全 文 ：现代预防医学 2010 年第 37 卷第 15 期 Modern Preventive Medicine， 2010， Vol.37， NO.15
文章编号： 1003-8507（2010）15-2916-03 中图分类号： R562.2 + 5 文献标识码： B 【疾病预防控制】
望春花挥发油对哮喘小鼠气道炎症的影响
李寅超 1， 赵宜红 1， 张红敏 2， 沈映君 3
摘要： ［ 目的 ］ 探讨望春花挥发油 （the Volatile Oil of Magnolia biondii pamp.） 对 BALB ／ c 小鼠过敏性哮喘气道炎
症的作用。 ［ 方法 ］ 健康 BALB ／ c 小鼠 50 只， 雌雄兼用， 体重 （20 ± 2） g， 按照体重、 性别分层随机分为正常对照
（A） 组、 模型对照 （B） 组、 阳性对照 （C） 组、 望春花挥发油大剂量 （D） 组和望春花挥发油小剂量 （E） 组。 A 组以
生理盐水代替抗原进行致敏， B、 C、 D、 E 组每鼠于第 1、 14、 28 d 分 3 次腹腔注射 （ip） 含卵白蛋白 （OVA） 和福氏
完全佐剂的生理盐水溶液致敏， 1 次 ／ d、 持续 14 d 雾化 OVA 激发， 建立哮喘气道炎症模型。 首次激发当日开始灌胃给
药 （ig）， 1 次 ／ d， 连续 14 d。 于末次激发 24 h 后处置动物， 采制标本与指标检测， 观察望春花挥发油对其支气管肺泡
灌洗液 （BALF） 中白细胞 （WBC） 数与分类计数、 蛋白含量、 肺组织病理改变及肺细支气管黏膜浸润的嗜酸性粒细胞
（Eos） 数的影响。 ［ 结果 ］ （1） D 组小鼠肺 BALF 中 Eos 比值为 （3.17 ± 1.33） %、 蛋白含量为 （0.34 ± 0.06） ×109
g ／ L， 分别与 B 组的 Eos 比值和蛋白含量 ［（4.17 ± 1.47） %、 （0.58 ± 0.15） ×109 g ／ L］ 比较， 差异均有统计学意义 （P
均﹤0.05）； D 组小鼠肺细支气管黏膜组织中 Eos 数 （个 ／视野） 为 （8.50 ± 1.87）， 与 B 组（12.16 ± 2.14） 比较， 差异均
有统计学意义 （P﹤0.05）； E 组动物 Lym%呈下降趋势， 但与 B 组比较差异无统计学意义 （P﹥0.05）， 是否具有免疫抑
制效应， 尚待进一步研究； E 组小鼠其余指标与 B 组比较差异无统计学意义 （P 均﹥0.05）。 （2） 镜下观， 与 B 组比较，
D 组小鼠细支气管上皮和基底膜变性明显减轻， 固有层内小静脉、 毛细血管无明显扩张， 黏膜增厚不明显， 细支气管黏
膜和管腔内的炎细胞明显减少。 ［ 结论 ］ 望春花挥发油可明显抑制实验性 BALB ／ c 小鼠哮喘气道浸润 Eos 细胞数， 减
轻哮喘气道的炎症反应。
关键词： 望春花挥发油； 哮喘晚期相反应； 气道炎症； 嗜酸性粒细胞
支气管哮喘 （brounchial asthma， 哮喘） 是由多种细胞和
细胞成分参与的气道慢性炎症性疾患 ［1］， 就发病机制而言， 哮
喘存在着相继的两个时相的病理反应 ， 即哮喘早期相反应
（early asthmatic reaction， EAR） 和晚期相反应 （late asthmati鄄
creaction， LAR）［1，2］。 EAR 主要由气道肥大细胞脱颗粒所介导；
LAR 则主要由气道 Eos 的炎性浸润为特征。 目前在科研中广
泛应用的 OVA 致敏和激发豚鼠哮喘模型更接近于 EAR 的特
点， 典型表现是 ： 几乎在吸入过敏原的同时立即发生反应 ，
15～30 min 达到高峰， 在 2 h 左右恢复正常， 为肥大细胞所介
导。 笔者前期［3］采用 OVA 致敏和激发豚鼠制作了以 EAR 为特
征的哮喘模型， 研究了望春花挥发油对哮喘气道炎症的影响，
结果显示望春花挥发油可明显延长致敏动物的引喘潜伏期， 减
轻哮喘气道炎症早期相反应的症状， 缓解哮喘气道的 EAR 炎
症反应， 初步证实望春花挥发油具有较显著的防治 EAR 炎症
反应的作用。 为进一步了解望春花挥发油对哮喘 LAR 反应的
影响， 本课题组参考程晓明报道的应用 １OVA 多次反复致敏和
激发 BALB ／ c 小鼠的方法［4，5］并做改进， 制作了哮喘气道炎症动
物模型， 探讨望春花挥发油对 BALB ／ c 小鼠过敏性气道炎症的
影响。
1 材料与方法
1.1 材料
健康 BALB ／ c 小鼠 （清洁级 ） 50 只 ， 体重 （20 ± 2） g，
作者简介： 李寅超 （1969-）， 男， 博士， 副教授， 研究方向： 抗炎免疫
作者单位： 1.郑州大学药学院， 郑州， 450001； 2.河南省人民医院； 3.
