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土贝母皂甙作为阴道杀精子剂的实验研究



全 文 :第7 卷 第 3 期 西 安 医 科 大 学 学 报 V ol .7 , N 。 . 3
1 9 8 6 年 9 月 JO U R N A L O F X I ’ A N M E D I C A L U N I V E R S I T Y S e p t e m b e r , 19 8 e
土贝母皂试作为阴道杀
精子剂的实验研究
苏 华 指导教师 : 郭仁舆
( 组织学与胚胎学教研室 )
提要 : 本实验证明 , 土贝毋 总皂试及其 A 、 D 成分均具 有较强 的杀精子作用 .
其瞬间杀精有效 浓度分别为 0 . 04 肠 、 0 . 04 肠及。 . 03 肠 . 其杀精机理主要是破坏精子
的生物膜 系统 . 用固定明胶底物薄膜法浏定单个精子 项体酶 变化的结果表明 , 三者
在浓度为。 . 05 肠时均可显著 降低单个精子项体酶的活性 .
外用避孕方法虽然已有三千多 年 的 历
史 ’ , 但是 目前所用的杀精有效成分多 是 一
些人工合成的药物 , 在临床使用中都还存在
着一些副作用 、 就是 目前使用最多 、 较为满意
的非离子型表面活性剂阴道杀精子剂也还存
在着阴道分泌物增多 ,下腹痛等副作用卜 ’ .
因此 继续寻找新的高效 、 安全的阴道 杀档
子避孕药仍是一个值得重视的课题 .
我国人民在长期的实践中积累了人量具
有抗生育作用的中草药验方 , 从中草药中提
取杀精有效成分 , 不仅能够为避孕药的研究
开创新的道路 , 而且可以发展祖国医药学 .
基于这一观点 , 我们对土贝母等八种中草药
进行了杀精作用 的 筛 选 , 发 现 土 贝 母
( B
o l b o s t e m m a P a n i e u l a t u fn ( M
a x i n )
F ra q ue nt ) 具有较强的杀精子作用 。 经 过
初 步的分离 、 提取和杀精实验证明 , 其杀精
有效成分是皂试类物质 , 主要是 一 L贝母总皂
俄及其 A 、 D成分 。 本研究 旨在通过体外实
验来确定土 贝母总皂试及其 A 、 D 成分的杀
精效力 , 并阐明它们的杀精机理 .
材料和方法
一 、 药物和标本
土 贝母总皂俄及其 A 、 D 成分系本校第
二附属医院药厂分离 、 提取和供给的 . 试验
药液均用生理盐水配制而成 。
精液标本取 自健康成年男性 , 禁欲 4 一
6 天 , 用按摩法获得 . 精液常规检查要求活
动精子百分率 > 70 肠 , 活动力 良好 , 精子密
度为 6 0 ~ 15 0 只 10 `个 / m l .
二 、 杀精效力的检 .mJ
杀精实验按 国 际 计 划 生 育 墓 金 会
( I P P F ) 认可的杀精实验方法 进 行 ` . 于
l m l不同浓度的药液中分别 加 入 。 . 2 m l 精
液 , 立即混匀 , 在显微镜下观察 , 并用秒表
记录时间 , 以全部精子失活为终点 得出各
种药物在瞬间 ( 1 分钟内 ) 使全部精子失活
的最低有效浓度 , 并 比较各种成分的杀精效
力 . 对照组采用同一人份精液标本 , 以生理
盐水代替上述药液进行观察 .
将经药液作用后不活动的精子用生理盐
水洗去药液 , 观察精子 的 活 动 力 是 否 能
恢复 .
三 、 用 明胶底物薄膜法检侧对精子项体
酶 ( A e r o s i n ) 的影响
( 一 ) 明胶膜的制作
将40 8 m g 干明胶放入 12 m l蒸馏水 中 , 浸
泡 15 分钟后 , 在 4 。℃水浴中使明胶溶解 . 再将
明胶溶浪 升温 至 5 0℃ . 币确量取 o . l m l明 胶
溶液 , 滴在清洁的载玻片上 ,制成 4 5 X 2 0 m m 2
的薄膜 , 随即平放于 4 ℃冰箱内 3 一 5 分
幻 6 西 安 医 朴 大 学 学 技 宁卷
及 H一0 6。型 电子显微镜观察并照像 .
