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[ 基金项目] 　湖北省自然科学基金资助(编号:204130423)　[ 作者简介] 　陶勇 ,男 ,硕士研究生, 13871365805 , E-mail:eggface@163.com　
＊通信作者:石米扬 ,女 ,副教授 , 027-87682156 , E-mai l:fhy@w hu.edu.cn
连钱草乙醇提取物对豚鼠离体肠平滑肌和小鼠肠运动功能的影响
陶勇 ,肖玉秀 ,石米扬＊ ,易吉萍　(武汉大学药学院 , 湖北 武汉 430072)
[ 摘要] 　目的:观察连钱草乙醇提取物对小鼠小肠推进运动 、药物性腹泻小鼠模型和豚鼠离体回肠平滑肌收缩的影响 , 探讨
其作用机理。方法:采用在体方法观察连钱草乙醇提取物对小鼠小肠推进功能的影响 ,采用离体方法观察连钱草乙醇提取物
对豚鼠回肠平滑肌运动功能的影响。结果:连钱草乙醇提取物能够显著抑制小鼠小肠炭末推进率(P<0.01), 缓解大黄所致
小鼠腹泻(P<0.01), 对抗新斯的明所致的肠蠕动亢进(P <0.01)。抑制豚鼠离体回肠平滑肌收缩(P <0.01), 拮抗乙酰胆
碱 、组胺 、氯化钡对离体豚鼠回肠平滑肌的激动作用(P <0.01)。结论:连钱草乙醇提取物具有抑制肠蠕动作用 , 这种作用可
能由胃肠道的胆碱能受体和组胺受体介导 , 或直接作用于回肠平滑肌细胞。
[ 关键词] 　连钱草乙醇提取物;肠平滑肌;受体;腹泻
[ 中图分类号] R285.5　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2004)02-0065-03
Effect of the ethanol extracts of Glechoma longituba on isolated ileum smooth muscle of guinea
pig and the intestine movement function of mice
TAO Yong ,XIAO Yu-Xiu ,SHI M i-Yang , et al(College of Pharmacy ,Wuhan University ,Hubei Wuhan 430072 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　 To study the effect and mechanisms of the ethanol extracts o f Glechoma longituba (Nakai)Kupr
(EGLK)on the small intestine propulsive function in mice , diarrhea models induced by the w ater extracts of rhubarb and neostig-
mine me thylsulfate and the isolated ileum smoo th muscle movement.METHODS　The experiment method of intestine propulsion of
carbon ink in mice , diarrhea model induced by the water ex tracts of r hubarb and neostigmine methy lsulfate and the experiment
method of isolated ileum smooth muscle of guinea pig were used in the experiments.RESULTS　 The intestinal propelling move-
ment of carbon ink and experimental diar rhea caused by the w ater extracts o f rhubarb and neostigmine methylsulfate in mice could be
markedly antagonized by EGLK.The spontaneous movements of isolated intestinal smooth muscle in guinea pig could be suppressed.
The excitation induced by acety lcholine , histamine and BaCL2 could be also antagonized.CONCLUSIONS　 EGLK has the inhibition
effect on intestine peristalsis w hich may be mediated through cho linoceptor and histamine receptor or directly acts on the cells of
ileum smooth muscle.
