全 文 ：微生物学报 3 4 ( 3 ) : 2 4 5 一 2 4 7 , 1 9 9 4
A e t a M i
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葱兰黄化病病原类菌原体的研究
陈集双 李德葆
(浙江农业大学生物技术研究所 杭州 31 0 0 2 9 )
葱兰为石蒜科 (A m : yr 川 d ac ae e )草本植物 ,是一种在我国各地普遍栽培的多年生观赏花卉 。 葱兰黄
化病是 1 9 9 2年在杭州发现的一种新病害 ,该病对葱兰的生长和观赏价值有严重影响 。
催病株 (丛 )最初表现为深红色斑点 , 逐渐扩大为鲜红色条斑或斑块并转为亮黄色 , 最后整株叶片大
部分转为鲜艳的黄色 , 呈现典型的系统侵染 。 发病 1一 2 月后整株 (丛 )地上部分枯死 。 发病一般始于早春
( 3 月上旬 ) ,春末夏初有一个发病高峰期 ;秋末有另一个发病期 ,但病状较轻 ;感染株有恢复现象 , 即在
下一个生长季能从地下部分重新生长出叶片 ,但病株叶片明显细小 ,有丛簇现象 ,病株开花少且花期短 。
作者从 1 9 9 2 年春起 ,对该病害进行了病原分离 、生物学测定和病组织超薄切片电镜检查 ,发现该病
害可能与类菌原体有关 , 现将研究结果报告如下 。
1 材料和方法
1
.
1 样品
感病植株分别于 1 9 9 2 年 4 月采自浙江农业大学校园和 1 9 9 2 年 6 月采 自杭州花圃 , 用盆栽保存于
防虫温室中 , 同时采取健株作为对照 。
1
·
2 用病株分离病原和接种
病原物分离采用常规的组织分离方法 ,病组织经表面消毒后同时置于 P D A 和 W an ik m at o’ s 培养基
上培养 ,所获分离物经单抱或单菌落纯化后 ,真菌置 P D A 培养基上培养 ,细菌置 Wan ik m at o’ s 培养基上
继续培养 ,以获得纯培养物 ,并观察菌落形态和产生抱子的情况 ;各分离物均采用针刺法接种葱兰健株 ,
接种后用塑料袋保湿 ,观察发病情况川 。 接种实验重复 2一3 次 。
L 3 生物学测定
系统发病的葱兰叶片置于研钵中加 0 . 02 m ol / L p H 7 . 4 磷酸缓冲液和金刚砂研磨制备接种物 ,然后
按常规汁液磨擦接种法接种供试植物 ,观察发病情况 2[] 。
1
·
4 病株汁液中病毒粒子检查
病株汁液经 。 . o Zm ol / L 磷酸缓冲液抽提 , 经 2% 戊二醛固定 1 0一 30 分钟 , 吸附于铺有 F or m va : 膜
的铜网上 ,然后按常规磷钨酸负染方法负染 ,置电镜下检查病毒粒子或类似结构的有无 。
L ` 超薄切片制作及电镜现案
将系统发病的病叶组织切成 。 . Z x o . c4 m “ 的小块 ,经 2 , 5% (P H 6 . 8) 戊二醛和 1%锹酸双固定 , 丙酮
系列脱水后用 E p o n 8 1 2 ( A : B 一 1 : 6) 包埋 ,用 U l t ur cu t E 型超薄切片机切片 , 超薄切片用醋酸铀和柠
檬酸铅双染色 ,然后置电镜下检查组织中的病原和细胞病变情况 s[] 。
结果和分析
病原物分离和接种
从病叶的病健交界组织中共得到 四个分离物 , 其中B , 、 B 。 、 B 3产生细菌菌落 ,培养物针刺接种对葱
2.2
本 文于 1 9 9 3 年 3 月 1 5 日收到 。
DOI : 10. 13343 /j . cnki . wsxb. 1994. 03. 014
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. 微 生 物 学 报 3 4 卷
兰不致病 ; F 、 为丝状真菌 ,在 P D A 培养基上产生分生饱子 ,光学显微镜下检查抱子符合 lA t er na ir a 的特
征 。 F ` 以菌丝接种也不表现对葱兰致病 。 据此 , 以上各分离物似均不是葱兰黄化病的致病菌 。
.2 2 汁液接种结果
用病汁液磨擦接种方法接种的植物种类见表 1 。
表 1 进行汁液康披接种的植物种类
科 名 种 名 学 名
石蒜科
攀 科
藕 科
茄 科
葱 兰
昆诺藕
觅色蔡
普通烟
心叶烟
克里芙兰烟
假酸浆
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鸡冠花
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接种植株观察 2周 至半年 ,均不表现发病 。 因此 , 葱兰黄化病不表现汁液传染的特点。
2
.