结 果
一 、 土 贝毋总皂截及其 A 、 D成分的杀
精效力 :
经用 IP P F 方法反复实验证明 , 土 贝 母
总皂贰及其 A 、 D 成分在试管中均具有较强
的杀精子作用 (表 1 ) . 总皂试与 A 成分的瞬
间杀精浓度相同 , D成分虽然较低 , 但 t检验
证明 , 它与前两者没有显著差异 ( P > 0 . 2 ) .
衰 1 土贝母总皂试及其 A 、 O 成
分的杀精效力
药 液 瞬间杀精浓度 ( 终 )
总皂贰 0 . 03 巧 土0 . 01 3
A成分 0 . 0 3 sT 士 0 。 013
D成分 0 . 030 4土0 . 以 6
由于经三种成分作用后不活动的精子用
生理盐水洗去药液后活动力并未能恢复 , 说
明三种成分对精子的损 伤 作 用 都 是 不 可
逆的 。
二 、 土贝毋 总皂戒 及其 A 、 D成分对单
个精子顶体醉的影响
本实验采用明胶底物 薄膜法对单个精子
顶体酶的活性测定的结果表明 , 对照组精子
顶体酶反应强而均匀 , 90 %以上的精子呈现阳
性反应 , 反应区最大直径可达 42 协m (图 l ) .
经土贝母总皂试及其 A 、 D 成 分 作 用 后 ,
不仅顶体酶反应阳性的精子数目明显减少 ,
反应区直径也显著减小 , 说明三种成分对单
个精子顶体酶活性有显著影响 . 作用 最强的
是 D成分 , 其次是 A 成分 , 总皂试作用最弱
( 表 2 , 图 2 ) 。
衰 2 土贝母总皂贰及X A 、 O成
分对顶体阵活性的形晌
对照组 总皂试 A成分 D成分
一05
钟 . 置室温下干燥 18小时 . 将已千燥的明胶膜
用 0 . 0 5肠一戊二醛固定 , 0 . 5肠胎盼兰滴染 。
染过的明胶膜在室温下至 少干燥 l 小时 。
( 二 ) 精子的处理
用 o . I M 、 p H 7 . 4的磷酸盐缓冲液 冲 洗
精子 , 并调整精子浓度为 50 x l 。 `个 / m l .
于。 . 0 5肠土贝母总皂试及其 A 、 D成分药液
各 l m l中分别加入精子悬液。 . 2m l , 室温下
孵育 5 分钟 , 离心 ( 1。。 o转 / 分 ) 10 分钟 , 弃
去上清液 , 将精子重新悬浮于。 . I M 、 p H 7 . 4
的磷酸盐缓冲液 1 m l中 . 将一滴 处 理 过的
精子悬液滴于明胶膜上 , 用 另一 载 玻 片 象
推血片那样将精子涂在其上 , 在 37 ℃恒温箱
内孵育 3 小时后取出 , 空气干燥 , 中性树胶
封固 .
( 三 ) 结果判定
光镜观察 , 凡精子头部周围出现 白色亮
区者为阳性反应 . 每张明胶膜上计数 1 0 个精
子 , 求出阳性反应率 , 并用测微尺在每张明
胶膜上测量 20 个阳性反应区的直径 , 计算出
每组的平均值 。
四 、 透针电子显微镜的样品 制 作 及 观
察 :
分别用浓度为 l 肠 、 0 . 1帕及。 . 0 5 肠 的
土贝母总皂俄及其 A 、 D 成 分 与 精 液 按
I P P F方法混合 , 孵育 10 分钟 , 观察药 液 对
人精子超微结构的影响 . 并用浓度为 0 . 05 肠
的土贝母总皂试及其 A 成分与精子作用 , 分
别制成作用 时间为 1 、 3 、 5 、 10 、 2 0和 3 0
分钟的标本 , 观察精子结构被破坏的规律 .
将经过上述处理的精子悬液离心 ( 1 0 0。
转 / 分 ) 10 分钟 , 弃去上清液 , 将沉淀的精
子用预冷过的 2 . 5肠戊二醛和 2 肠多聚 甲 醛
混合固定液固定 2 小时 , 磷酸盐 缓 冲 液 浸
洗 , 1 肠饿酸后固定 1 . 5小时 , 梯 度酒精 脱
水 , 70 肠乙醇饱合醋酸铀块染 . 国产还氧树
脂 6 18 包埋 . L K B一 V型超薄切片机切片 .
5 0肠乙醇饱合酷酸铀和 2 %柠檬酸铅片染各
15 分钟 , D X B : 一 12 型 国产透射 电子显微镜
阳性率 ( 多 ) .