KEY WORDS:ethanol extracts of Glechoma longituba (Nakai)Kupr ;smooth muscle of intestine;receptor;diarrhea
　　连钱草的原植物是活血丹 Glechoma longituba(Nakai)
Kupr., 为唇形科植物。具有利湿通淋 、清热解毒 、散瘀消肿
的功能[ 1] 。主治尿路感染 、疳积 、黄疸 、感冒 、肺痈 、咳嗽 、小
儿惊风 、跌打扭伤 、骨折 、风湿性关节炎。在湖北省民间常用
于腹泻的治疗 ,具有较好的疗效。为了探讨连钱草治疗腹泻
的作用机制 ,笔者观察了连钱草醇提物对豚鼠回肠平滑肌和
小鼠肠运动的影响 ,旨在为连钱草治疗腹泻提供实验依据 ,
现将结果报道如下。
1　材料
LMS-2B 二道生理记录仪(成都仪器厂);YJ501 型超
级恒温水浴(上海跃进医疗器械厂);Bs200s 电子天平(Sar-
to rins 公司);健康豚鼠(湖北省卫生防疫站动物实验中心),
体重 250～ 350 g , ♀♂兼用;昆明种小鼠(湖北省卫生防疫站
动物实验中心), 体重 18 ～ 24 g , ♀♂兼用;氯化乙酰胆碱(北
京化学试剂公司 , 批号 20011015);甲基硫酸新斯的明注射
液(山东天福制药厂 , 批号 0207051);组胺(中国科学院上海
生物化学研究所);氯化钡自贡市张家坝盐化有限公司);大
黄浸液(大黄购于洪山区医药公司 , 取大黄粉适量 ,加蒸馏水
浸渍 24 h , 浓度为 1 mL∶0.2 g 生药 , 备用);连钱草乙醇提取
物[ 2](连钱草自行采集 , 由湖北中医学院中药鉴定教研室陈
家春教授鉴定为唇形科植物连钱草 , 取粉碎过 4 号筛的连钱
草干品适量 , 加 95%的乙醇于圆底烧瓶中 , 浸泡6 h后水浴
加热回流1 h ,趁热过滤 ,药渣再用 95%的乙醇加热回流1 h ,
过滤 ,合并滤液 , 减压回收乙醇浓缩至 100%, 即含生药1 m L
∶1 g , 备用)。
2　方法与结果
2.1　对正常小鼠小肠推进运动的影响[ 3] 　取小鼠 24只 ,体
重 18 ～ 20 g , 随机分成 3 组 ,每组 8 只 , 分别灌服连钱草乙醇
提取物 ,阴性对照灌服等容积生理盐水 , 阳性对照灌服硫酸
阿托品0.01 g·kg-1 。每只小鼠给药后 30 min ,均以 5%炭末
混悬液(混悬于 2%羧甲基纤维素溶液中)0.3 mL 灌胃。 20
min 后 ,将小鼠颈椎脱臼法致死 , 打开腹腔取出小肠 ,不加牵
引平铺于托盘上 ,测量从幽门至回盲部之间距离(小肠全长)
及炭末推进距离 ,求出推进百分率 ,结果见表 1。
炭末推进率(%)=炭末在小肠内推进距离(cm)小肠全长(cm) ×100%
·65·中国医院药学杂志 2004年第 24卷第 2期 Chin Hosp Pharm J , 2004 Feb , Vol 24 , No.2
表 1　连钱草乙醇提取物(灌胃)对小鼠小肠推进运动的影
响(n=8, x±s)
Tab 1　The effect of EGLK(ig)on intestinal propelling move-
ment in mice(n=8 , x±s)
组别 剂量 小肠全长
cm
炭末推进距离
cm
炭末推进率
%
生理盐水组 20mL·kg-1 38.6±1.4 19.5±0.9 50.5±2.3
硫酸阿托品 0.01g·kg -1 39.4±2.4 16.1±1.4 40.8±2.0a
连钱草乙醇提取物 15g·kg-1 38.5±1.6 16.0±1.2 41.6±2.1a
注:与生理盐水对照组比较 , aP <0.01
由表 1 可见 ,与生理盐水对照组相比 ,连钱草乙醇提取
物能显著降低小肠炭末推进率(P<0.01),表明连钱草乙醇
提取物有抑制小鼠小肠推进运动的作用。
2.2　对大黄致小鼠泻下作用的影响[ 2] 　取小鼠 24只 , 体重
18 ～ 22 g ,随机分成 3组 , 禁食 12 h(供水)。连钱草醇提物
组于灌服药物后 1 h , 加服大黄粉(20%, 5 g·kg -1)浸液与炭
末混悬液 ,另两组中一组给 5%炭末混悬液作为正常对照 ,
一组给大黄粉炭末混悬液。观察各组黑便出现时间及 6 h
内黑便粒数 ,结果见表 2。
表 2　连钱草乙醇提取物(灌胃)对小鼠腹泻的影响(n=8 , x
±s)
Tab 2　The effect of EGLK(ig)on experimental diarrhea in
mice(n=8 , x±s)
组别 剂量 黑便出现时间
min
6h内黑便数
粒
黑便
形状
生理盐水组 20mL·kg -1 319.9±14.8 2.8±0.7 成形
大黄组 5g·kg-1 143.9±8.6a 8.1±1.0a 软便
连钱草乙醇提取物 15g·kg -1 217±13.5ab 3.1±0.8ab 成形
注:与生理盐水组相比aP<0.01;与大黄组相比 , bP<0.01
