全 文 ：现代科学仪器
Modern Scientific Instruments102
第4期2010年8月
No.8 Aug . 2010
液相色谱串联质谱法测定谷物中二乙酸镳草镰刀菌烯醇
陈素娟 郑彦婕
（深圳市计量质量检测研究院 深圳 518131）
摘 要 采用内标法，建立了液相色谱串联质谱法（LC/MS-MS）ESI+ 测定谷物中的二乙酸镳草镰刀菌烯醇的方法。对比了
液液萃取与 Micostep 226、Micostep 225、C18 3 种 SPE 柱对样品前处理的效果，其中 Micostep 225 SPE 柱净化样品具有较好的回收率。
标准工作曲线范围在 0.1 ～ 100.0 ng/mL 之间，检出限为 0.02 ng/mL。对大米粉、面粉与玉米淀粉二乙酸镳草镰刀菌烯醇浓度为
1.0 ～ 10.0 ng/g 合成样品的回收率在 70.1% ～ 82.7% 之间，相对标准偏差在 6.7% ～ 9.5% 之间。该方法快速、简单、灵敏度高。
关键词 二乙酸镳草镰刀菌烯醇；LC/MS-MS；谷物
中图分类号 O657.7
Determination of 4,15-Diacetoxyscirpenol in Cereals by Liquid Chromatography-tandem
Mass Spectrometry
Chen Sujuan,Zheng Yanjie
(Shenzhen Academy of Metrology and Quality Inspection, Shenzhen 518131, China)
Abstract A internal standard LC/MS-MS(±ESI) method was developed for the determination of
4,15-diacetoxyscirpenol in cereals. Four cleau-up procedures including Liquid-Liquid extraction, Micostep 226 SPE,
Micostep 225 SPE and C18 SPE were applied to clean up the cereals extract and the better recovery was got through
Micostep 225 SPE. The established method was linear in the range of 0.1~100.0 ng/mL, The detection limit of the method
was 0.02 ng/mL, the recoveries of 2 levels were from 70.1% to 82.7%, the RSDs were from 6.7% to 9.5%. The method is
fast, simple and sensitive for analysis.
Key words 4,15-Diacetoxyscirpenol;LC/MS-MS;Cereals
收稿日期：2010-03-30
作者简介：陈素娟（1983-），女，工程师，本科，从事食品安全检测工作
二 乙 酸 镳 草 镰 刀 菌 烯 醇（4,15-diacetoxy-
scirpenol, DAS）与 T-2、HT-2 毒素属于单端孢
多霉烯毒素，主要由镳草镰刀菌和木贼镰刀菌产生。
DAS 化学结构见图 1。DAS 主要污染谷物和饲料，
在饲料中检出率没有呕吐毒素高，但它对动物的毒
性要高于呕吐毒素。它的毒性与 T-2 毒素有相似之
处，损害动物骨髓等造血器官，白细胞持续减少，心
肌病变出血。此外，它还可使脑与中枢神经细胞变
性，淋巴结、睾丸与胸腺受损害。发生胃肠炎，眼和
体腔水肿以及动物抗体减少等 [1]。
图 1 DAS 化学结构图
Fig.1 Chemical structure of DAS
目前对 DAS 的检测方法有：薄层色谱法 [2]
(TLC)、GC[3]、GC-MS[4]、LC [5] 、LC-MS[6]、
ELASA[7]、超临界色谱法 [8]（SFC）等。其中薄层色
谱法与 ELASA 虽然灵敏较高但重复性较差，为半定
量方法。而GC、GC-MS、LC法的灵敏度不高，且多
需要衍生化，操作步骤繁琐。近几年来，LC/MS-MS
法发展很快，特别是在食品中农药、兽药残留的检测
已经有很广泛的应用，在食品中真菌毒素的检测也被
