全 文 ：GansuNongye
甘肃农业 2011年第02期(总295期)
摘 要：目的：分析裂叶牵牛子黑、白二丑电泳图谱差异，为
其人工栽培和鉴定提供依据。方法：利用十二烷基磺酸纳－聚丙
烯酰胺凝胶电泳（SDS- PAGE）技术对牵牛子盐溶蛋白进行分析鉴
别。结果与结论：裂叶牵牛黑、白二丑蛋白质含量及纯度存在差
异，可为今后的牵牛子栽培和鉴定工作提供依据。
关键词：黑丑；白丑；蛋白质电泳
牵牛子Semen Pharbitidis是常用中药，始载于《名医别
录》，药典收载的正品为旋花科植物裂叶牵牛Pharbitis nil
(L.) Choisy及圆叶牵牛Puarbitis purpurea (L.) Voigt 的
干燥成熟的种子[1]。裂叶牵牛为一年生缠绕性草质藤本，全株密
被粗硬毛；叶互生，叶片卵状心形，常3裂；花冠漏斗状，白色、蓝
紫色或紫红色；顶端5浅裂蒴果球形，3室，每室含2枚种子；种
子卵状三棱形，灰黑色或淡黄白色，表面灰黑色者为黑丑，淡黄
白色者为白丑。具有泻水通便、清痰、涤饮杀虫花积等功效。用于
水肿胀痛、二便不通、痰饮积聚、气逆喘咳、虫积腹痛等[2]，近现
代用药方面常因其功效相似而合用，并不区分。
随着人们生活水平的提高和保健意识的增强，天然药物在
疾病预防，治疗和保健中的作用越来越重要。但被视为农副产品
的中药材品种选育未能纳入农作物种质选育推广计划，各种药
材只种不选，自繁自用，中药材种质退化混杂问题严重，与农作
物种质资源的保护和选育状况相比较，中药材资源的保护投入
不足，中药材品种选育工作严重滞后。目前，中药材GAP建设中
过多强调地道大宗品种的大田栽培技术和病虫害防治，优良种
质选育和优良品种培育基本处于空白状态[3]。而牵牛子全国各
地均有野生和栽培，大多都自产自销，品种和质量问题更为严
重。资料显示，近年来，有关牵牛子的报道多局限于成分研究[4]，
[5]，也有部分研究牵牛子及其伪品鉴别[6]，但有关牵牛子黑丑和
白丑栽培情况差异尚无报道。
蛋白质的电泳分离是重要的生药化学分离纯化技术之一。
电泳是指带电粒子在电场力的作用下，向着与某一电荷相反的
电极移动的现象。SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳
方式[7]。特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质的分子量。蛋
白质是生命活动的体现者，它在生物种属之间就不会是同质的。
生物学家已经证明，蛋白质序列是种的特征。利用蛋白质种的不
同来鉴别可以达到质的鉴别。此取裂叶牵牛的种子作为研究的
对象，通过电泳技术得到黑白二丑的不同谱带，探索黑丑和白丑
之间蛋白质组成和含量的区别，进而确定黑丑和白丑在遗传学
上的不同，给以后裂叶牵牛的栽培和鉴定方面提供一些依据。
一、材料与方法
㈠材料 裂叶牵牛子黑丑，白丑（市购，后在实验室栽培确
定其种质）。
㈡方法
第一，试剂配制[7]。一是凝胶贮备液。丙烯酰胺29.2克，亚
甲基双丙烯酰胺0.8克，加重蒸水至100毫升，4℃冰箱可保存
一个月。二是分离胶缓冲液。1.5摩尔/升Tris-HCl，pH8.8。
18.15克Tris，加入约80毫升重蒸水，用1摩尔/升调pH值到
8.8，用重蒸水定容至最终体积100摩尔，4℃冰箱保存备用。三
是浓缩胶缓冲液。0.5摩尔/升Tris-HCl，pH6.8。6克Tris，加
入约60毫升重蒸水，用1摩尔/升HCl调pH值到6.8，用重蒸
水定容至最终体积100毫升，4℃冰箱保存备用。四是10%SDS，
室温保存。五是电极缓冲液，pH8.3，Tris3克，甘氨酸14.4克，
SDS1.0克，重蒸水至1000毫升,，4℃冰箱保存。六是10%过硫酸
铵：此溶液需现用现配。七是1.5%琼脂：0.75克琼脂粉加50毫
升重蒸水，煮沸，凝固前使用。八是染色液：0.25考马斯亮蓝
G-250，66.7毫升甲醇，7毫升冰醋酸，重蒸水稀释至200毫升。
九是脱色液：66.7毫升甲醇，7毫升冰醋酸，重蒸水稀释至200
毫升。
第二，实验步骤。一是电泳槽的安装。凝胶模子是由两块玻
璃中间用两胶条隔开而构成的，均匀的涂上凡士林。固定安装电
