全 文 ：民 族 医 药
Ethnomedicine and Ethnopharmacy
苗药一支箭乙醇提取物对乙酸型胃溃疡大鼠 EGF表达的影响
毛令飞
湖北省潜江市中心医院，湖北 潜江 433100
【摘 要】 目的:研究一支箭乙醇提取物对乙酸型胃溃疡大鼠的作用，并初步探讨其促进溃疡愈合的机制。方法:建立大鼠乙酸型
胃溃疡模型，观察一支箭乙醇提取物对大鼠乙酸型胃溃疡的作用;采用免疫组化染色法，观察一支箭乙醇提取物对大鼠乙酸型胃溃疡粘膜
EGF表达的影响。结果:EEO能明显促进大鼠乙酸型胃溃疡的愈合，溃疡愈合率可达到 62. 5%;EEO能明显促进大鼠乙酸型胃溃疡边缘组
织 EGF的表达。结论:EEO能明显促进大鼠乙酸型胃溃疡的愈合，其机制可能与溃疡边缘组织 EGF的表达有关。
【关键词】 一支箭乙醇提取物;乙酸型胃溃疡;溃疡愈合;表皮生长因子
【中图分类号】Ｒ285. 5 【文献标识码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2010)23 － 0008 － 02
Effects of EEO on the expression of EGF of acetic acid － induced gastric ulcer in Ｒats
MAO Lingfei
(The Central Hospital Of Qianjiang City，Qianjiang 433100，China)
Abstract:Objective:To explore the effects and its mechanism of Extract from Ophioglossum vulgatum L． ． Methods:The anti
－ ulcer effects of EEO were evaluated using acetic acid erosion and the expression of EGF were detected by immunohistochemistry
(SP)． Ｒesults:EEO significantly accelerated healing of the gastric ulcer induced by acetic acid． The cure rate of the gastric ulcer
was 62. 5% by high dose of EEO． EEO significantly increased the epidermal growth factor EGF of para － ulcer mucosa tissue． Conclu-
sion:EEO significantly improve the quality of ulcer healing and accelerate the ulcer healing by suppressing the expression of EGF．
Key words:ethanol extract from Alpinia Oxyphylla Miq． fruit;acetic acid － induced gastric ulcer;ulcer healing;epidermal
growth factor
苗药一支箭是瓶尔小草科植物瓶尔小草 (Ophioglossum
vulgatum L．)的带根植物。分布于云南 、四川、湖北、贵
州和西藏。现代医学研究发现一支箭提取物能明显抑制盐
酸 /乙醇引起的大鼠胃损伤［1］。但一支箭 50% 乙醇提取物
抗大鼠乙酸型胃溃疡作用及其机制在国内外还未见报道。
本研究通过大鼠乙酸型胃溃疡模型，观察一支箭 50% 乙醇
提取物抗实验性胃溃疡作用，并初步探讨了其作用机制。
1 材料和方法
1. 1 材料
1. 1. 1 动物 SPF 级昆明种小鼠，体重 202g，雌雄各半;
SPF 级 SD 大鼠，体重 180 ± 20g，雌雄各半，合格证号:
SCXK (粤)2003 － 0002，均由广东省实验动物中心提供。
受试动物雌雄分开普通饮食喂养 5d 后开始实验，控制室温
为 222℃，湿度为 55 ± 15%。
1. 1. 2 药物和试剂
一支箭乙醇提取物 (ethanol extract from Ophioglossum
vulgatum L.，EEO) ，由我院中药制剂室提供 (10. 0kg一支
箭通过 50%乙醇提取得到干浸膏 3. 3 kg) ，用 0. 5%羧甲基
纤维素钠 (CMCC)配制为相应浓度。多聚甲醛，购自 Flu-
