-HETE 的生成量 ,预示
它们可防治动脉硬化及过敏症;芹黄素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷水解后的苷元———芹黄素可抑制 TXB2 的
生成量 ,提示其对血栓的形成有防治功效。它们对正常大鼠附睾处脂肪细胞由去甲肾上腺素(NE)诱导的脂
肪分解作用的影响结果表明:此 3 种化合物对大鼠脂肪细胞中由 NE诱导的脂类分解有促进作用。
关键词:芹黄素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷;木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷;花生四烯酸;脂类分
解;旱柳叶
中图分类号:R284.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5684(2001)01-0054-04
Studies on Pharmacology of Chemical Constituents of
Leaves of Sali x matsudana
ZHANG Jing1 , ZHENG Yi-nan1 , HAN Li-kun2 , ZHANG Xin-feng1
(1.College of Chinese Tradi tional Material Medicine , J ilin Agricultural Universi ty ,
Changchun 130118 , China;2.Second Department of Medical Biochem istry , School of
Medicine , Ehime University , Japan 791-02 , Japan)
Abstract:Effects of three compounds isolated f rom the leaves of Salix matsudana on arachidonic
acid metabolism and norepinephrine-induced lipolysis in rat platelets were studied.The result
showed that these compounds could selectively inhibit the y ield of arachidonic acid metabolism s
product ion —12-HETE(12-hydroxy-5 ,8 ,10 ,14-eicosatet raenoic acid), indicating that they could
prevent and cure allergy and arteriosclerosis.The production of apigenin-7-O-β-D-glucopy ranside
being hydrolyzed was apigenin , it could inhibi t the yield of TXB2(thromboxane B2).The result of
effect on NE-induced lipolysis of fat cells in normal rat′s testicle showed that they can promote
lipolysis.
Key wo rds:apigenin-7-O-β-D-glucopy ranside;luteolin-7-O-β-D-glucopy ranside;arachidonic acid
metabolism;norepinephrine-induced lipoly sis;leaves of Sal ix matsudana
　　旱柳(Salix matsudana Koidz)是杨柳科
(Salicaceae)柳属(S alix spp.)植物 。据载:旱柳
嫩叶或枝叶“性寒 、味微苦 ,具散风 、祛湿 、清湿热 、
治黄疸型肝炎 、风湿性关节炎 、湿疹 、地方性甲状
腺肿等功效”[ 1] 。崔树玉等人对柳叶的药理活性
进行初步研究 ,结果表明:其醇提取物对血小板中
基金项目:吉林省科委资助项目(吉科合字第 950002号)
作者简介:张　晶 ,女 , 1971年出生 ,讲师 ,在读博士 ,研究方向:天然产物化学
收稿日期:2000-07-11
DOI :10.13327/j.j jlau.2001.01.015
花生四烯酸代谢系统中的环氧合酶和脂氧合酶有
选择性抑制作用 ,从而选择性地抑制花生四烯酸
代谢的产物———可导致血栓形成的血栓烷 B2
(TXB2)和可引起动脉硬化 、过敏性疾病发生的
12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)的生成[ 2] 。此
外 ,柳叶具有一定的减肥作用。本试验研究了从
旱柳叶中分离出的 3种单体化合物的药理活性 ,
测定了它们对花生四烯酸代谢及其对脂肪细胞脂
肪分解活性的影响。
1　材料与方法
1.1　材料
旱柳叶:5月中旬采自吉林农业大学校园内 ,
采后室温阴干 ,由吉林农业大学樊绍钵副教授鉴
定。
1.2　方法
1.2.1　化合物的分离 　干燥柳叶用乙醚脱脂
后 ,用 95%乙醇浸提 ,减压浓缩乙醇相 ,将得到的
乙醇浸膏溶于少量水中 ,然后依次用苯 、二氯甲
烷 、乙酸乙酯 、正丁醇 、水萃取。将正丁醇层浓缩
后溶于少量甲醇中 ,将甲醇的上清液过葡聚糖凝
胶LH -20柱 ,用甲醇洗脱 ,洗下的流分用 TLC
检验(展开剂是乙酸乙酯∶丁醇∶甲酸∶水=5∶3∶1∶
