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仁用杏叶及中草药提取液对黄瓜黑星病菌的抑制作用及对黄瓜植株酶活性的影响



全 文 :农 药
AGROCHEMICALS
第52卷第4期
2013年4月
Vol. 52, No. 4
Apr. 2013
仁用杏叶及中草药提取液对黄瓜黑星病菌的
抑制作用及对黄瓜植株酶活性的影响
邹晓锦1,孙占祥1,杨 宁1,蒋爱丽2,李 柱2,王建坤2
(1.辽宁省农业科学院,沈阳 110161; 2.东港市农业技术推广中心,辽宁 丹东 118300)
摘要:[目的]探索仁用杏叶及中草药植物源提取液对黄瓜黑星病的抑制效果。 [方法]选择仁用杏叶及中草药提取液,
以黄瓜主栽品种津绿3号为材料,通过盆栽试验对黄瓜黑星病预防效果进行研究。 [结果]中草药制剂(黄柏、金银花、
丁香、荷叶提取液混配)、仁用杏叶提取液和黄柏叶提取液3种植物提取液对黑星病菌都有一定抑制作用,仁用杏叶
提取液效果最显著,该处理对黄瓜黑星病菌的抑制效果达22.83%。 黄瓜植株遭受黑星病原菌侵害后,施用仁用杏
叶及中草药植物源提取液的黄瓜植株中抗氧化酶(POD和SOD)活性上升,黄瓜植株对黑星病菌抵抗能力增强。
关键词:黄瓜黑星病;仁用杏叶、中草药;诱导抗性
中图分类号:S482.2 文献标志码:A 文章编号:1006-0413(2013)04-0304-02
The Effect of Kernel Apricot Leaves and Different Chinese Herbmedicine on
Cladosporium cucumerinum and Activities Enzyme on Cucumber Plant
ZOU Xiao-jin1, SUN Zhan-xiang1, YANG Ning1, JIANG Ai-li2, LI Zhu2, WANG Jian-kun2
(1.Liaoning Academy of Agricultural Sciences, Shenyang 110161, China;
2.Agricultural Technology Promotion Centre in Donggang, Dandong 118300, Liaoning, China)
Abstract: [Aims] The aim of the research was to explore the reasonable application of kernel apricot leaves
and different Chinese herbmedicine on the control of Cladosporium cucumerinum. [Methods] Effect of kernel
apricot leaves and different Chinese herbmedicine (ZY, RXY, HB) on the performance of cucumber seedling
infected by pathogen (C. cucumerinum) was studied in green house. [Results] The results showed that, the fungi
of Cladosporium was inhibited by 3 kernel apricot leaves and different Chinese herbmedicine, especially for the
RYX. About 22.83% pathogen was inhibited on the RXY treatment compared with the control, and about 12.69
and 18.49% pathogen was inhibited by ZY and HB, separately. The defense system (POD and SOD) of cucumber
was induced and strengthened by these kernel apricot leaves and different Chinese herbmedicine while the plant
was attacked by pathogen of C. cucumerinum.
Key words: Cladosporium cucumerinum; kernel apricot leaves; different Chinese herbmedicine; induced resistance
黄瓜是我国栽培面积较大的蔬菜作物之一,黄瓜黑星
病是黄瓜的主要病害,是一种世界性病害,在欧洲、北美、东
南亚等地严重危害黄瓜生产。 近年来,随着我国保护地生产
的发展,黄瓜黑星病在我国部分地区危害严重。 很多研究表
明,某些中草药类植物叶片提取物质可增强作物对病原菌
侵染的抵抗能力[1-2],黄柏叶提取液和中草药对甜瓜白粉病
和黑星病、黄瓜黑星病、番茄灰霉病、枯萎病、叶霉病、草莓
灰霉病等具有抑菌活性或诱抗作用[3-8]。 仁用杏是科尔沁沙
地农林复合生态系统中常见物种,目前对仁用杏产业化已
展开多方面研究[9-11],但对仁用杏叶片提取液植物诱导抗病
性方面研究鲜见报道。 本研究旨在通过仁用杏叶及中草药
提取液对黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)的抑菌
效果研究,探索黄柏、仁用杏及中草药混剂(黄柏、金银花、丁
香、荷叶提取液混配)对黄瓜黑星病的防治效果及其抗病机
理,以期为合理利用仁用杏及中草药植物提取液调控植物
的抗病作用及其有效利用提供重要理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试病原菌:黄瓜黑星病菌 ( C l a d o s p o r i u m
cucumerinum ),辽宁省农业科学院植物保护研究所。 黄
瓜品种:津绿3号。 黄柏(Platycladus orientalis )叶采自中
山大学校园内,黄柏、金银花、丁香、荷叶4种中草药采购
自沈阳中药市场。 仁用杏叶片采自辽宁现代农业园区
“章古台高效现代生态农业示范区”。
1.2 试验方法
仁用杏叶片和黄柏叶提取液制备采用叶片浸提法,
中草药混剂制备参照李永刚等[8]的方法。 试验地点为东
港市孙屯村,黄瓜黑星病接种及病情指数调查方法参照
娄春荣等[12]方法。 中草药混剂ZY(黄柏、金银花、丁香、荷
收稿日期:2013-02-10
基金项目:国家自然基金面上项目(科尔沁沙地南缘旱作农田农林复合系统物种间配置生态效应研究,31170407)
作者简介:邹晓锦(1976—),女,辽宁丹东人,博士,主要从事水土污染与修复工作。 Tel:024-31028118,E-mail:zouxiaojin0501@163.com。
邹晓锦, 孙占祥, 杨宁, 等. 仁用杏叶及中草药提取液对黄瓜黑星病菌的抑制作用及对黄瓜植株酶活性的影响[J]. 农药, 2013, 52(4): 304-305.
