全 文 ：性物 防 治通银 。H N : :, : 。 u o L 。 ; . L。。 cl ` L 。。 , To L 1。。 3 , 。 ( 4 ) 16 3~ l启色
萤光假单胞杆菌和芽抱杆菌防治苹果
叶 果 病 害 的 研 究
陈功友 郑铁 民 毛庆裕
(河南农业大学 , 郑州 4 5 0 0 0 2 ) (郑州市园艺场 , 郑州 4 50 0 0 2 )
〔摘要〕 萤光假单胞杆菌 P ` : 。 一 ` 和芽抱杆菌 B 。 2 。 一 ?及其混合制剂在平板上 , 对苹果轮纹病菌 、 炭疽病菌和斑点
落叶病菌都具一定拮抗作用 。 利福平标记发现 , P ` : 。 一 ` 和B , : 。 一 , 在苹果叶果面具有定殖能力 。 在苹果生育 前期 ,
间隔巧天 , 连续 3 次喷洒混合制剂 , 后期烂果率 、 病叶率分别下降 70 . 20 ~ 7 7 . 2 7 %和 3 9 . 6 2~ 6 9 . 3 1% , 百叶鲜重和
百果鲜重分别增加 2 9 . 9 0~ 4 4 . 8 3% 和 16 . 18 ~ 2 2 . 4 0% 。 离体果实接种试验表明 , 随着浸果时间的推移 , 混合制剂
抑制苹果炭疽病菌侵染和限制病情发展的能力下降 。
关键词 苹果叶果病害 萤光假单胞杆菌 芽抱杆菌
白R iu n e n提 出叶围 ( P h yl l 。 。 p h e r e ) 概念 9[ 〕以来 , 已有许多关于利用植物 体 表 有益细
菌P : e u d o m o , a : s PP . 和 B a e i l l u : 。 p p . 防治植物叶部病害 的 报 道〔“ ~ 4 , 7 , ” 〕。 苹 果褐 斑 病
〔M a r : 。 o n i n a e o r o n a r i a ( E l l . e t D a v i s ) D a v i s 」、 斑点病 (月 l t e r n a r i a 阴a l i R o b e r t s ) 、
轮纹病 ( P h夕: 0 110 : P o r a 力i r i e o l a N o s e ) 和炭疽病〔G l o拼 e r e l l a e i , 口u l a t a ( S t o n e m ) s e h r . t e
S P a ul d〕等叶果病害的危害 , 严重影响我国苹果生产 。 特别是烂果病菌具有 潜伏侵染现象 1[ 」,
依靠化防为主的防治措施控制叶果病害很难见效 。 并且 由于苯并咪哇的广泛使用 , 加重了交
链抱属真菌的为害〔10 〕。 利用有益微生物活菌制剂连续定殖苹果叶果而 , 以防治叶果病害尚缺
乏系统研究 。 本文旨在寻找叶果病害的生防菌类 , 对苹果园以生物控制病害的发生进行探索 。
材料与方法
一 、 材料
1
. 供试菌株 萤光假单胞杆菌 ( f l u o r e s e e n t p o e o d o m o n a : s P . ) ( p 4 2 o一 4 ) 和芽 抱 杆
菌 ( B a c s l l u : s p . ) ( B 5 2 6 一 7 ) 系 1 9 9 0一 2 9 9 1 年 从 系 统分析苹果叶果面附生物 区系中分离
到 。 2 . 叶果病菌 轮纹病菌 、 炭疽病菌和斑点病菌由河南农大植保系植病教研室提供 。 3 。供
试品种 18 年生的金冠和红星 。 4 . 试验地点 河南农大园 艺站和郑州市园艺场 。 5 . 培养基
常规 P D A和 K B培养基及 K B液 。
二 、 方法
1
. 平板拮抗试验 苹果叶果病 菌抱子悬浮液 (2 0一 30 个抱子 /低 倍视野 ) 和 P D A制成平
板 。 供试细菌菌株在 K B液中培养 72 小时 ( 1 80 转 /分 , 邹 ℃ ) , 将其用内径 6 m m钢环转接到平
板中央 , 重复 3 次 , 28 ℃下 72 小时后测定抑菌圈大小 。
2
. 细菌菌株在叶果面的定殖 抗利福平标记参照 G , , ls 方 法比〕 。 0 . o 15 m o l l/ 磷酸缓 冲液
( PH 7
.