很多学者提出。对 DAS 的前处理方法有：凝胶渗透
色谱法、SPE 法、SPME法、液 -液萃取法等。
1 实验部分
1.1 标准品
二乙酸镳草镰刀菌烯醇：10 μg/mL 乙腈溶液
（sigma-aldrich 公司，德国）；
Zearalanone：≥ 98%（sigma-aldrich 公司，美
国）。
1.2 仪器
C18 SPE 柱：3 mL（Supleco 公司，美国）；
Micosep 226 SPE 柱：（Romerlabs 公司，新加
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坡）；
Micosep 225 SPE 柱：（Romerlabs 公司，新加
坡）；
超高压液相色谱串联质谱联用仪：Acquity
UPLC-Quattro Premier XE（Waters，美国）。
1.3 仪器条件
色谱条件：色谱柱 Acquity UPLC BEH C18 2.1
mm×50 mm×1.7 μm 柱温：30℃；
流动相：A 10 mmol/L 乙酸铵溶液，B 乙腈；流
速 0.3 mL/min；梯度：A 75% 在 0 ～ 2.5 min 内线
性变化为 25%。
质谱条件：
离子源：ESI±；离子温度 105℃；毛细管电压：
2.5 kV；锥孔电压 40 kV；去溶剂温度：350℃；去溶剂
气流量 500 L/hr；碰撞气流量：1.1 mL/min。
质量分析器：低端分辨率 LF Lens1：13 V；高端
分辨率 LF Lens1：13 V；质谱参数见表 1：
表 1 质谱参数
Table 1 Parameters of mass spectrum
化合物 母离子 定量离子 碰撞能量(eV) 定性离子 碰撞能量(eV)
DAS 384(M+NH4) + 307 10 247 15
Zea(内标) 319(M-H) - 275 20 205 25
1.4 实验方法
1.4.1 提取
称取已粉碎的样品 10g，加入一定浓度内标物
Zearalanone（Zea），漩涡振荡，加入乙腈 - 水溶液
（84/16，v/v）50 mL 超声萃取 30.0 min，过滤得到
提取液。
1.4.2 净化
液液萃取：在提取液中加入 10 mL 1 mol/L
HCl 溶液振荡均匀，再加入 60 mL 乙酸铅溶液振荡
使蛋白质充分沉淀。将样品溶液过滤，采用 20 mL
二氯甲烷萃取 2 次后，合并萃取液，45℃减压蒸馏至
干，甲醇 - 水溶液（50/50，v/v）定容至 1.0 mL，经
0.45μm滤膜过滤后上机测定。
Micosep 226 SPE 柱净化：取 10 mL 提取液经
过 Micosep 226 SPE 柱过滤，取滤液 5.0 mL，45℃
旋转蒸发至干，甲醇 - 水溶液（50/50，v/v）定容至
1.0 mL，经 0.45μm滤膜过滤后上机测定。
Micosep 225 SPE 柱净化：取 10 mL 提取液经
过 Micosep 225 SPE 柱过滤，取滤液 5.0 mL，45 ℃
旋转蒸发至干，甲醇 - 水溶液（50/50，v/v）定容至
1.0 mL，经 0.45μm滤膜过滤后上机测定。
C18 SPE 柱净化：将提取液浓缩至 1mL 左右，
采用 5 mL 甲醇 - 水溶液（50/50，v/v）溶解，C18
SPE 柱在采用甲醇活化后，将以上溶液通过C18 SPE
柱，用 5 mL 水淋洗，再用 10 mL 乙腈洗脱，洗脱
速度 4 mL/min，收集洗脱液后于 45℃旋转蒸发至
干，甲醇 - 水溶液（50/50，v/v）定容至 1.0 mL，经
0.45μm滤膜过滤后上机测定。
2 结果与讨论
2.1 样品提取溶剂的选择
谷物食品中含有大量的淀粉、蛋白质与糖类，样
品前处理的难度较高。本文采用了不同配比的乙腈-
水溶液对样品进行提取， 结果见表 2。由添加回收
率比较实验发现，采用乙腈 - 水体积比为 84/16 提
取时回收率最高。当体积比为 50/50 时，有部分淀
粉、蛋白质与糖类溶解在提取液中，干扰物多，回收
率低。而采用 100% 乙腈提取，提取液中干扰物较
少，但回收率较低。综合考虑，本实验选择乙腈 - 水
（84/16，v/v）作为提取溶液。
表 2 提取溶剂优化
Table 2 Comparison of five solvent compositions for extracting
乙腈-水（v/v） 50/50 80/20 84/16 90/10 100