反应区直径 ( 卜。 ) .
90
.
6 3 0
.
0 2 2
.
6 1 9
3 0
.
7 1 7
.
0 8
.
9 4
注 : a . 各实验组与对照组间差 异 有高 度 显 著性
( P < 0
.
0 1 )
, 各实脸组之间差异也有显著性 ( P < 0 . 05) .
b
。 各组间差异有高度显老性 ( P < 0 . 01 ) .
3 期 土贝毋 皂吠作为阴道杀精子荆的实脸研究 22 7
三 、 透针 电子显微镜观察 :
对照组精子具备公认的正常精子的超微
结构卜 ` (图 3 ) . 经土贝母总皂试及其 A 、
D 成分作用后 , 精子的质膜受到 严 重 的 损
害 . 几乎所有精子的质膜均残缺 不 全 或 缺
失 , 顶体亦有不卜d程度受损 . 中段线粒体 内
膜和晴模糊或消失 , 基质电子密 度 明 显 降
低 , 在浓度为 1 肠时 , 甚至核膜也 有 损 伤
( 图 4 ) . 各浓度药液的作用没有本质的差
别 , 只是程度有所不同 . 在精子超微 结构变
化中有两点是值得注 意的 : ( l ) 核后环处
常有膜状结构残留 : ( 2 ) 线粒体外膜几乎
未见受损 , 在观察药物对精子作用的动力学
变化时发现 , 核后环及精子尾部主段和末段
的质膜对土贝母皂贰损伤作用的 抵 抗 力 较
强 。
讨 论
目前常用的阴道杀精剂是壬苯醇醚 。 岩
原繁雄等对其杀精效力测定的结果表明其最
低杀精有效浓度为 0 . 06 . 肠 “ . 菇烯基苯氧聚
乙氧乙醇也是公认的较理 想的外用杀精剂 ,
其最低有效浓度为 0 . 13 肠 “ 。 而本实验所测得
的土 贝母总皂试及其 A 、 D 成分的瞬 间杀精
有效浓度分别为 0 . 04 肠 、 0 . 04 肠和 0 . 03 肠 .
尽管各人所采用的实验方法和条 件 不 尽 相
同 , 但杀精有效浓度多以药物 与精液混合后
的最低有效浓度表示 . 所 以 , 从以上数据中
不难看出 , 土 贝母总皂贰及其 A 、 D成分均
具有较强的杀精作用 .
与其它表面活性剂 ’ . ` ” 相似 , 土 贝母皂
试 土要是影响精子的生物膜系统 , 使精子的
质膜 、 顶体及线粒体受损 . 但精 子的核后环
部分及尾部上 、 末段部分的质膜对土 贝以 皂
试损 伤作用的抵抗力较强 . 当上 贝母 曾、 它贰
及其 A 、 D 成分浓度为 0 . 0 5 肠时 , 与精子作用
一分钟 , 就 可使顶体前方 、 颈段及中段的质
膜缺失 , 但核后环及尾部主段和末段仍有膜
状结构残留 。 竺土当药物浓度高达 1 肠 lJ寸,
核后环处仍有膜状结构残留 . 许多学者在研
究其它表面活性剂对精子超微结构的影响时
也发现类似情况 ` ’ 。 其原因可能与精子质膜
本身的区域性差异和各部质膜 与其深面胞质
成分的关系不同有关 .
现已证明 , 精子的质膜存在石区域性的
羞异 ` 2 . Y a n a g i m a e h i ” 用氧化胶 体 铁 标
记技术对 7种哺乳类动物精子质膜表面 酸 性
负离子残根的分 布进行了测定 . 结果表明 ,
精子尾部所带的负离子残根较头部多 . 用单
克隆抗体技术 ’ `及外源性凝集素 ’ 5对精子表
面研究的结果表明 , 精子质膜表面的蛋 白质
和糖残基的分布也存在着区域性 的 差 异 .
K o e h l e r用冷冻蚀刻法研究了人精子头部的
超微结构 ` “ . 证明在不同部位的质膜上 , 膜
颗粒的分布也是不同的 . 由此可见 , 精子质
膜不仅在功能上 , 而且在结构上和化学组成
上都存在着区域性的差异 .