3 病毒粒子检查
病叶汁液经磷钨酸负染后在电镜下未检查到类似线状 、杆状或球状病毒粒子的结构 。
2
.
4 病组织超薄切片观察
在病叶维管束的筛管细胞中观察到典型的类菌原体 ( M L O )结构 , M L O 具有多种形态 。 其中近球形
结构的大小约 45 一 1 2 o on m ,有三层单位膜结构 ,其内部有纤维状结构 。 每一维管束中往往只有个别筛管
细胞中存在 M L O , 多数 M L O 排列在细胞近周缘部位而中央部位则极少见到 (图版 I ) 。 以上符合龚祖
字员等 ( 1 9 9 0 )所描述 M L O 在植物体内分布的特点 。 在健株中未观察到 M L O 的存在 。
3 讨论
在葱兰和葱兰属植物上发生的病害只有简单描述5[] 。 Br co k s ( 1 9 6 6 )报道在夹竹桃属 ( Ne ir n 。 )几种植
物上引起严重坏死和叶斑的新病害 ,并认为其病原为一种壳多袍菌 ( st a go no sP o ar ` “ rt is i ) 、 该病原也侵
染葱兰属花卉 ( Z eP 六岁 a 川he : g ar n d沪 o ar )表现类似症状川 . M u ke ijr ( 1 9 70) 曾报道一种小核菌属真菌
(s el
e
ort 山m 。 eP ivo ur m )侵染葱兰属花卉 z . al 二 a s t e r l i ,该病害也能扩散到葱兰等其它几种葱兰属花卉
上川 。 国 内 1 9 8 8 年的资料中列举了 7 种葱兰病害 , 其病原都是半知菌类真菌 。 本文报道的葱兰黄化病具
有比较独特的症状特点 , 是一种葱兰新病害 。
根据本研究结果 , 在自然发病的葱兰植株上存在 M L O ,其可能即是葱兰黄化病的病原 。 关于 M L O
和该病害的关系尚在进一步研究中 。
致谢 本校电镜室高其康 、 力 月群协助制作电镜切片 , 特此致谢 。
3 期 陈集双等 : 葱兰黄化病病原类菌原体的研究 2 4 7
参 考 文 献
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「3」 陈集双 ,李德葆 . 浙江农业大学学报 , 1 9 。 , 16 (增刊 2) : 78 一 82 ·
「4] 龚祖 损 , 陈作义 .沈菊英 . 中国类菌原体图谱 ,北京 : 科学出版社 , 1 9 9 .0
[ 5 〕 K l i n k o w s k i M B o t a l . P f l a n z l i e h e v i r o l o g i e , aB n d 4 , 玫 r l in : A k e d e m i e V e r l a g . 1 9 77 .
[ 6〕 B r o o k s A . J R eP o rt 于I口 r t ic u l t u ar l S oc i e ty , 1 9 6 6 , 9 1 ( 1 2 ) : 4 98 .
[ 7 j M u k e r ji K G
.
S e i uC l
t , 19 7 0
, 3 6 ( 3 )
: 1 6 3一 1 6 5 .
A S T U D Y O N M Y C O P L A SM A
一 L I K E O R G A N I SM S C A U S I N G
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N o v i r u s p a r t i e l e s w a s d e t e e t e d u n d e r
e l e e t r o n m ie r o s e o p e a f t e r n e g a t i v e s t a i n i n g o f d i s e a s e d l e a f s a p
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M y e o p l a s m a
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L ik e
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u l t r a s t r u t u r e u n d e r e l e e t r o n m i e r o s e o P e
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T h o s e o v a l b o d i e s w i t h t r i n e m e m b r a n e s
m e a s u r i n g a b o u t 4 5一 1 2 0 0 n m i n d i a m e t e r w e r e m o s t l y l o e a t e d a l o n g s id e e e l l m e m b r a n e .
N o s u e h s t r u e t u r e s w e r e f o u n d i n e e l l s o f h e a t h y p l a n t s
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M L O s w a s e o n s id e r e d a s t h e e a u s i n g p a t h o g e n s o f t h i s y e l lo w d i s e a s e o f 2
.
c a n d i d a
.
T h i s 15 t h e f i r s t r e p o r t o f M L O s ha p p
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.
K e y w o r d s Z eP hy
r a n t h e s c a n d i d a
,
Y e l l o w d i s e a s e
,
M L O
图 版 说 明
1
. 自然发病的葱兰病株 ; 2 . 病株叶脉横切面中筛管细胞 ,箭头示 M L O ( x s 。。的 ; 3 . 同上 ( 义 9 5 00) 。