5) 代替蒸馏水配制 K B液 。 95 %酒精作为溶解利福平溶剂 。 2粒利福平 (广州白云山制
注 : 本文承蒙河南农业大学喻璋教授指导和审阅 , 谨此谢忱 !
一 16 3一
药 厂 ) 加 0 1m l 9 5%酒精 , I N · N a o H调其 P H g . 5以上 , 利于利福平溶解 。 细菌过滤器过滤后
于 。 一 4 ℃冰箱中作 母 液备用 ( 30 0 户g /扭 1) .。 在 K B平板上逐步筛选出对 2 0 拜g/ 二 l利福平
具有抗性的 菌 株 。 将抗利福平的细菌菌株分别在 K B 液 (含利福平 2 0 0拼g / m l) 培养 72 小时
( 1 8 0转 /分 , 28 ℃ ) 后 , 按 等同混合制剂 l( os o f u / m l , 厂同 ) 于 6 月 1 1 日喷洒供试果园 ,
巧天和 30 天后 , 爪含 利福平2 0 群g加 I K B, 测定细菌苗株在叶果面的定殖 。 对照树喷清水 。
随机取 2 0片叶 (或 5个果 , 带回削皮 ) , 装入无菌三角瓶 吸5 0 0 m l) 称重 , 加入 15 o m l 无菌
水振荡 3 0分毛.卜, 取宾 i m l 按 1 0一 “ (果 1 0厂一 哎 ) 稀释 , 取稀释液 o . s m l力tl人涪养皿 , } , 。 再力f l l o m l
约 5。℃ K B制成平 板 , 28 ℃ 72 小时计数 , 并进行常规细菌学鉴定 。
3
. 田间防治试验 在供试果园随机取 3 株苹果树 , 于 6 月1 日 , 6 月2 6 日和 7 月 n 日喷
洒 P 4 2 0~ 4和 B 5 2 6 一 7混合制剂 , 采果前不再喷杀菌剂 。 对照树为正常防 治 树 ( 6 月21 日 、 6
月 1 1日 、 6 月2 6 日 、 7 月 1 8 日和 8 月17 日为喷杀菌剂时间 ) 。 采果期统计病果率 、 病叶率 、
百叶鲜重和百果鲜重 。 果实采收后 , 分别经混合制剂浸果 , 对照不浸果 , 室温硅窗袋 (农大
园艺系提供 ) 中贮存 30 天后调查病果率 。
4
. 离体果实接种试验 对照树健果采收后 , 随机选果作如下处理 : ( 1 ) 果实浸炭疽病
菌抱子悬浮液 ( 20 ~ 30 个抱子 /低倍视野 ) 30 秒钟 , 晾干后浸混合制 剂 30 秒 钟 , 接种病原菌
与浸混合制剂相间隔的时间分别为 0 、 24 、 48 、 72 小时 , 每处理 5 个果 , 重复 3 次 , 放于室
温下硅窗袋中 , 30 夭后调查病情 〔l 」; ( 2 ) 果实刺伤接种炭疽病菌抱子悬浮液 , 晾干后 , 浸
混合制剂 , 刺伤接种病原菌与浸混合制剂相间隔的时间分别为 o 、 24 、 48 、 72 小时 , 每果均
匀刺伤 6 个孔 , 每处理 5 个果 , 重复 3 次 。 处理果放室温下硅窗袋中 1 周 。 调查病指和病斑
大小 。 对照仅接炭疽病菌 , 不浸混合制剂 。
结果与分析
一 、 萤光假单胞杆菌和芽抱杆菌拮抗苹果叶果病菌的能力
平板拮抗试验表明 , P 4 2 0 , 4和B 5 2 6一 7对供试 3 种病菌都具一定 的拮抗 作 用 (表 1 ) 。
两种菌株同体积混合 , 对 3 种病菌仍有拮抗作用 , 比单一菌株 , 拮抗作用增强 。
表 1 萤光假单胞杆菌 P 4 2。一 4和芽抱杆菌 B 5 2 6一 7
平板上括抗苹果叶果病菌的能力
抑菌圈直径 c( m )
供试菌株
表 2 萤光假单胞杆菌 P 4 2。一 4和芽抱杆菌 B 5 2 6宁
在苹果叶果面的定殖能力
P 4 2 0
一连
B 5 2 6
一
7
轮纹病菌 炭疽病菌 斑点病菌
1
。
4 7 1
。
5 3 1
。
2 0
2 。 5 7 1
。
5 0 1
。
6 5
测定内容 数量 (
e
f
u
/ g鲜重 )
1 5天 3 0天
