全 文 ：CE H N IS E HO RT IU CLTU E R B AS T R A CTS
紫尊玉替腋芽再生体系的建立
王洪习
(璞阳职业技术学院 生物工程系 , 河南 璞阳 45 了。。0)
摘 要 : 为建立紫尊玉眷的组培再生体 系 , 以腋芽为外植体 , 以 M S 为基本培养基 , 添加不同浓度植物
生长调节剂 6一B八和 NA 八进行诱导培养 、 增殖培养和生根培养 。 结果表明 : 紫尊玉眷腋芽最适宜 的取材
时期 为春季 5 一 4 月份 ; 外植体最佳消毒方法是 70 % 一 75 % 的酒精浸 泡 功 +5 0 . !% 的 HgC 12 溶液消毒
5 im n ; 最佳启 动 培 养基 为 M S+ 5 . O mg / L 6 一BA + o . Z mg / L NA 八 ; 最佳增 殖培 养基 为 M S+ 5 . O mg / L
6 一B八+ 0 . 5 m g / L N八八 ; 最佳生根培养基为 ! / 2 M S + o . s mg / L NA 八+ o . s mg / L 活性炭 + 2 0 蔗糖 。
关键词 : 紫尊玉眷 ; 腋芽 ; 再生体 系
紫粤玉替 , 又名紫粤 , 百合科宿根草本花卉 , 原
产中国和 日本 。 紫粤作为园艺栽培的优良花卉品种 ,
广泛应用于园林造景和室内观赏 。 紫粤从播种到开花
至少需 3年时间 , 且种子繁殖的后代一般不能保持亲
本的优 良性状 , 因此生产中很少采用种子繁殖 。 分株
是生产中常用的繁殖方法 , 但繁殖速度较慢 , 年增殖
系数约为 3 一 4 , 不能满足社会的需求 。 本试验通过
对紫粤腋芽进行组培快繁研究 , 以期建立再生植株的
技术体系 , 提高其增殖系数 , 满足生产需要 。
1 材料与方法
1
.
1 试验材料
以蹼阳市创新园林研究所育苗基地内生长健壮的
紫粤玉替腋芽为试验材料建立无菌体系 。
1
.
2 试验方法
1
.
2
.
1 试验材料的采集与处理 在天气晴朗的上
午 , 选取不同时期生长相一致的健壮紫粤植株腋芽作
为外植体进行试验 。 首先 , 采集的材料用毛刷轻刷除
去表面杂质 , 流水冲洗 0 . 5 一 l h , 滤干表面水分后
置于超净工作台上 , 用体积分数为 7 0% 一 7 5% 的酒
精浸泡 30 5 , 无菌水洗 2 一 3 次 , 每次约 3 m in ; 之
后再用质量分数为 0 . 1% 的 H g CI : 溶液进行消毒 , 消
毒时加几滴吐温 一 80 , 且不停地搅拌 ; 最后用无菌水
洗 5 一 6次 , 每次 3 一 s m加 , 用滤纸吸去水分后置
于无菌滤纸上 , 剥去外包的叶片 , 取出嫩芽接入各种
备用启动培养基中 。
1
.
2
.
2 启动培养基的选择 以 M S 培养基为基本培
作者简介 : 王洪习 ( 1 9 6 4一 ) , 男 , 硕士 , 副教授 ; 主要从
事植物组织培养及生理研究 。
项 目来源 : 淮阳职业技术学院自然科学研究项 目 (2 0 1 5 p y z
y z r OS )
。
养基 , 添加不同质量浓度的植物生长调节剂 6一 B A 和
N A A
, 蔗糖 30 9 / L 。 试验采用二因素三水平试验设
计 , 将消毒后的腋芽分别接种到启动培养基上 , 每瓶
接 3个芽 , 每个处理 10 瓶 , 重复 3次 。每 6 d观察 1次 ,
3 0 d统计启动率 。 启动率 (% )一 (萌动的外植体总数 / 未
污染的外植体总数 ) x 1 0 % 。
1
.
2
.
3 培养条件 温度为 (26 士 1) ℃ ; 光照为 12 h / d ;
光照强度为 2 5 0 玫 ; p H 值 5 . 8 一 6 . 0
1
.
3 数据处理
试验数据用 Ex ce l 2 0 0 3 和 印5 19 . 0 统计软件进
行分析 。
2 结果与分析
2
.
