全 文 ：通过 LPS 诱导大鼠急性肺损伤 , 用 Western Blot 方法对肺组
织中 MMP-2 和 MMP-9 的表达进行了研究。结果显示 , ALI
+DOX组 MMP-2 和 MMP-9蛋白的表达较 ALI 组和对照组
均显著下降。表明在大鼠急性肺损伤早期应用 DOX可以明
显的抑制 MMP-2 和 MMP-9 蛋白在肺组织的表达 , 可以降低
肺组织中发生的炎症反应。
综上所述 , DOX 对 LPS 诱导的大鼠急性肺损伤确实有一
定的保护作用 ,其机制主要是通过抑制 MMP-2 和 MMP-9 的
表达 ,从而保护了肺泡毛细血管基底膜免受损伤 , 从而减轻了
肺水肿。
参考文献
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·中药与天然药物·
王不留行不同提取部位抑制新生血管作用的研究
高越颖 ,蒋秋龙 ,冯　磊 ,邱丽颖 ,金　坚(江南大学医药学院 无锡 214122)
摘要:目的　比较不同工艺路线得到的王不留行提取部位体外抑制新生血管作用。方法　采用系统溶剂萃取法和按目标萃取将王不留行水
提物及醇提物分别进行部位分离 ,得到有机萃取相,经旋蒸 、冷冻干燥得冻干粉末。 SRB法测定药物对人微血管内皮 HMEC-1细胞增殖的影响
及 IC50大小;划线法测定细胞迁移率;通过测定细胞外液 LDH 的释放监测并比较不同提取部位的细胞毒性。结果　A4 , A7 , B4 , B7 4个组分
IC50分别为 6.44±0.2 ,12.78±0.4 , 7.25±0.07及 10.35±0.21 ;药效依次为 A4>B4>B7 >A7;细胞迁移距离为 B4LDH活性(U·L-1)分别为 758.1±19.73 , 1006.54±129.41 , 1111.11±36.97 及 617.45, 4-75.93。结论　王不留行醇提取物按系统溶剂萃取
法得到的正丁醇部位是相对活性好毒性小的有效部位。
关键词:王不留行提取物;提取路线;HM EC;IC50
中图分类号:R282.71　文献标识码:B　文章编号:1006-3765(2010)-12-0034-04
作者简介:高越颖 ,女 ,硕士 ,研究方向:天然药物的提取分离及抗肿瘤药物的研究。联系电话:15061873292 , E-mail:yeshangyugao@163.com.
通讯作者:邱丽颖 ,女(1965-)。教授 ,研究方向:中药药理学研究。 E-mail:qiulydoc@sina.com.
基金项目:国家自然基金项目(30772586)
Antiangiogenesis effect of different extracts from Vaccaria segetalis
GAO Yue-ying ,JIANGQiu-long , FENGLei ,QIU Li-ying , JIN Jian(School of medicine and pharmaceut ics , Jiang-
nan University ,Wuxi 214122 , P.R.China)
ABSTRACT:OBJECTIVE 　Compare antiangiogenesis effect of different ex tracts f rom Vaccaria segetal-
is.METHODS　Vaccaria w ater ex tract and ethanol ext ract w ere isolated separately by system solvent ext raction
and objective ex traction ,keep the organic ex traction phase then remove o rganic solvent under reduced pressure , the
product w as concentrated by freeze drying.Determinat ion human microvascular endo thelial cell(HMEC)prolifer-
ation and IC50 by SRB method;Scraping line method w as used to observe cell mig ration;To monitor and compare
the cyto toxicity of different ext racts by measuring the release of LDH in ex t racellular fluid.RESULTS　IC50 of
A4 ,A7 ,B4 ,B7 corresponding to 6.44±0.2 , 12.78±0.4 , 7.25±0.07 and 10.35±0.21;which means ef ficacy
·34·
海峡药学　2010年　第 22卷 第 12期
o rder w as A4>B4>B7>A7;cell mig ration distance w as A7758.1±19.73 , 1006.54 ±129.41 , 1111.11 ±36.97 and 617.45 ±75 , 93 corresponding to A4 , A7 , B4 ,
B7.CONCLUSION　N-butanol ext ract of Vaccaria alcohol ext ract isolated by system solvent ex tracton w as
therelative high actLvity part w ith low toxicity.