泳槽时，玻璃板用热的去污剂刷洗或洗液浸泡，然后用热水冲
洗，再用蒸馏水冲洗，直立于烘箱内烘干。勿用手指接触洗净的
玻璃板面，将两块玻璃板垂直的装入两个半槽之间，用铁夹固
定，注意在夹时两边用力均匀。电泳槽装好后，将溶化的1.5%琼
脂趁热注入电泳槽平板玻璃底部，以防漏液。二是分离胶的配制
（凝胶浓度为9%）：在100毫升的烧杯中依次按顺序加入重蒸水
4.35毫升、分离胶缓冲液2.5毫升、10%SDS0.1毫升、凝胶贮备
液 3.0 毫升、10﹪过硫酸铵 50 微升、TEMED5 微升。由于加入
TEMED后凝胶就开始聚合，故应立即混匀混合液，然后小心注入
裂叶牵牛子黑白二丑的蛋白质电泳
白 亮
（甘肃省酒泉市瓜州县瓜州一中，甘肃 瓜州 736100）
专题调研
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DOI:10.15979/j.cnki.cn62-1104/f.2011.02.010
GansuNongye
甘肃农业 2011年第02期(总295期)
电泳槽的玻璃板间，留出约3厘米左右的空间以灌注浓缩胶。室
温下静置20分钟左右，待分离胶聚合完全后，吸去多余的水。三
是浓缩胶的配置和灌制（6%的浓缩胶）：重蒸水2.92毫升、0.5
摩尔/升Tris-HCl 1.25毫升、 0%SDS0.05毫升、凝胶储备液
1.0毫升、10%过硫酸胺25微升、TEMED5微升，在烧杯中混匀，灌
注在分离胶上，插入梳子，室温静置，在日光灯下聚合1小时以
上。四是样品的制备：称取白丑、黑丑各0.2克，加1.2摩尔/升
的盐溶液3毫升在冰浴条件下研磨，使蛋白质充分溶于盐溶液
后离心20分钟（3500转/分），取上清液备用。五是电泳。待浓
缩胶完全聚合后，取出梳子，吸去多余的水，用微量注射器按号
向加样孔内点样；在电泳槽中加电极缓冲液（上槽缓冲液须没过
点样孔，并在上槽缓冲液中加3天～4天溴酚蓝指示剂），接上
电泳仪，打开开关，恒流18毫安，待蓝色的溴酚蓝移至下端1厘
米～1.5厘米时，关上电源停止电泳。六是染色和脱色：将胶取
出置于染色缸中染色1小时，换上脱色液，定时更换直至背景清
晰为止。
三、结果与结论
从图1中可以看出牵牛子黑、白二丑电泳图谱差异明显。我
们按颜色深浅将谱带分为3级：涂黑区域表示深色的一级带，为
主要鉴别区；斜线区域表示颜色较浅的二级带；打点区表示颜色
最浅的三级带。
1、2、3、4、7、8、9、10为黑白二丑的共有带，这也说明其来源
的相似性，可以为以后的牵牛子的图谱鉴定提供依据。
5、6条带为黑丑独有，说明黑、白丑在蛋白质种类及含量上
存在一定差异，且4、8号带黑丑较白丑深，说明黑丑蛋白质纯度
较白丑高，证明黑丑种子品质优于白丑种子，可以为以后牵牛子
的栽培提供依据。
三、讨论
十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是常用
的蛋白质分离方法之一，已经用来分离和鉴定蛋白质和多肽超
过30年。用电泳方法鉴定的种子类中药已有很多，如苦杏仁、桃
仁、女贞子等。其优点在于效率高、灵敏度高、可重复性好、可以
得到预制胶以及它的简洁性，因此被种子检验部门广泛采用。本
实验做过多次重复，所得电泳图谱稳定可靠。
现代用药方面将两者以功效相同论之，但由于其在遗传学
上的某些不同，很可能导致在其成份组成或成份含量上有些不
同，进而导致其功效也略有不同。此问题仅为推测，对其真实性
还有待进一步研究。
参考文献
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研究[ J ]．中国现代中药，2008，⑵．
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[ 7] 王应斌，穆仙丽，宿永成．PAGE在中药材鉴定中的应用
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（责任编辑 王 斌）
专题调研
图 1
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