由结果可见 ,连钱草醇提物组黑便出现时间均较大黄组
为慢 ,黑便粒数较少 , 差异显著 ,表明连钱草乙醇提取物有抑
制肠蠕动 ,减缓粪便排出的作用。
2.3　对甲基硫酸新斯的明致小肠运动亢进的影响[ 4] 　取小
鼠24 只 ,体重 18 ～ 22 g , 随机分成 3 组。禁食 12 h(供水)。
生理盐水组给等容积生理盐水 ,新斯的明组以甲基硫酸新斯
的明 2 mg·kg-1灌胃 ,连钱草乙醇提取物灌胃给药。 30 min
后 ,以甲基硫酸新斯的明 2 mg·kg-1灌胃, 10 min后 , 以 15%
活性炭混悬液(混悬于 2%的羧甲基纤维素溶液中)0.3 mL灌
胃。给炭末后 20 min将小鼠脱颈椎处死 ,测量全肠长度及炭
末在肠内推进长度, 求出炭末推进率, 结果见表 3。
表 3　连钱草乙醇提取物(灌胃)对甲基硫酸新斯的明所致
小鼠小肠运动亢进的影响(n=8, x±s)
Tab 3　The effect of EGLK(ig)on intestinal movement excite-
ment w hich is induced by neostigmine methylsulfate(n=8 , x±
s)
组别 剂量 例数 炭末推进率%
生理盐水组 20m L·kg -1 8 49.9±2.1
新斯的明组 2mg·kg -1 8 78.5±4.2 a
连钱草乙醇提取物 15g·kg -1 8 57.6±2.2 ab
注:与生理盐水组相比aP <0.01 ,与新斯的明组相比bP <0.01
结果可见甲基硫酸新斯的明能使肠蠕动亢进 , 而连钱草
醇提物组能降低小肠炭末推进率 , 对抗新斯的明所致的肠蠕
动亢进。
2.4　对离体豚鼠回肠平滑肌的影响[ 2]
2.4.1　连钱草乙醇提取物对豚鼠回肠平滑肌的作用　取健
康豚鼠 8 只 ,体重 250～ 350 g , ♀♂不限。 用木锤敲击动物
头部致昏 ,立即剖腹取出回肠 ,小心分离除去粘膜组织 , 随后
用台氏液将肠内容物洗净 ,并将肠管分剪成 1～ 2 cm 长小段
的标本备用 ,将上述备用的回肠标本 , 置于盛有 10 mL 台氏
液的麦氏浴槽内 , 通入 O 2 , (38.0±0.5)℃恒温 , 张力负荷 1
g , 平衡 30 min , 用记录仪描记运动曲线 , 稳定后加入连钱草
乙醇提取物(0.2 g·mL-1), 观察给药前后回肠平滑肌的收
缩幅度 、频率 、张力的变化 , 比较给药前后的肠道活动力[ 5]
(肠道活动力=平均强度×频率 ,单位:g·次数·min-1), 结果
见表 4。
表 4　连钱草乙醇提取物对豚鼠回肠平滑肌的作用(n=8 , x
±s)
Tab 4　The effect of EGLK on isolated intestinal smoo th mus-
cle of guinea pig(n=8 , x±s)
浓度(生药)
g·mL -1 标本数
肠道活动力 g·次数·min-1
给药前 加一定浓度乙醇提取物后
0.05 8 9.8±1.5 4.6±0.7
0.1 8 9.8±1.5 5.5±0.9
0.2 8 9.8±1.5 6.7±1.0
0.3 8 9.8±1.5 5.0±0.8
注:与给药前比较 , P均<0.01
由表 4 可见 ,不同浓度的连钱草乙醇提取物(0.05 , 0.1 ,
0.2 , 0.3g·mL-1)均能显著抑制豚鼠离体回肠平滑肌的活
动。
2.4.2　连钱草乙醇提取物对豚鼠回肠平滑肌细胞受体的作
用将上述回肠标本 ,置于盛有 10 mL 台氏液的麦氏浴槽内 ,
通入 O2 ,(38.0±0.5)℃恒温 , 张力负荷 1 g , 平衡 30 min , 用
记录仪描记运动曲线 , 稳定后分别加入氯化乙酰胆碱 、组胺
和氯化钡等各类激动剂 , 待其稳定后加入连钱草乙醇提取
物 ,观察两次给药前后回肠运动的变化 , 比较给药前后的肠
道动力 ,结果见表 5。
表 5　连钱草乙醇提取物对豚鼠回肠平滑肌细胞受体的作
用(n=8, x±s)
Tab 5　The effect o f EGLK on the cell recepto r of isola ted in-
testinal smoo th muscle of guinea pig(n=8 , x±s)
工具药 标本数 肠道活动力 g·次数·min
-1
给药前 给药后 加乙醇提取物后
乙酰胆碱 8 8.8±2.4 16.7±4.7a 8.9±2.6b
组胺 8 4.5±0.4 8.4±0.5a 4.5±0.4b
氯化钡 8 4.8±2.4 19.6±3.0a 5.5±3.0b
注:与加入工具药前相比较 , aP <0.01 ,与加入工具药后的肠道活动
力相比 , bP<0.01
结果可见 ,连钱草乙醇提取物能够显著拮抗氯化乙酰胆
碱 、组胺 、氯化钡对离体豚鼠回肠平滑肌的激动作用。
3　讨论
小鼠在体实验表明 ,连钱草乙醇提取物对大黄冷浸液引
起的小鼠腹泻有明显的拮抗作用 , 对炭末在小鼠小肠内的推