P 通20 一 4 + B 5 2 0一 7 1 。 8 7 2 。 13 2 一 0 7
二 、 萤光假单胞杆菌和芽抱杆菌在苹果
叶果面的定殖 `
一 抗 20 0拼g / m l 利福平标记 的 P 4 2 0 一 4和
B 5 2 6
一
7
, 混合喷洒于苹 果树上 , 15 天和 30
天后回收发现 , P 4 2 o一和 B 5 2 6一 7的数量都较
对照树为高 (表 2 ) , 说 明 两种细菌都能在
P 4 2 0
一
4
B 5 2 6
一
7
P 4 2 0
一
4
B 5 2 6
一
7
3
。
5 0 x 1 0 7
8
.
0 7 x 1 0
7
4
。匀4 x 1 0 6
8
.
8 2 x 1 0
`
。
0 1 x 1 0 .
。
18 x 1 0
e
。
4 3 X 1 0 5
。
9 5 x 1 0
`
处理对照叶面
P 4 2 0
一
4
B 5 2 6
一
7
P 42 0
一
4
B 5 2 6
一
7
2 。 3 4 x 1 0
?
1
.
0 3 x 1 0
7
5
。
8 0 x 1 0
5
2
。
0 5 x 1 0
5
9
。
8 6 x 1 0 5
3
。
3 2 x 1 0 5
1
。
4 2 x 1 0 6
6
。
9 0 x l口`
理处果
对照面
. . . 曰 . . . . . . . . . . . . . . , . . . . . 口. . 七 . 己. . . . ` . . . . . . 曰 . . . . 曰 . . . . 目卜二 .
~ ~ 匆 . 目 J . ` j ` . . . . . . . . . . . . . . 劝 . . 目 . . . . . . . .
苹果叶果面定殖 。 它们的数量随时间的推移而趋于和自然情况接近 , 但在 15 天内 , 它们还保
~ 1 6 4一
持着相当多的群体数量 。
三 、 萤光假单胞杆菌和芽抱杆菌田间防治苹果叶果病害效果
p4 2o
一4 不「 I5 B 2 6一 7连续 3 次喷洒于苹果树
上 , 和正常防治树比较 , 处理树病果率和病
叶率下降 , 百叶鲜重和百果鲜重增加 (表 3 ) ,
说明应用 P 4 2 O一 4和 B 5 2 6一 7 , 不仅防治 苹 果
叶果病害 , 而且提高苹果产量 。 处理树和对
照树果实采收后 , 经混合制剂处理 , 苹果烂
果率下 降 (表 4 ) , 说 明 p 4 2 o一 4 和 B 5 2 6 一 7
表 8 萤光假单胞杆菌 P 4 2O一 4和芽抱杆菌 B 5 2 6 -7
田间防治苹果叶果病害效果
地点 处理方式 病果率 病叶率 百叶鲜 百果鲜重
( % ) ( % ) 重 ( g ) ( k g )
农大园艺站 混合制剂 6 . 75
常规防治 2 2 . 6 5
1 0
。
4 0
8
。
0 7
郑州市园艺场混合制剂
常规防治
0
。
5
艺。 艺
2 4
。
8 6 4 7
。
5
8 1
。
0 0 33
。
3
1 9
。
4 0 4 7
。 6
3 2
。
1 3 2 6
。
2 6
1 0
。
9 4
9
。
17
处理采后果实 , 能够降低贮
存期苹果烂果病的发展 。
四 、 萤光假单胞杆菌和
芽抱杆菌对苹果炭疽病菌侵
染和病情发展的影响
刺伤接种苹果炭疽病菌
后 , 间隔不同时间浸混合制
剂 , 结果发现 , 混合制剂对
苹果炭疽病菌侵染和病情扩
展有抑制作用 咬表 6 ) 。 随
着浸果时间的推移 , 这种作
用降低 。 无刺伤接种也证明
了同一结果 , 说明在病菌侵
染过程中 , 喷混合制剂有明
显抑制作用 , 并能控制病情
发展 。
表 4 萤光假单胞杆菌 P召2 0 一 4和芽抱杆菌 B 5 2 6~ 7对贮存期苹果烂果病的影响
地点 州 吞 总果数 病果数 病果率 相对防效“ ’刁 (个 ) ( 个 ) (% ) (% )
处理树
对照树
浸混合制剂
不 浸