305第4期
叶提取液混配)(0.5、1 kg/L),仁用杏叶片提取液RYX(0.25、
0.5 mmol/L),黄柏叶提取液CB(0.15、0.3 kg/L)喷施方法与
病原菌接种方法相同。 试验设不接种对照CK1和接种黄瓜
黑星病对照CK2共8个处理,3次重复。 喷施仁用杏叶和中草
药植物浸提液后7 d取黄瓜苗期叶片检测过氧化物酶POD
和超氧化物歧化酶SOD的活性。
2 结果与分析
2.1 仁用杏叶及中草药浸提液对黄瓜黑星病抑制效果
不同浓度植物浸提液对黄瓜黑星病病情指数及抑制
效果见表1。 接种黄瓜黑星病菌3 d后植株表现发病,随
天数增加黄瓜黑星病病害逐渐加重,接种7 d后病情指数
达到84.9。 试验结果表明:仁用杏叶及几种中草药植物浸
提液处理对黄瓜黑星病的病害均有抑制效果,其中仁用杏
叶片提取液和黄柏叶提取液处理效果比较显著。 中草药
混剂和黄柏提取液对黑星病均有抑制作用,但中草药混剂
0.5、1 kg/L和黄柏0.15、0.3 kg/L的2个质量浓度处理对黄瓜
黑星病的抑制效果差异并不明显。 就抑制黄瓜黑星病扩
散效果来说,仁用杏叶片提取液处理和黄柏叶提取液处理
比中草药混剂效果明显,以0.5 mmol/L仁用杏叶片提取液
和0.3 kg/L黄柏叶提取液的效果最好,对黄瓜黑星病的抑
制效果分别达到22.83%和18.49%。 因此,仁用杏叶及几种
中草药植物浸提液的施用可提高黄瓜植株对黑星病原菌
的抗侵染能力,各植物浸提液处理提高黄瓜抵抗黑星病能
力为仁用杏叶提取液>黄柏叶提取液>中草药混剂。
表1 喷施不同浓度植物提取液3、4、5、7 d后
黄瓜病情指数及抑制效果
药剂处理 病情指数 7 d抑制效果/
3 d 4 d 5 d 7 d %
对照 44.6 63.7 76.8 84.9
中草药混剂 0.5 kg/L 42.4 59.7 72.6 81.3 9.47
1 kg/L 40.5 59.1 68.5 78.4 12.69
仁用杏叶提取液 0.25 mmol/L 43.9 59.8 68.2 77.7 13.47
0.5 mmol/L 42.3 55.6 64.5 69.3 22.83
黄柏提取液 0.15 kg/L 44.1 58.2 70.4 77.1 14.14
0.3 kg/L 42.4 56.8 65.9 73.2 18.49
2.2 仁用杏叶及中草药浸提液对黑星病黄瓜叶片SOD
过氧化物歧化酶含量影响
黄瓜植株叶面喷施仁用杏叶及中草药提取液叶片中
SOD含量见图1。 接种黑星病的黄瓜叶片,施用几种不同
质量浓度的中草药浸提液后,黄瓜叶片中SOD含量均有不
同程度升高。 1 kg/L中草药混剂处理表现尤其显著,该处
理中SOD含量是对照的1.93倍。 仁用杏叶提取液2个剂
量处理对黑星病黄瓜叶片SOD含量诱导作用也很明显,
比接种黑星病未处理的黄瓜叶片分别提高1.81、1.92倍。
仁用杏叶片提取液和黄柏叶提取液的2个不同剂量水平
对黑星病黄瓜叶片SOD过氧化酶含量影响无显著区别。
这表明仁用杏叶及中草药浸提液的适宜使用剂量还需进
一步深入探讨。
图1 黄瓜SOD超氧化物歧化酶的含量
2.3 仁用杏叶及中草药植物浸提液对黑星病黄瓜叶片
POD过氧化酶含量影响
仁用杏叶及几种中草药植物提取液处理的接种黑星病
黄瓜叶片中POD含量见图2。 接种黑星病菌的黄瓜植株内
POD比未接种黄瓜植株POD含量略有升高,这也许是因为
在病原菌侵染后,黄瓜植株的抗氧化系统酶系有了响应。 中
草药混剂的2个剂量与低剂量仁用杏叶片提取液以及低剂
量黄柏提取液处理的黄瓜黑星叶片POD含量无显著差异。
几种不同剂量植物提取液处理均能提高黄瓜植株内POD活
性,分别提高了未感病植株和接种黑星病植株叶片POD含
量的17.7%~99.6%。 其中0.5 kg/L仁用杏叶片提取液处理对
接种黑星病菌的黄瓜植株POD升高的刺激效果最为显著。