进率有抑制作用 ,亦能对抗新斯的明所致的小肠运动亢进。
离体实验结果显示 , 连钱草乙醇提取物能明显拮抗组胺 、氯
化乙酰胆碱和氯化钡所致回肠平滑肌的兴奋作用 , 提示其抑
制作用可能由胆碱能受体和组胺受体介导 , 或直接作用于肠
道平滑肌细胞。
本研究表明连钱草是一种治疗腹泻的有效中草药 , 有一
定的开发前景。
参考文献:
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[ 收稿日期] 2003-04-18
　
[ 作者简介] 　单国瑾 , 女 , 学士 , 主治医师 , 电话:010-66171122-2480
高效液相色谱法测定人全血中瑞芬太尼浓度
单国瑾1 ,吴新民1 ,贡素宣2 ,刘虎威2 ,耿志宇1 　(1.北京大学第一医院 , 北京 100034;2.北京大学化学与分子工程学
院 ,北京 100871)
[ 摘要] 　目的:建立测定人血中瑞芬太尼的高效液相色谱-紫外检测方法 , 为临床监测血药浓度提供方法学。方法:采用液-
液萃取法 ,用 1-氯丁烷提取全血中的瑞芬太尼 , 选用 GI97559(瑞芬太尼乙基类似物)为内标定量。色谱柱为 Zorbax SB-CN
(4.6 mm×250 mm , 5μm),流动相为乙腈-甲醇-磷酸二氢钠缓冲液(1∶2∶0.43), 柱温 30℃,流速1.5mL·min-1 ,紫外210 nm检
测 ,按内标法定量。结果:标准曲线在 3 ～ 200 μg·L-1范围内 , 浓度与峰面积比有良好的线性关系(r=0.9966)。最低检测浓
度为 2μg·L-1 。提取回收率77.34%～ 87.72%。方法回收率97.13%～ 100.99%, 日内 RSD 小于5.3%, 日间 RSD 小于
6.3%。结论:本方法快速 、准确 、灵敏 ,可用于瑞芬太尼的临床药动学研究。
[ 关键词] 　高效液相色谱-紫外检测器;瑞芬太尼;血药浓度
[ 中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2004)02-0067-02
Determination of remifentanil concentration in blood by HPLC with UV detection
SHAN Guo-Jin , WU Xin-Min , GONG Su-Xuan , et al(Beijing University First Hospital , Beijing 100034 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　An HPLC-UV method was established for determination of remifentanil in w hole blood.METHODS　
The new HPLC procedure involved a liquid-liquid extraction.The remifentanil in blood was ex tracted with n-butyl chlo ride , and
G I97559-an ethy l analogue of the drug was used as the internal standard.The sample was separa ted on Zorbax SB-CN(4.6 mm×
250 mm , 5 μm)colum with a mobile phase of mix ture of acetonitrile , methanol(1∶2)and phosphate buffer , the temperature was
set at 30℃ with flow rate of 1.5 m L·min-1 , detection -UV at 210 nm.RESULTS　A linearity w as obtained from 3 ng·mL-1 to
200μg·L-1 of remifetanil in w hole blood w ith a good correlation(r=0.9966).Detection limit w as 2μg·L-1.The recovery o f ex-
traction was 77.34%～ 87.22%.The recovery o f methodology was 97.13%～ 100.99%, w ithin-day RSD less than 5.3%;inter-
day RSD less than 6.3%.CONCLUSIONS　This method is rapid , accurate and sensitive , it is very suitable for the investig ation of
clinical pharmacokinetics of remifentanil.