ka公司，用前以 0. 1% mol·L －1磷酸缓冲液配制成 4%溶
液;西咪替丁 (批号:091231) ，海南制药厂有限公司;兔
抗大鼠 epidermal growth factor (EGF)多克隆抗体，武汉博
士德生物工程有限公司;SP试剂盒 (批号:62212511) ;北
京中杉金桥生物技术有限公司;DAB 显色试剂盒 (批号:
76126163) ;北京中杉金桥生物技术有限公司。
1. 1. 3 主要仪器及设备
K15 低温离心机，美国 Sigma 公司;HM340 石蜡切片
机，德国莱卡公司;BX50 显微镜，日本奥林巴斯;HMIAS
－ 2000 医学病理分析系统，同济医科大学千屏影像工程
公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 大鼠乙酸型胃溃疡模型制备［3］
SPF级 SD大鼠 48 只，随机分为 6 组，雌雄各半，每
组 8 只即正常对照组、模型对照组 (5g·L －1 CMC － Na，
20mL· kg －1)、EEO 组 (100mg· kg －1、300mg· kg －1、
900mg·kg －1)及西咪替丁组 (200mg·kg －1)。除正常组
外，各组大鼠禁食 24h，在 3%戊巴比妥钠 (1. 0ml·kg －1)
腹腔注射麻醉下打开腹腔，自剑突向下沿腹中线剪开约
2cm，将胃移出腹腔，用微量注射器将 20μl30%的乙酸注射
至胃窦部前壁浆膜下近肌层处，待出现直径约 3mm 半透明
的白斑后，将胃送还腹腔，以大网膜包裹，缝合。术后第
三天开始各给药组大鼠按剂量灌胃给药，模型组给予灌胃
等体积的 0. 5% CMC － Na，qd，共 14d。
1. 2. 2 观察指标
治疗 14d后，将已禁食 12h 大鼠处死，破腹，结扎贲
门和幽门、离断，取出全胃。胃内注射 1%甲醛 8ml，并将
全胃置于 1%甲醛中固定 30min 后，沿胃大弯剪开，冲洗，
滤纸吸干后铺开，以游标卡尺测量溃疡最大长径，以及垂
直于最大长径的最大宽径。计算溃疡指数 =溃疡最大长径
×最大宽径。并计算各给药组的溃疡治愈率。然后在各组
大鼠溃疡部位 (正常组的相同部位)剪取约 0. 5cm × 1. 0cm
胃粘膜组织块，用 10%中性甲醛固定 24h，按照常规脱水，
沿纵轴石蜡包埋，5μm 厚度连续切片，进行 HE 染色和
EGF的免疫组化染色。免疫组化染色采用 SP法，操作具体
按照说明书进行。利用 HMIAS － 2000 医学病理分析系统进
行免疫组化分析，在 10 × 40 倍镜下，每张切片随机选取 5
个视野作图像分析，以象素点长 0. 389μm，154. 6μm ×
115. 5μm测量窗下测量阳性细胞面积百分比及其平均积分
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光密度，取均值。
1. 2. 3 统计学处理
采用 SPSS10. 0 统计软件，所有实验数据以均值 ±标准
差 (± s)表示，不同组间比较采用单因素方差分析，与对
照组比较采用 dunnett检验，P ＜ 0. 05 为显著性差异。
2 结果
2. 1 EEO对乙酸型胃溃疡的作用
各组大鼠 (除正常组外)腺胃部均可见一直径不等的
圆形或椭圆形溃疡，深至肌层，其上被覆白苔，溃疡底较
污秽，周围粘膜环堤样水肿隆起。HE染色镜下可见模型组
溃疡处粘膜缺损，溃疡底部凹陷，大量的炎性细胞和坏死
渗出物聚集，各治疗组均可见不同程度的溃疡愈合，溃疡
较平坦，不同程度肉芽组织形成，溃疡灶表面不同程度的
新生上皮覆盖。
模型组溃疡指数为 29. 155. 08，与模型组比较，EEO
中、高剂量组和西咪替丁组均能有效治疗实验性乙酸烧灼
型胃溃疡 (P ＜ 0. 01) ，溃疡治愈率分别为 26. 2%，
50. 5%，60. 6%。见表 1。
表 1 EEO对大鼠乙酸烧灼型胃溃疡的影响 (s，n = 8)
Group Dose (mg·kg －1) The ulcer Index / Cure rate /%
Normal － － －
Model － 29. 15 5. 08 －
EEO 100. 0 mg·kg －1 20. 37 4. 42# 26. 2
300. 0 mg·kg －1 15. 26 3. 09## 50. 5
900. 0 mg·kg －1 12. 18 2. 11## 60. 6
Cim 200. 0 mg·kg －1 13. 56 3. 28## 48. 8