1 取材时期对外植体灭菌效果的影响
在最佳消毒处理下 , 紫粤腋芽污染率随取材时期
的不同呈现先下降后上升趋势 , 其中 4 月中旬取材的
污染率最低 , 为 2 5 . 8% , 8 月中旬取材的污染率最高 ,
为 犯 . 6% 。 分析原因可能是春季对玉替萌发生长有利 ,
对微生物繁殖不利 , 外植体带菌少 , 易消毒 。
2
.
2 不同激素浓度配比对外植体启动效果的影响
从表 1各处理之间的多重比较结果来看 , B S 与
其他处理差异极显著 , 为最好的配方 ; B 4 和 B 6 、 B Z
和 B 7 、 B g 之间差异不显著 ; B S与其他处理差异显著 ,
B l
、
B 3 和 B Z 、 B 7之间差异在 0 . 01 水平上显著 ; B l
与 B 3 、 B g 之间差异不显著 , B l 显著低于其他处理 。
由表 2 可知 , 6一B A 3 水平间差异极显著 , 水平
2 极显著地高于另外两个水平 , 即 6一 B A 的浓度为
3
.
0 m g / L 时对玉替腋芽启动诱导效果最好 ; 浓度为
0
.
2 m g / L 的 N A A 对玉替腋芽启动诱导效果显著高
于其他两个水平 , 浓度为 0 . 1 m g / L 和 0 . 3 m g / L
的 N A A 对玉替腋芽启动诱导效果差异不显著 。 因此 ,
在进行玉替腋芽启动诱导时 , 选择浓度为 0 . 2 m g / L
N A A 诱导效果最佳 。
2 2
中国园艺文摘 20 6 1年第 3 期
表 1不 同激素浓度配比对外植体启动率的影响
培养基 重复试验的启动率 /) (0重复 1重复 2平均启动率 (
%)
8 8
3 6
重复 3
3 6
.
8 9
47
.
5 4
7 5
7 l
2 9
6 9
.… 0气、é 4 14ǐO八
.…O八ǐ n气、ō é J4ǐ
85
7 5 6 4
3 0
7 8
3 2
ǐ飞é
6n勺O八 4 106飞é…ǐ n勺 4 1ō J4气、éǐO八
4 8
.
15
5 8
.
0 4
4 2
.
7 6
8 6
8 9
4 8
.
7 0
5 7
.
3 9
4 2
.
0 4
3 7
.
88 D F f
47
.
4 D 1d
4 0
.
E 0 6 De
7 3
.
84 B b
85
.
05 A a
7 5
.
4 2 B b
4 8
.
0 8 D d
5 7
.
94C C
4 2
.
7 E 8 De…O八ǐ飞é 4 1
1
飞éō J
4
1
6
ǐO八 n勺 B
注 :多重比较采用最小显著极差法 (LS R) , 小写字母表示在 0 .沥
水平上显著 , 大写字母表示在 0 . 01 水平上显著 , 字母相同者表示
水平间不显著 。 下同 。
表 2 6一BA 和 NA A三水平 L SD 检验
6一 B A
(m g / L )
平均数
4 1
.
7 82
7 8
.
10 2
4 9
.
9 6 4
显著性差异
0
.
0 5 0
.
0 1
b B
a A
C C
N A A
(m g / L )
0
.
1
0
.
2
0
.
3
平均数
5 3
.
2 6 7
6 3
.
4 6 9
5 3
.
1 1 3
显著性差异
表 4 方差分析表明 : 6一B A 、 N A A 对玉替不定芽
增殖的影响极其显著 , 比较 6一B A 、 N A A 的 F 值可看
出 , 6一 B A 对玉替不定芽增殖系数的影响高于 N A A 。
综合考虑 , 紫粤玉替不定杂迷代增殖培养基的最佳组合
为 : M S+ 3 . o n 堪 / L 6一B A + 0 . 5 m g / L N A A 。
表 4 不定芽增殖的方差分析
变异来源 自由度 平方和 均方 F 值 显著性
处理变异 8 4 2 9 0 6 . 7 4 l a 5 36 3 . 3 4 3 6 2 6 . 8 8 4 0
6一 B A 2 14 9 1 7 . 8 52 7 4 5 8 . 9 2 6 8 7 1 . 8 2 3 0
N A A 2 1 1 7 4 8
.
9 6 3 5 87 4
.
4 8 1 6 8 6
.