成都中医药大学
（the Volatile Oil of Magnolia biondii pamp.） 由河南省南召华龙
辛夷开发有限公司提供， 棕色瓶密封， 4℃冰箱保存， 临用时
以 0.5%Tween-80 配制 。 卵白蛋白 （OVA）、 福氏完全佐剂 ，
均为 Sigma 公司产品。 醋酸地塞米松片， 规格 0.75 mg ／片， 批
号： 080506， 浙江仙琚制药股份有限公司。 F980 型超声雾化
器， 镇江富林医疗设备有限公司。 全自动血液细胞分析仪， 美
国贝克曼仪器公司。 Mias-2000 型图像分析仪， 四川大学图像
图形研究所。 721 分光光度计， 上海第二分析仪器厂。
1.2 方法
1.2.1 模型的建立和用药 健康 BALB ／ c 小鼠 50 只， 雌雄各
半， 体重 （20 ± 2） g， 观察适应 3 d 后按照体重、 性别分层随
机分为正常对照 （A） 组、 模型对照 （B） 组、 阳性对照 （C）
组、 望春花挥发油大剂量 （D） 组和望春花挥发油小剂量 （E）
组， 10 只 ／组。 A 组于第 1、 14、 28 d 分 3 次以生理盐水代替
抗原致敏； 其余各组每鼠于第 1、 14、 28 d 分 3 次 ip 含 OVA
20 mg 与福氏完全佐剂 10 μl 的生理盐水溶液 0.1 ml 致敏。 于
末次致敏 24 h 后， A 组以生理盐水代替抗原进行雾化激发 ，
其余各组每鼠以 1％OVA 生理盐水雾化激发 （1 次 ／ d， 每次 20
min， 持续 14 d）， 以小鼠出现明显的呼吸急促、 腹肌收缩及口
唇紫绀等， 作为哮喘模型建立的指标。 首次激发当日开始给
药， 给药剂量 A、 B 组每鼠 ig 生理盐水 20 ml ／ kg， C 组 ig 地塞
米松 0.84 mg ／ kg， D、 E 组分别 ig 望春花挥发油 0.18、 0.09
ml ／ kg。 给药容量为 20 ml ／ kg。 以上各组小鼠均于每次激发前
1 h 给药， 1 次 ／ d， 持续给药 14 d。
1.2.2 BALF 的采制与检测 于末次激发后 24 h 时摘眼球放血
处死小鼠， 暴露气管及肺脏， 钳夹右肺肺门处， 随即以一小导
管行气管插管灌洗左肺， 灌入 4℃生理盐水 1 ml （抽吸 2 次）
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现代预防医学 2010 年第 37 卷第 15 期 Modern Preventive Medicine， 2010， Vol.37， NO.15
2.2 各组小鼠细支气管组织形态学观察和图像分析检测结果
光镜下可见， A 组小鼠支气管黏膜上皮细胞排列整齐， 黏
膜下、 管腔内未见 Eos 等炎细胞浸润。 B 组小鼠细支气管上皮
细胞变性， 基膜明显增厚且形态不规则， 黏膜厚度增加。 支气
管黏膜上皮和固有层以及血管周围有较多的以 Eos 为主的炎性
细胞浸润， 肺间质及肺泡腔内也可见 Eos （Eos 胞浆红染， 胞
核呈分叶状， 以两叶为主）。 C 组小鼠细支气管上皮变性明显
减轻， 基底结构破坏减轻， 固有层内小静脉、 毛细血管无明显
扩张， 组织间隙扩大不明显， 黏膜增厚不明显； 细支气管黏膜
和管腔内炎细胞减少。 D 组小鼠细支气管上皮变性明显减轻，
基底结构破坏减轻， 固有层内小静脉、 毛细血管无明显扩张，
黏膜增厚不明显； 细支气管黏膜和管腔内的 Eos 等炎细胞明显