从表面活性 剂作用后精子质膜丢失的过
程可以看出 , 除了质膜本身的区 域 性 差 异
外 , 质膜与其深面胞质的关系也 与其对损伤
作用的抵抗力有关 . 位于顶体前方的质膜通
常形成一些小的皱褶 , 与其 深面胞质的结合
较疏松 , 颈部质膜也没有什么支持物 ` 7 . 囚
此 , 这些部位的质膜很易受损 . 而 在 核 后
环部分 , 质膜 与其深面的一层板状致密物质
紧贴 5 ` “ ,使得这部分质膜不易膨胀和脱落 .
在精子尾部 , 质膜受到其深面纤 维 鞘 的 支
持 , 所以不易受损 ’ “ .
本研究还发现 , 精子线粒体外膜对土贝
母总 皂试及其 A 、 D 成分损伤作用的抵抗力
也较强 . 其他学者在研究猪 胆 汁 ` ’ 及 N P一 9 ’
对精 子超微结构影响时也发现 类 似 情 况 。
这 ` ’ J能与线粒体外膜特殊的 化学结构有关 ,
即哺孔类功物精不线粒体外膜不仅脂质含量
极微 , 而且具有为二硫化物硬化了的结构蛋
自质 “ “ , 所以抗损伤能力较强 .
由于皂试类多能 与一些大分 子 醇 或 酚
类 , 包括 自然界存在的 山醉 , 如胆固醇类结
乏 2后 香 安 医 科 大 学 李 报
合生成分子化合物 , 低浓度皂试水 溶液就能
破坏红细胞 , 产生溶血作用 , 这很可能与皂
试和胆固醇结合形成分子化合物 的 性 质 有
关 2 ’ . 由此推断 , 土贝母总皂贰及其 A 、 D
成分对精子质膜的破坏作用可能是 由于皂试
与精子质膜上的胆固醇结合形成分 子 化 合
物 , 从而改变了质膜正常分子结构所致 .
用 明胶底物薄膜法测定精子顶体酶的活
性 , 具有用生化方法所不能 比拟的优点 . 首
先方法简单 , 不需特殊的底物和复杂的技术
操作 , 其次 , 可用于动态观察单个精子顶体
酶的活性 2 2 . 由于这种反应可被 已知的顶体
酶抑$lJ 剂 T L C K ( N一 a一 p一 t o s y l一 1 一
l y s i n e e h l o r o m e t h y l k e t o n e ) 完 全 抑
制 , 故可 籍以确定精子头部周围的明胶溶解
区是由于顶体酶作用的结果 2 3 。 本实验采用
此法对精子顶体酶活性测定的结果表明 , 土
贝母总皂成及其 A 、 D 成分均可明显降低单
个精子顶体酶活性 . 结合透射 电镜观察所见
分析 , 其降低单个精子顶体酶活性的原 因主
要是由于精子质膜及顶体前膜被破坏 , 顶体
酶不同程度丢失所致 . 但也不能排除其对酶
活性的直接抑制作用 .
( 本文 图见插页第 2 、 3 页 )
今 考 文 献
1
.
H a w k i n , D F a n d E l d e r M G
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H u m a n F e r t i -
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A
n U s e r A e e e -
P t a b i li t y S t u d y o f V a ` i n a l S P e r m i e i d e、
i n C o m b i n a t i o n w i t il B a r r i e r M e th o d s o r
a o I U C D
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110
-
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M e C o n n e l l R F
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S p e e i a l R e q u i r e m e n t s f o r
T e s t i n g S p e r m i e i d e s
.
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P h a r m a e o lo g i e a l
M o d e l s i n C o n t r a e e p t iv e D e v e l o Pm e n t一 A n i -
也 a l 下o x i e i ty & S i d e 一 E f f e e t s i n M a n ” .
E d i t e d b了 B r i g g , HH & D i e : f a l u 、 y F . W卜10
R e s e a r c h a n d T r a in i n g C e n t r e o n H u m a n
Re p r o d u c t io o
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K a r o l i sk a I n , t i t u t e d
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1 94T ; 3 7 3一 3 86
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u n e t i o n a l
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m a n
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A
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第 7卷 第 3 期 鸯 安 医 科 大 学 学 才丈 夕0 1 . 了 , N o . 3
1 9 8 6 年 9 月 JO U R N A L O F X I ’ A N M E D I C A L U N IV E R S I T Y S p t e m b e r , 19 s a
西安地区沙门氏菌流行情况及药敏试验结果 ( 摘要 )
刘宝琼 陈延梅 贺 香 杜仙娥 王香玲
( 第二附属医院检验科细菌室 )
根据我院近五年来沙 门氏菌分离结果看
出 , 近年来沙 门氏菌的流行 , 主要以 鼠伤寒
占首位 ( 8 8 . 8 呱 ) , 乙型副伤寒占3 . 4 肠 , 伤
寒杆菌占 5 . 6 肠、 甲型 副伤寒与德尔卑沙 门氏
菌各 占 1 . 1 肠。
通过药敏 试验看出鼠伤寒杆菌首选药物
为先锋霉素者 81 . 。肠 , 其 次 为 多 粘 菌 素
为 5 4 . 4 肠 , 庆大霉素为 4 9 . 4 肠 , 链 霉 素 为
2 6
.