图2 黄瓜POD过氧化酶的含量
3 结论与讨论
有研究者认为利用外界因素刺激,可使植物自身产
生对于外缘胁迫的抗病性,称之为诱导抗病性。 诱导抗
病性作用机制包括物理机制、分子机制、生理生化及信号
机制4种比较成熟的理论。 植物的防御酶系统是在酶催化
下一系列复杂新陈代谢的结果[7,12]。 POD是植物体抗氧化酶
系统中主要保护酶之一,与SOD、CAT三者协调一致使细胞
内自由基的产生和清除出于动态平衡状态。 POD和SOD等
酶的活性与植物抗病性有关,一般认为,植物细胞受到胁迫
时,酶的平衡会被打破,植株常发生膜脂过氧化作用,该过程
产生的自由基对生物膜有伤害作用[13],这需要植株自身保护
酶系统启动,降低或消除活性氧对膜脂的攻击,从而缓解植
株受到的毒害作用。 POD和SOD是植物体抗氧化酶系统中
重要保护酶,能对细胞造成的伤害作出灵敏的响应[14-16],通过
减缓细胞膜质的受损程度来提高植株对病原菌的抵抗能力,
有效降低病菌侵害造成活性氧对作物膜质的攻击能力,达到
保护膜结构的效果,消除自由基产生的伤害起修复作用。
邹晓锦,等:仁用杏叶及中草药提取液对黄瓜黑星病菌的抑制作用及对酶活性的影响
(下转第308页)
308 第52卷农 药 AGROCHEMICALS
在反应瓶内加入2,5-二甲基苯基甲基酮125 g、硫磺35 g、
吗啉147 g,在110 ℃搅拌7 h,气相色谱跟踪,反应物消失
后,停止加热,降至室温,减压蒸去吗啉,得到的粗品加入
乙醇中,结晶析出,收率66%。 2-(2,5-二甲基苯基-1-吗
啉基)乙基硫代酮135 g、252 mL 30%氢氧化钠和302 g乙二
醇,加热至120 ℃搅拌7 h,气相色谱跟踪,待原料消失后,停
止加热,冷却至65 ℃,向其中滴加双氧水293 g,100 ℃搅拌
2 h,408 mL二氯甲烷和408 mL水加入,搅拌30 min,分层,
向水层滴加70 mL 45%的硫酸溶液,析出固体物,过滤,得
到2,5-二甲基苯甲酸,收率98%。
3 小结
原药合成:路线2中用2,5-二甲基苯乙酰氯和4-甲氧
基-1-氰基环己胺为原料,经酰胺化、酯化、合环,最后与氯甲
酸乙酯反应,该方法得到的产物是外消旋体,需进行异构体
拆分才能得到顺式结构的螺虫乙酯,这增加了工艺的复杂
程度并使成本上升。 路线1可直接制备手性的螺虫乙酯,相
对于第2条路线,没有拆分的步骤,更适宜于工业化开发,该
工艺关键在于手性原料的制备。 中间体2,5-二甲基苯乙酸
的合成:从文献中可知,方法1、4的合成收率低,且方法4产生
有恶臭的硫化物中间体,不宜用于工业化开发。 方法2、3收
率较高,选择性好,反应操作简单,适宜于该中间体的制备。
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责任编辑:赵平
仁用杏叶及中草药浸提液对黄瓜黑星病病情指数具有
抑制效果。 其中仁用杏叶提取液对黄瓜黑星病的防效最佳,
对黄瓜黑星病抑制率达22.83%。 很多中草药作为植物源诱
导剂,能够在植物逆境过程中诱导并增强植物对病害的抵
抗能力已经被很多研究所证实[5,7,16]。 但由于植物病原菌的致
病机理和植株感病发病的病害流行规律比较复杂,因此仁
用杏叶及中草药植物浸提液的抗病诱导效果因作物种类及
病害种类不同有明显区别。 本试验条件下,仁用杏叶及几种
中草药植物浸提液的施用可一定程度抑制黄瓜黑星病病情
危害,这可能与其诱导了黄瓜植株中POD和SOD活性上升
有关。 仁用杏叶及几种中草药植物浸提液对黄瓜起到的抗
病机制是复杂的,尚需要进一步深入研究和探讨。
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责任编辑:赵平
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