减少。 见相应的病理切片显微照片 1～4。
注 ： 照片 1， 正常肺组织 （HE×400）； 照片 2， B 组肺组织 （HE×
400）； 照片 3， C 组肺组织 （HE×400）； 照片 4， D 组肺组织 （HE×
400）
图像分析结果显示， A 组小鼠气道未见 Eos 浸润， B、 C、
D、 E 各造模组小鼠哮喘气道均见不同程度的 Eos 浸润。 与 B
组比较， C 组和 D 组小鼠细支气管黏膜内、 腔内浸润的 Eos 数
显著下降 （P﹤0.01 或 0.05）； E 组小鼠气道 Eos 数与 B 组比较
差异无统计学意义 （P﹥0.05）， 见表 2。
3 讨论
支气管哮喘的发病机制复杂， 近 ３０ 年的研究使我们对哮
喘的认识不断更新。 目前医学界比较一致的观点认为， 支气管
哮喘分为 EAR 和 LAR， LAR 对气道炎、 气道高反应性及气道
重塑作用较 EAR 更为重要， 且治疗更为复杂。 LAR 是在 EAR
之后约 3-7h 或更长的时间后发生的气道持续收缩及痉挛， 可
持续数日。 在 LAR 的气道炎症病理过程中， 以气道 Eos 的浸
润募集和激活为其核心环节。 因此， 抑制 Eos 向气道募集、 消
除气道炎症， 对防治哮喘具有关键性意义。
本研究采用 BALB ／ c 小鼠在第 1、 14、 28 d 分 3 次 ip OVA
联合福氏完全佐剂的方法致敏后， 改用 OVA 雾化激发两周。
虽然在激发初期未见明显的咳嗽、 腹肌挛缩等 LAR 症状， 但
（下转第 2919 页）
×2 次， 每次灌注后立即回吸， 回收率达 80%以上。 合并两次
BALF， 留取约 1 ml 做 WBC 总数与分类计数， 余经 400 r ／ ｍｉｎ
10 min 离心后， 取上清液 0.2 ml 用 721 分光光度计比色测定
其吸光度 （A）， 所得值乘以 0.025 g ／ L 即蛋白含量［3］。
1.2.3 组织病理学检查 每鼠经肺泡灌洗后， 摘取右肺中叶，
10%中性甲醛固定 48 h， 逐级酒精脱水， 二甲苯透明， 石蜡包
埋， 常规切片， HE 染色， 行病理组织学观察。
1.2.4 细支气管黏膜 Eos 计数 取 HE 染色片， 用 Mias-2000
型图像分析仪采集显微镜下图像， 在中倍 （×200） 视野下， 选
择细支气管腔内和黏膜层内 Eos 最明显的细支气管 5 个， 然后
在高倍视野 （400×） 下计数细支气管腔内、 黏膜内 Eos 的数，
判断 Eos 浸润程度。
1.3 统计学处理
所有数据以 （x ± s） 表示， 所有指标采用 SPSS11.0 统计
软件进行， 定量指标用 One-Way ANOAY 方差分析， 两组间比
较采用 LSD 及 S-N-K 分析。
2 结果
2.1 各组小鼠 BALF中蛋白含量、 WBC计数与分类计数的比较
与 A 组比较， B、 C、 D、 E 各造模组小鼠 BALF 中的蛋白
含量、 WBC 总数和 Eos%均显著升高， 差异均有统计学意义
（P﹤0.05 或 0.01）。 C 组小鼠 BALF 中蛋白含量、 WBC 总数和
Eos%及 Lym%下降 ， 与 B 组比较差异均有统计学意义 （P﹤
0.05 或﹤0.01）； D 组小鼠 BALF 中 Eos%和蛋白含量下降， 与
B 组比较差异均有统计学意义 （P 均﹤0.05）， Lym%呈下降趋
势， 差异无统计学意义 （P﹥0.05）； E 组动物 Lym%呈下降趋