KEY WORDS:HPLC-UV de tection;remifentanil;blood concentration
　　瑞芬太尼是六氢吡啶的衍生物 , 有通常的阿片类药结
构 ,镇痛效能强 、对呼吸循环肝肾功能影响小等特点。因含
有一个酯键 ,易被血液及其他组织中的非特异性酯酶快速降
解 ,故体内清除快 、半衰期短 ,消除速度不受给药时间和剂量
影响 ,是目前临床应用较广泛的麻醉药之一[ 1.2] 。有关瑞芬
太尼血药浓度测定法 , 国内尚未见报道 , 国外文献也较
少[ 3.4] 。笔者建立 HPLC-UV 检测器测定瑞芬太尼血药浓
度的方法 ,为临床合理用药提供依据。
1　仪器与试剂
1.1　仪器　惠普(HP)1100 高效液相色谱仪(HPLC),配二
极管阵列紫外检测器(DAD);康氏电动振荡机(北京通县城
关医疗器械厂);低温冷冻离心机(LU-418H);QL-901 旋
涡混合器(江苏海门市医用仪器厂)。
1.2　药品和试剂　瑞芬太尼(GI87804)盐酸盐对照品 , 含量
100.6%, 内标 GI97559 ,纯度98.16%(湖北宜药集团有限责
任公司研究所);乙腈 、甲醇 、1-氯丁烷为色谱纯;其他试剂为
分析纯;水为重蒸馏水。
2　方法与结果
2.1　标准溶液配制　精密称取瑞芬太尼10 mg和 GI97559
10 mg ,分别置于100 mL量瓶中 , 用 1 mmol·L -1盐酸适量 ,
超声溶解并定容至刻度作后贮备液 ,置 4℃冰箱保存至少可
稳定 2 周。临用时将贮备液用 1 mmol·L -1盐酸稀释至所需
浓度 ,即得瑞芬太尼标准液和内标稀释液。
2.2　缓冲液的配制 　精密称取磷酸氢二钠 71.63 g , 用
200 mL纯化水溶解 , 用3 mol·L-1磷酸溶液调节 pH 至7.4 ,
配制成 1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液。精密称取磷酸二氢钠
39 g ,用250 m L纯化水溶解 , 用3 mol·L-1磷酸溶液调节至
pH 3.0 , 配制成1 mol·L-1磷酸二氢钠溶液。
2.3　色谱条件 　色谱柱:Zorbax SB -CN(4.6 mm ×
250 mm , 5 μm)(安捷伦公司);检测波长:210 nm;柱温:
30℃;柱压:214 bar;流速:1.5 m L·min-1;进样量:80 μL;流
动相:由140 mL乙腈 , 280 mL甲醇和60 mL mol·L-1的磷酸
二氢钠缓冲液(pH 3)组成 , 置于2 L的量瓶中 ,用纯化水稀释
至刻度 ,用磷酸调 pH 至2.8 , 混匀后用0.45 μm尼龙网过滤。
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