浸混合制剂
不 浸
浸混合制剂
不 浸
浸混合制剂
不 浸
1 2
3 2
4 6
5 5
1 1
。
8 8
3 2
。
9 9
4 6
。
0 0
5 2
。
8 9
6 3
。
9 9
1 3
。
0 3
,上Jn月纽八“nJ曰d.1月1
处理树
对照树
96
9 8
8 5
7工
。
0名
.
0 6
3 2
。
0 3
3 8
.
8 2
5 2
。
1 1
2 5
。
5 0
农大园艺站一州郑市场
表 5 萤光假单胞杆菌 P 4 2 o ~ 4和芽抱杆菌 B 5 2 c一 7对苹果炭疽病菌侵染
和病情发展的影响读藉 一兰兰置置流1 1 二香嗯黔 接种点数 发黔率 喂鼎圣
方 式
不刺伤
接种果数 病果率
(个 ) (% ) 病指
58
。
8 9
8 1
。
1 1
8 5
。
5 6
8 6
。
6 7
1 0 0
0
。
5 9 8 5
0
。
7 6 0 0
0
。
7 6 6 1
0 。 8 6 2 9
1
。
3 4 9 4
15 6 0 2 5
。
0 0
1 5 s q 5 5
。
0 0
15 1 0 0 7 0
。
00
15 1 0 0 8 5 0 0
1 5 10 0 9 6
。
6 7
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一又
024拐7CI
给论与讨论
lB
o
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a n 认为 , 理想的拮抗菌应具有营养竞争能力强 、 抗生物质产 量 高 、 生长速度快
及叶面适应性强等特点 。 萤光假单胞杆菌 P 4 2 0 一 4和芽抱杆菌 B 5 2 6 一 7 能够在苹 果 叶 果 面 定
殖并达到一定的种群密度 , 表明上述抗生的细菌菌株在苹果叶果面可能与叶果病菌有相似的
生态适应性 , 并成为病原菌的潜在竞争者 。 C lu l ” n等人认为 , 具有这种作用的 拮抗菌对专性
病原菌离体拮抗试验和田间防效有明显的相关性 。
植物叶果病害生防 , 通常通过两种途径实施 : 一是向植物体表引人大量生防菌 , 另是改
变体表生态环境 , 刺激引人的或潜在的生防菌群体数量增加 。 植物体在其一生中 , 叶面附生
物演替的总趋势是生育前期主要为细菌 , 后期则以酵母菌和丝 状 真菌为主 [ ` “ 〕。 已经明确 ,
植物生育前期 , 其体表的物理环境 、 化学不境有利于细菌的存在〔 7〕。 本文利用萤光假单胞杆
菌 P 4 2 O一 4和茅抱杆菌B 5 2 6 一 7混合制剂 , 在苹果生育前期连续喷洒 , 既防治了苹果叶 果病害 ,
一姊 5一
又提高了叶果的产量 。 这种产量的增加 , 可能是有益细菌对叶果面有害微生物抑制的结果 。
萤光假单胞杆菌 P 4 2。一 4和芽抱杆菌 B 5 2 6一 7混合制剂可以阻止苹果炭疽 病 ’菌 侵染点的建
立和限制病情的发展 。 在苹果生育前期 , 利用生防制剂代替化学药剂 , 对贮藏期烂果病害的
发展也有一定的抑制效果 。 上述作用在叶果病菌侵染前或侵染时更为有效 。 苹果主要烂果病
害为潜伏侵染病害 。 在叶果病菌大量侵染的前期 , 实施生物防治策略 , 是值得研究的领域 ,
有关 P 4 2 0 一 4和 B 5 2 6一 7更进一步 的分类和作用机制尚需探讨 。
参 考 文 献
〔 1 〕 曹若彬 , 等 . 1 9 8 6 . 果树病理学 。 上海 : 上海科学技术出版社 , 2 93 ~ 2 9 .4
[ 2 〕 B a k e r , K . F . e t a l . 29 7 ` . B i o l o g i e a l C o n t r o l o f P l a n t P a七h o g e n . F r e e m a n , S a n F r a n e i s e o , 3 一 23 7 .