势， 但与 B 组比较差异无统计学意义 （P﹥0.05）， 是否望春花
挥发油具有免疫抑制效应， 尚待进一步研究。 见表 1。
照片 1 （HE 染色， 400×） 照片 2 （HE 染色， 400×）
照片 3 （HE 染色， 400×） 照片 4 （HE 染色， 400×）
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小鼠在激发后期则出现明显的呼吸急促、 腹肌挛缩及口唇紫绀
等症状， 且无死亡病例。 光镜下肺细支气管黏膜上皮固有层、
血管周围、 肺间质及肺泡腔内有较多的 Eos 为主的炎性细胞浸
润， 气管黏膜上皮细胞有不同程度的变性， 基膜增厚， 管腔变
窄、 痉挛等。 同时， 此模型小鼠 BALF 中 Eos 数、 支气管黏膜
内浸润的 Eos 数均较正常组显著增加。 其病理改变与文献 ［4，5］
报道吻合， 符合哮喘 LAR 的特点， 显示所建立的 BALB ／ c 小
鼠哮喘 LAR 气道炎症模型是成功的。
望春花挥发油是中药望春花的主要药效部位之一， 主要组
分为 1， 8 -按叶素、 α-蒎烯、 α-松油醇、 金合欢醇、 樟脑等［3］。
既往的研究表明， 望春花挥发油具有抗急性、 慢性和过敏性炎
症的作用， 可明显延长致敏豚鼠的引喘潜伏期， 减轻哮喘气道
炎症 EAR 的症状， 减轻哮喘气道的炎症反应 ［3］。 本研究旨在
进一步探究望春花挥发油对哮喘 LAR 的作用特点。 实验结果
显示 ， 望春花挥发油具有抑制模型小鼠的 LAR 主要效应细
胞——Eos 在气道的浸润聚集的作用， 能减少气道黏膜 Eos 等
炎症细胞的数量， 抑制哮喘气道毛细血管通透性的增加， 减少
炎性蛋白的渗出， 改善气道黏膜的充血水肿， 修复黏膜上皮的
损伤从而减轻炎症反应对哮喘气道损伤， 且量效关系以望春花
挥发油大剂量作用较强。 提示望春花挥发油对哮喘 LAR 气道
炎症具有明显的抑制作用。
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代预防医学， 2007， 34 （2）： 301-305.
（收稿日期： 2009-07-13）
臭氧水作用 5 min， 对白色念珠菌的杀灭率可达 100%［18］。
2.2.3 对病毒的杀灭作用 单纯疱疹病毒、 柯萨奇病毒、 流行
感冒病毒于 4 mg ／ L 臭氧水作用 20 s， TCID50都减少 103以上，
即具有灭活效果［19］。
2.2.4 影响杀灭效果的因素 影响臭氧水消毒灭菌因素有臭氧
浓度， 细菌病毒的种类和浓度， 水的 pH 值， 温度、 杂质， 生
物等。 在臭氧浓度相同的情况下， 水的温度、 pH 值与消毒效
果成反比， 水的温度越低， 臭氧的溶解性、 稳定性也越好。 用
水质好、 杂质少、 浊度色度低的水来制备臭氧水， 其杀菌效果
也会提高， 且可以降低消毒副产物溴酸盐的浓度［20］。
臭氧不仅在消毒杀菌方面有其快速高效光谱， 无污染的突
出优点， 在其他领域也有广泛的应用。 在医学方面应用尤其广
泛， 如感染性疾病的治疗， 慢性病毒性疾病、 循环功能紊乱、 转
移性癌和癌后疾病、 牙科疾病、 硬皮病等等都有显著的疗效。
总之， 随着人们对臭氧的认识越来越全面深入， 它的优点
功效能越来越来多的被发挥利用， 为人类造福。
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