6 2 8 0
6一 B A * N A A 4 16 2 3 9 . 9 26 4 0 5 9 . 9 8 1 4 7 4 . 5 4 3 0
误差 18 1 5 4 . 0 00 8 . 5 5 6
总和 2 7 6 14 8 0 3 . 0 00
校正后总和 26 43 06 0 . 7 41
注 : a . R 平方 一 1 . 0 0 (调整的 R 平方 一 0 . 9 9 )。
0
.
0 5 0
.
0 1
b B
a A
b B
因此 , 最有利于紫粤玉替腋芽启动诱导的培养基配
方组合为 : M S+ 3 . o n 堪 / L 6一B A + 0 . 2 n 】g / L N A A 。
2
.
3 不同激素浓度配 比对紫粤玉替不定芽增殖
的影响
将诱导产生的丛生芽经过一次继代后将芽分割成
小块 , 每块 2 一 3 个不定芽芽 , 然后转接到增殖培养
基中培养 。 芽转接 10 d 左右开始从不定芽芽的基部
萌发出新的芽丛 , 增殖培养 30 d 后统计增殖系数 。
由表 3 各处理之间多重比较结果可知 , C S 增殖系数
最高达 7 . 08 , 与其它处理差异极显著 : C 4 和 C 6 ,
C Z 和 C 3 、 C 7 、 C S 、 C g 之间差异不显著 ; C l 和 C Z
之间差异在 0 . 01 水平上显著 , 与其它处理差异显著 ,
且低于其它处理 。
表 3 不同激素浓度酉己比对紫尊玉替不定芽增殖的影响
不定芽有效苗总数 (个 )
培养基— 平均增殖系数 生长状况重复 1 重复 2 重复 3
3 结论与讨论
紫粤玉替腋芽最适宜的取材时期为春季 3 一 4 月
份 ; 外植体最佳的消毒方法是 7 0% 一 7 5% 的酒精浸
泡 30 5 + 0 . 1% 的 H g 1C 2 溶液消毒 s m加 ; 腋芽启动
诱导培养的适宜培养基组合为 M S + 3 . 0 m g / L 6一 B A
+ 0
.
2 m g / L N A A
; 不定芽增殖培养基的最佳组合
为 M S + 3 . 0 m g / L 6一B A + 0 . 5 m g / L N A A ; 不定
芽诱导生根培养基的最佳组合为 1 / 2 M s + 0 . 3 m g / L
N A A + 0
.
3 m g / L 活性炭 + 20 蔗糖 。
培养基内添加不同浓度配比的 6一 B A 和 N A A 对
玉替腋芽的启动率 、 试管苗的继代增殖系数以及生根
率均存在较大影响 。 玉替腋芽的启动率随 6一B A 和
N A A 的浓度增加呈现先上升后 降低的趋势 。 通过对
紫粤玉替的继代增殖培养发现 , 试管苗增殖系数与
6一 B A 的浓度增减呈正相关 , 但高浓度的 6一B A 会
导致有效苗数量下降 、 生根率降低 。 试管苗生根率与
N A A 的浓度增减呈正相关 , 但高浓度的 N A A 诱导
产生的根较纤细 , 对试管苗移栽成活不利 。
3
.
5 7 C D d
9 2
U4
+ + +
+ + +
+ + +
+ +
+ +
+ +
参考文献 :
「l] 崔佩荣 , 刘洪章 , 刘树英等 . 玉替属植物在抗性及引种栽
培方面的研究进展「J」. 北方园艺 , 201 3 , (l 0) : 1 8 5一 18 9 .
「2] 王春婷 , 石大兴 , 王米力等 . 紫警玉替的组织培养和快速
繁殖「J」. 植物生理学通讯 , 2 0 0 6 , 42 (4 ) : 6 85 .
「3] 张洪娣 , 张探 , 吕卉等 . 紫警玉替快速繁殖的研究「J ] . 湖
北农业科学 , 2 0 1 1 , 5 0 ( l ) : 1 8 0一 1 8 2 .
「4] 杨丹 , 顾德峰 , 董然等 . 三种玉替新品种离体快繁技术的
研究 [J ] . 北方园艺 , 2 0 1 2 , ( l ) : 12 4一 1 2 6 .
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注 : “ + ” 表示生长状况一般 , 叶色淡绿 ; “ + + ” 表示生长状况良好 ,
叶色浓绿 ; “ + + + ” 表示健壮饱满 , 叶色浓绿 。
2 3