# P ＜ 0. 05 vs Model group;## P ＜ 0. 01 vs Model group
2. 2 EEO对大鼠乙酸型胃溃疡胃粘膜 EGF表达的影响
正常组大鼠 EGF的表达为弱阳性，定位于胞浆，主要
集中在胃腺颈部，阳性表达细胞以胃粘膜壁细胞、颈部细
胞为主。模型组大鼠 EGF 的表达较正常组强，定位于胞
浆，主要集中在溃疡边缘组织的胃腺颈部及基底部的壁细
胞、颈部细胞。而 EEO组及 Cim组 EGF的表达较强，表达
部位与模型组相似。免疫组化高倍镜下照片见照片 1。
照片 1 大鼠乙酸型胃溃疡胃粘膜组织 EGF表达的影响
(免疫组化 SP法，DAB染色， × 400)
A为正常对照组;B为模型对照组;C为 EEO大剂量组
模型组的阳性细胞面积百分比及积分光密度分别为
11. 41 ± 3. 13%和 1. 79 ± 0. 73，与正常组比较显著升高 (P
＜ 0. 01)。与模型组比较，EEO各剂量组及 Cim组的阳性细
胞面积百分比均显著增多 (P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ，且 EEO
组具有剂量依赖性 (P ＜ 0. 05)。与模型组比较，EEO 中、
高剂量组及 Cim组的积分光密度均明显增强 (P ＜ 0. 05，P
＜ 0. 01) ，且 EEO 组具有剂量依赖性 (P ＜ 0. 05)。与 Cim
组比较，EEO高剂量组 EGF表达阳性细胞面积百分比及积
分光密度均要显著高于 Cim组 (P ＜ 0. 01)。结果见表 2。
表 2 EEO对大鼠乙酸型胃溃疡胃粘膜 EGF表达的影响 (s，n = 8)
Group Dose Percentage of acreage (%)Integral optic density
Normal － 6. 13 ± 1. 21 0. 81 ± 0. 24
Model － 11. 41 ± 3. 13＊＊ 1. 99 ± 0. 83＊＊
EEO 100mg·kg －1 17. 07 ± 3. 23# 1. 53 ± 0. 21
300mg·kg －1 21. 37 ± 3. 81## 2. 21 ± 0. 59##
900mg·kg －1 26. 18 ± 4. 90## 3. 21 ± 0. 72##
Cim 200mg·kg －1 21. 47 ± 5. 82## 2. 91 ± 0. 79#
＊＊P ＜ 0. 01 ，vs normal group;# P ＜ 0. 05，## P ＜ 0. 01 vs mod-
el group
3 讨论
由于乙酸型大鼠 GU模型具有形态类似于临床 GU，病
变持续时间长，其修复过程与人的胃溃疡类似［4］，因此比
较适合于药物治疗胃溃疡的疗效评价，以及药理作用机制
的研究。胃溃疡的愈合是一个非常复杂的过程，包括细胞
移行、分化、增殖和细胞基质形成及新生血管生成等，多
个细胞因子参与了这一过程。EGF 是主要存在于颌下腺、
十二指肠 Brunner腺颌胰腺中，是一种含有 53 个氨基酸的
单链多肽［5］。现已证实 EGF是一种具有抑制胃酸分泌、促
进上皮细胞增殖，组织修复及细胞保护作用的内源性物质，
在保护胃粘膜免受损伤因子破坏、维持胃肠粘膜完整性方
面起到非常重要的作用。在小鼠实验性胃溃疡模型中，在
溃疡发生的第 2 ～ 4 天，即有 EGFＲmＲNA 表达，4 天后有
EGF过度表达。大鼠乙酸胃溃疡自愈过程中，EGF 的表达
发生规律性的变化，溃疡边缘组织表达比正常组明显增高，
坏死组织无表达，肉芽组织、瘢痕组织少有表达，溃疡的
早期表达不明显，溃疡的愈合期则表达明显［6］。
本实验采用大鼠乙酸烧灼型胃溃疡模型，结果显示
EEO能明显促进溃疡的愈合。本研究通过免疫组化法，探
讨了 EEO对大鼠乙酸烧灼型胃溃疡胃粘膜组织 EGF表达的
影响。在治疗 14 天后，模型组大鼠 EGF的表达较正常组明
显增强，EGF定位于胞浆，主要集中在溃疡边缘组织的胃
腺颈部及基底部的壁细胞、颈部细胞，与文献报道一致［6］。
胃腺颈部及基底部是胃粘膜上皮细胞增殖的部位。因此提
示，EEO组能显著增加溃疡边缘组织 EGF表达。提示 EEO
可能通过促进溃疡边缘粘膜组织细胞的分化、增殖来促进
溃疡的修复和愈合。
参考文献
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(收稿日期:2010. 08. 23)
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