回收率 60.0 72.5 81.5 72.3 59.8
2.2 净化条件的优化
本实验比较了液 - 液萃取与 Micosep 226、
Micosep 225、C18 3 种固相萃取柱的净化效果，其结
果见图 2。
图 2 6 种前处理方法回收率比较
1 液液萃取法 ；2 C18 净化；3 Micosep 226 净化；
4 提取液酸化后Micosep 226 净化；5 Micosep 225 净化；6提取
液酸化后Micosep 225 净化 DAS 浓度为 10 ng/mL
Fig.2 Comparison of six clean-up procedures
1 liquid-liquid extraction; 2 C18 SPE; 3 Micosep 226
SPE；4 Micosep 226 SPE after acidification extract;
5 Mi cosep 225 SPE; 6 Micosep 225 SPE after acidIfication
extract DAS 10 ng/mL
由图 2 可见，采用 C18 柱对提取液进行净化，
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基体干扰较大，回收率不高。采用 Micosep 226 与
225 柱对提取液进行净化后，样品基体干扰小，回收
率较高。对提取液采用甲酸酸化后（pH=2），再采用
Micosep 225 柱净化，回收率最高。从 DAS 的结构
上看，该化合物具有一定的极性，调节提取液的 pH
有利于DAS在萃取柱上的保留，提高回收率。因此，
本实验采用对提取液酸化后（pH=2）采用 Micosep
225 柱 净化。
2.3 方法线性范围、检出限
配制 DAS 浓度分别为 0.02 ～ 200.0 ng/mL
之间，采用内标法，以分析物与内标物峰面积比进行
定量，分别得到 DAS 的线性方程、相关系数、线性范
围、检出限，标准样品色谱图见图 3。
方法的线性范围在 0.1 ～ 100.0 ng/mL，检出
限为 0.02 ng/mL，工作曲线为 y=0.994+0.338x，
相关系数为 0.9967，满足痕量分析的要求。
2.4 方法的回收率与精密度
本研究选用了大米粉、面粉、玉米淀粉等 3 种
不同的样品，制备成 2 个浓度水平的合成样品，按以
上优化的条件进行回收率与精密度实验。由表 3 可
见，方法的回收率在 70.1% ～ 82.7% 之间，RSD 在
6.7% ～ 9.5% 之间，满足痕量分析的要求。
表 3 回收率及精密度
Table 3 Recoveries and RSD
样品 合成样品浓度（ng/g） 内标浓度（ng/g）
回收率
（%）n=3
精密度
（%）n=3
大米
10.0 20.0 80.2 6.7
1.0 20.0 71.2 8.9
面粉
10.0 20.0 81.0 7.2
1.0 20.0 70.1 9.3
玉米淀粉
10.0 20.0 82.7 6.9
1.0 20.0 71.3 9.5
图 3 DAS 标准样品溶液MRM色谱图
Fig. 3 MRM chromatography of DAS standard solution
2.5 样品分析
本实验共分析了深圳市场上销售的 18 个大米、
28 个小麦粉（其中 20 个是在城郊市场散装出售，8
个是大型超级市场出售的袋装面粉）样品，所有样品
均未检出二乙酸镳草镰刀菌烯醇 DAS。可见，谷物
中DAS的暴露水平较低。
3 结论
建立了超高压液相色谱－串联四极杆质谱联
用技术 LC/MS-MS 测定谷物食品中 DAS 的方
法。选择了 Zearalanone 作为内标物，优化了样品的
前处理条件，其优化的条件是样品经过 84/16（v/
v）乙腈 / 水提取，酸化后采用 Micostep 225SPE
柱净化萃取液，浓缩后进样。方法的线性范围在
0.1 ～ 100.0ng/mL 之间，检出限为 0.02 ng/mL。
对合成不同浓度的大米、面粉与玉米淀粉样品的回
收率在 70.1% ～ 82.7% 之间，RSD 在 6.7% ～ 9.5%
之间，满足痕量分析的要求。对深圳市场出售的大
米及小麦粉中的 DAS 含量水平进行调查，均未发现
DAS污染。
参考文献
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