1),合并相同部分 ,得到 3个单体化合物 ,即化合
物Ⅰ 、化合物Ⅱ 、化合物Ⅲ 。经过光谱分析及文献
查对[ 3 ,4] ,分别被确定为芹黄素-7-O-β-D-吡喃葡
萄糖醛酸苷(化合物 Ⅰ)、木樨草素-7-O-β-D-吡喃
葡萄糖醛酸苷(化合物Ⅱ)、化合物 Ⅲ(结构式未确
定)。化合物Ⅰ(R1 =H)、化合物 Ⅱ(R1 =OH)的
结构式如下:
1.2.2　对花生四烯酸代谢活性的测定　采大鼠
的血 ,加入 10%血液量的 3.8%枸橼酸钠抗凝 ,离
心分离富血小板血浆(PRP)。再将 PRP 离心后
取血小板(蛋白含量 2 ～ 3mg/mL)。将样品20μL
与从鼠血中得到的血小板 130μL 混合。在 37℃
水浴中孵化 5min ,加入 50μL14C-标记的花生四
烯酸(7.4×104 Bq/mL)37℃继续保温 5min ,加入
200μL 0.5 mol/L 甲酸停止反应。用乙酸乙酯充
分提取 、离心 , 上层液移入离心管中 , N2 气流干
燥。干燥后加入 40μL乙酸乙酯并将之全部点于
薄层板上 , 展开 , 放射自显影。剪下薄层板上
TXB2 及 12-HETE位置斑点 ,用贝克曼液闪计数
仪进行放射量测定[ 4] 。
1.2.3　对大鼠脂肪细胞脂肪分解活性测定　取
大鼠附睾脂肪 , 参照 Rodbell 方法[ 5] , 除去血管
等 ,用 Hank′s缓冲液清洗后 ,称重 ,置于缓冲液
中 ,用胶原酶消化 , 37℃培养 1 h , 过滤 , 离心
(500 r/min)得脂肪细胞。取上述制备好的脂肪
细胞 25μL ,置于试管中 ,加 4%BSA 200μL(2 g
牛血清白蛋白加 50 mL Hank′s 缓冲液制成);
Hank′s缓冲液 25μL 或者待测样品 25μL ,分别
加入 NE 25μL ,最后反应液的总体积为 275μL。
留出一组做对照 ,其余各组 37℃培养 30 min ,反
应液用 3 mL 萃取液(氯仿∶正己烷 =1∶1 ,含有
2%的甲醇), 然后加铜试剂振荡 10 min , 离心
10 min(2 500 r/min),用 Dole 方法[ 6]判断游离脂
肪酸(FFA)的释放量 。
2　结　果
2.1　对花生四烯酸代谢的影响
利用放射自显影的方法研究了 3个化合物以
及化合物 Ⅰ水解后得到的苷元 ———芹黄素对花生
四烯酸代谢活性的影响 ,结果如图 1所示。
实验结果表明:化合物 Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ在浓度为
0.01μg/mL 时即可对花生四烯酸代谢产物 ———
12-HETE 的生成量均有抑制作用 ,抑制率分别为
11.1%、25.4%、28.2%;当浓度达到100μg/mL
时 ,它们的抑制率可分别达到 45.1%、83.6%、
76.7%。将化合物Ⅰ水解后得到了苷元 ———芹黄
素 ,药理活性测定结果表明其可抑制 TXB2 的生
成 ,当其浓度为 0.01μg/mL 时 ,对 TXB2 的生成
量的抑制率为 9.6%,随着浓度的增大 ,其抑制效
果增强;当浓度为 100 μg/mL 时 , 抑制率达到
58.1%。
2.2　对大鼠脂肪细胞脂肪分解活性的影响
自旱柳叶中分离出的 3种单体化合物经过测
试 ,发现它们均在不同程度上促进了大鼠脂肪细
胞中由 NE诱导的脂肪分解作用(见图 2)。
55第 23 卷　第 1 期　　　　　　　　　　张　晶等:旱柳叶中 3 种化学成分的药理活性研究
图 1　化合物Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ及芹黄素对大鼠血小板中花生四烯酸代谢的影响
F ig.1.Effect of arachidonic acid metabolism in rat platelets by the compounds
a:芹黄素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅰ)Apigenin-7-O-β-D-glucopyranside ;b:木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅱ)Luteolin-7-O-
β-D-glucopyranside ;c:化合物Ⅲ Compound Ⅲ;d:芹黄素 Apidenin;　—◇—　12-HETE;　—○—　TXB2
图 2　3种单体化合物对大鼠脂肪细胞中由去甲肾上腺素(NE)诱导的脂类分解的影响
Fig.2.Effect of norepinephrine-induced lipolysis in rat platelets by the three compounds
a:芹黄素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅰ)Apigenin-7-O-β-D-glucopy ranside;b:木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅱ)Luteolin-
7-O-β-D-glucopyranside;c:化合物Ⅲ Compound Ⅲ;—◇—　单独的样品 S ample alone;　—□—　样品+0.05μg/mL NE　S ample+
0.05μg/mL NE;—△—　样品+0.01μg/mL NE　Sample+0.01μg/mL NE
　　从图 2可以看出:(1)化合物 Ⅰ和 Ⅱ在单独
使用时 ,对脂类分解的促进作用不很明显 。而化
合物 Ⅲ则不同于前两者 ,在浓度分别为 1 , 10 , 50 ,