[ s 〕 B la k e m a n , J . P . e 七 a l . 2 0 8 2 . P o t e n t i a l fo r b i o lo g i e a l e o n t r o l o f p l a n t d i s e a s e o n t l , e p h y l l o p la n e .
A n n u
.
R e v
.
P h y t
o p a t h o l
. ,
20 : 16 7
一
1 9 2
.
[ 4 〕 B I a k e m a n , J . P . 29 8 1 . M i e r o b i a l E e o l o盯 o f t h e P h y l lo p l a n e N o w Y o r k : A e a d e m i e P r e s , ,
3 8 9
一 3 9 1
。
[ 6 〕 G e e l s , F . P . e t a l . 19 5 5 . R e d u e t i o n o f y i e l d d e p r e s s i o n i n h i g h f r e q u e n e y p o t a t o e r o p p i n g 5 0 11
a
f七e r s e e d 七u b e r t r e a t m e n 七5 w i t h a n t a g o n i s t i e f l u o r e s e e n ` p 忿 e “ 己。 仍 o . a 召 s p p . 。 P h y ` o p a t h o l o g i -
s e h e Z e i t s e h r i f七, 10 8 ( 3 /减) : 2 0 7 一 2 1 4 -
〔 6 〕 H e y e , C . C . e t a l . 1 98 5 . A n t a g o n i s m o f A ` h e l￡a b o 仍 b a e ` : a a n d c h a e t o 。￡“ m 夕 l o b o 。 。哪 t o t五e
a P P le s e a b p
a t h o g e n
,
V e ” 名“ , ` a 玄” a e q“ a l 感5 . P h y t o p a t h o l . , 7 3 : 6 5 0一 6 5 4 .
[ 7 〕 K l u g , M . J . e 乞 a l . 1 9 8 4 . C u r r e n t P e r s p e e七i v e i n M i e r o b i a l E e o lo g y . W a s h i n g 七o n D . C . : A m e r i -
e a 几 S O e i e ` y f o r M i e r o bi o l o g y , 3 6 2 一 3 6 , .
仁 s 〕 M o u n t , M . S . e t a l . 19 8 2 . P h y t o p a毛h o g e n i e P r o k a r y o t 。 , . N e w Y o r k : A e a d e m i e P r e s s , 3 0 7一 3 33 .
〔 。 〕 R u i n e n , J . 29 6 1 . T h e P h y l l o s p h e r e 1. A n e e o lo g i e a l l y n o g le e七e d m i l i e u . P la n 七 5 0 1 1, 15 : 8 1 一 1 0 9 .
[ 1 0 〕 W i n d e l s , C . E . e ` a l . 19 8 5 . B i o lo g i e a l C o n t r o l o n t h e P h y l l o p la n e . M i n n e s o 七a : T h e A m e r i e a n
Ph y t o p a t h o l o g i e a l S o e i e t y
,
6
一
8 2
.
EX P E R IM EN T S O N T H E C O N T R O L O F A P P L E L E A F A N D F R U I T
_
D I SE A S E S
W I T H F L U O R E SC EN T 尸S E U D O泪Or 脚河5 S P .
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