6 肠 , 氨节青霉素为 3 0 . 4 肠 .
我室于 1 9 81 ~ 1 9 8 5年共分离出沙门氏菌
89 株 , 自血液分出 2 株 , 骨髓 2 株 , 大便 85
株 . 均由我院临床科室从疑似菌痢 、 八i化不
良 、 腹痛 、 腹泻 、 发高烧等患者分出 . 患者似
菌痢 、 实非菌痢 , 大多是沙门氏菌感染 . 沙 门
氏菌中以 鼠伤寒为多 , 因其感染力强 , 传播 迅
速 , 病情较重 , 且对多种药物耐药 , 故应高
度警惕及时作人便培养及药敏试验 , 帮助确
诊和恰当选用抗菌药物 治疗 .
骨髓与血液培养 , 采血 5 m l , 于 肝 没
肉汤中增菌 5 天 , 分离鉴别培养 . 再行革兰氏
U l t
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.
R
e s
.
1 9 72 : 3 9 : 5 2-0 5 3 9
1 7
.
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2
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1 05
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一 4 9 7
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39 : 71 7一 1T 9
1.9 郭仁臾 ,等 . 猪胆汁作为阴道杀精子药的研究 . 我
国卫生部及W H O人类生殖研究发展和培训 特 别
规划处主办的 “男性生育调节学术交流会” 论文
摘要集 19 84
20
.
P a l l in i v , e t a l ; A P e e u l i a n C y s t e i n e 一 R i e il
染色镜检 , 选阴性短杆菌 , 生化反应符合沙
门氏菌者用上海生物制品所沙 门氏菌属血清
凝集 . 先用 A一 F多价因子血清 , 再以 O ` 囚
子血清初步鉴定 O 抗原 , 再以 H i及 H : , : 因
子血清 ( 双相 ) 确定该菌 .
大便培养以新鲜 、 脓血粘液便 . 接种 5 5
及去氧胆酸盐基培养 , 按上述常规程序进行 .
近几年来 , 国内外报道 鼠伤寒沙门氏菌
有明显上升 , 本文报道与此相似 . 一般认为
其感染播散与伤寒相 似 , 除少数只能在动物
中传播外均能使人与动物致病 。 恢复期患者
排 菌时间长 ; 耐药菌株普遍 , 这 可能是发病
在国内外 普遍升高的 主要原囚 .
通过试验看出 , 本菌极易变异 , 菌落由
S一R , 血清学凝集呈阴性 , 经数代传 代 ,
血清反应转为阳性 . 不少菌株产生 H变异 ,
初 是 O血清凝集阳性 , H血清阴性 . 传代 诱
导后 , 均获得 H血清反应阳性 . 实践中用软
琼脂斜面传代增强抗原性 , 才明显凝集 .
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1 983
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3期 西 安 医 科 大 学 学 报 3 13
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P O N IN S S UE D AS I N T A RV A GIN AL S P E RM AT O I C DL A
A GE N T S
S U H Ua Gu o Re nyu
( De P r at 爪e nt of H艺s t o一 E m br y o忿 og y )
T i hs e x P e r i me nt has p r v oe d t hat b ol bs ot e m ms a oP onl a n nd i t s e os nt i t u e nt s Aa nd D ha ve
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L i n T i a n N i u Y a n g d o u
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l e s s a t o m i e a b s o r P t i o n s P e e t r o P I一o t o m e t r y u s i n g t l e g r a P il i t e f u r n a e e a t o m i Z e r i n C h i n e s e
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A D A M A N T I N O M A O F L O N G B O N E S
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T h i s P a P e r r e P o r t s 2 e a s e s a d a 一
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T h e p a t h o l o g i e a l e h a r a e t e r i s t i e s o f t幻 e t u m o r a r e : 1 ) b a s a l一 e e l l e a r e i -
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3 ) t u b u l a r ( o f v a r y i n g s i z e s )
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