100μg/mL 时 ,可促使脂肪分解过程中多释放
FFA 0.071 , 0.127 , 0.255 , 0.291μmol/(mL·h)。
由此表明:化合物 Ⅲ单独使用时即可明显促进脂
类分解而达到减肥的作用。(2)NE 可促进脂类
分解 ,将 3种单体化合物分别加入到 NE 中 ,在不
同程度上均较单独使用 NE 时 FFA 的释放量增
多。化合物 Ⅰ在 0.05μg/mL 水平的 NE诱导脂
类分解过程中 ,浓度分别为 10 , 50 , 100μg/mL时 ,
使 FFA 的释放较单独使用 NE 时分别增多
2.5%、12.3%、18.3%。化合物 Ⅱ在0.01μg/mL
水平的 NE 诱导脂类分解过程中 ,浓度为 10 , 50 ,
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100μg/mL时 ,分别使 FFA的释放量增加 8.6%、
11.1%、10%;当NE 为0.05μg/mL 水平时 ,化合
物Ⅱ的浓度分别为 1 , 10 , 50 , 100μg/mL 时 ,则分
别使 FFA 的 释 放量 增 加 11.7%、 13.1%、
15.1%、 21.72%。 化 合 物 Ⅲ 在 NE 为
0.05μg/mL水平的脂类分解过程中 ,浓度为 1 ,
10 ,50 , 100 μg/mL 时可分别增加 FFA 释放量
7%、 16.7%、 35.5%、 41.4%;当 NE 为
0.01μg/mL水平 , 化合物 Ⅲ的浓度分别为 1 , 5 ,
10 ,50 , 100μg/mL时 , 可使 FFA 的释放量增加
12.4%、22.9%、30.5%、107.8%、209.5%。
3　讨　论
研究表明[ 8] :黄酮类化合物具有平喘 、祛咳 、
强心 、扩张冠状动脉等多种生理作用 ,并可抑制血
小板由于二磷酸腺苷 、花生四烯酸代谢 、胶元等引
起的聚集作用 。本研究利用放射自显影的方法 ,
对柳叶中单体化学成分进行了抑制花生四烯酸代
谢途径的研究 ,其药理活性测试结果表明:芹黄
素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅰ)、木樨草素-7-
O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅱ)、化合物 Ⅲ在浓度
为 0.01 μg/mL 时即可对花生四烯酸代谢产
物———12-HETE的生成量均有抑制作用 ,提示它
们可作为开发防治动脉硬化及过敏性疾病新药的
主要有效成分。它们可抑制花生四烯酸代谢途径
中的脂氧合酶活性 ,但体内实验还需进一步研究。
化合物 Ⅰ水解后得到苷元———芹黄素 ,药理活性
测定结果表明:其可抑制花生四烯酸代谢途径中
的环氧合酶活性 ,说明其具有防治血栓症的趋势。
研究结果表明:自旱柳叶中分离出的 3种单
体化合物均可在不同程度上对大鼠脂肪细胞中由
NE诱导的脂类分解产生促进作用。化合物 Ⅲ单
独使用时 ,对脂类分解就有明显的促进作用;在由
NE诱导的脂类分解过程中 ,当 NE为不同水平时
3种化合物均能不同程度地增加 FFA的释放量 ,
其中化合物 Ⅲ的作用效果最为明显。当 NE 为
0.05 μg/mL 水平时 , 化合物 Ⅱ、 Ⅲ在浓度为
1μg/mL时即有明显作用 ,而化合物 Ⅰ在浓度为
10μg/mL时有明显作用 ,它们的作用均随浓度的
增大而增强;当 NE为 0.01 μg/mL 水平时 ,化合
物Ⅱ的浓度达 10 μg/mL 时可产生明显的效果 ,
化合物 Ⅲ在浓度为 1μg/mL 时作用就非常显著 ,
二者的作用强度均随浓度的增大而增强 。
参 考 文 献
1　江苏新医学院.中药大辞典(上册)[ M] .上海:上海科技
出版社 , 1997.1123
2　崔树玉.抗血栓 、抗动脉硬化中草药筛选[ J] .中国药学杂
志 , 1995 , 30(增刊):34～ 35
3　Agrawal P K.Carbon-13 NM R of Flavonoides [ M ] .El-
sevier Science Publishers B.V , 1996.236
4　中国科学院上海药物研究所植物化学研究室.黄酮体化
合物鉴定手册[ M] .北京:科学出版社 , 1981.21
5　Keizo Sekiya and Hiromichi Okuda.Selective inhibition of
platelet lipoxygenase by baicalein[ J] .Biochemical and Bio-
physical Research Communicat ions , 1982 , 105(3):1090 ～
1095
6　Rodbell M.Metabolism of isolated fat cell Ⅰ :effect of hor-
mones on glucose metabolism and lipolysis [ J] .J Biol Chem ,
1964 , 239:375
7　Dole V P.Ef fect of t rypsin of rat adpocyts on biological ef-
f ect s and insulin and insulin-like g row th factors [ J] .J Clin
Invest , 1965 , 35:150
8　肖崇厚.中药化学[ M ] .上海:上海科学技术出版社 ,
1996.265
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