KEY WORDS:Vaccaria ex tract;Extraction method;HMEC;IC50
　　王不留行为麦蓝菜〔Vaccaria sege talis(Neck.)Garcke〕的
干燥成熟种子。该植物味苦 ,平;入肝 ,胃经。对行血通经 ,催
生下乳 ,消肿敛疮;妇女闭经 ,乳汁不通 , 等有很大效用〔1〕。我
们的前期研究结果显示王不留行经过一系列分离纯化得到组
分 E能明显抑制内皮细胞增殖 、迁移及粘附〔2 , 3〕。但其活性
部位或活性组分尚不清楚 ,因此本实验设计了 4 条分离提取
路线 ,以人微血管内皮细胞 HMEC 细胞为筛选模型 , 希望从
中筛选到高药效低毒性的组分。
1　材料
1.1　药品和试剂　SRB(Sigma公司);MCDB-13l细胞培养基
(Gibco BRL 公司);胰酶 、小牛血清 、L-谷氨酰胺(冠羽生物工
程公司);LDH 试剂盒(南京建成生物工程研究所);王不留
行药材购自江苏省无锡市山禾药业股份有限公司 , 南京中医
药大学陈建伟教授鉴定为 Vaccaria segetal(Neck)Garcke。其
余试剂均为国产分析纯。
1.2　细胞株人微血管内皮细胞(HMEC)由法国国家卫生医
药研究院 U553 研究所(INSERM U553)陆核教授馈赠 , 保存
于液氮罐中。
2　方法
2.1　药物制备
2.1.1　乙醇回流物系统溶剂萃取:生炒王不留行种子 50g ,
10 倍量 75%乙醇加热连续回流提取两次 , 每次 1.5h。 合并
提取液 ,减压回收溶剂 , 冷冻干燥后得总提取物 2.43g 。取乙
醇回流提取物 500mg 加水混悬依次用不同极性溶剂萃取 , 得
到 4个部分:石油醚部分(A 1), 二氯甲烷部分(A2)、乙酸乙酯
部分(A3)、正丁醇部分(A4)。
2.1.2　乙醇回流物按目标萃取:取乙醇回流提取物 500mg
加水混悬 , pH 调节为 3-4 ,氯仿萃取 , 得氯仿相 A5;另取乙醇
回流提取物 500mg 加水混悬 , pH 调节为 9-10 , 氯仿萃取 , 得
氯仿相 A6;取乙醇回流提取物 500mg 加水混悬 ,调节 pH7 后
用正丁醇萃取 ,得正丁醇相 A 7。
2.1.3　水提物系统溶剂萃取:准确称量 50g 王不留行中药
材 ,加入适量水煎煮两次 , 每次 1.5h , 合并煎煮液 , 高速离心
(8000r·min-1 , l0min), 离心液浓缩至 800m L。 取浓缩液
200mL 依次用不同极性溶剂萃取 , 得到 5 个部分:石油醚部
分(B1)、二氯甲烷部分(B2)、乙酸乙酯部分(B3)、正丁醇部分
(B4)。
2.1.4　水提物系统溶剂萃取:取 2.1.3 制得浓缩液 600m L ,
分 3份 , 每份 200mL ,分别 pH 调节为 3-4 , 氯仿萃取得氯仿相
B5;pH 调节为 9-10 ,氯仿萃取 , 得氯仿相 B6;调节 pH7 用正丁
醇萃取 , 得正丁醇相 B7。取各有效部位提取液 , 减压回收溶
剂 , 冷冻干燥后得粉末 , 称重 , 计算得率。得率=有效部位干
物质重量/原药材重量。
2.2　活性测定方法　收集对数生长期的 HMEC-I 细胞 ,以含
10%FCS 的 MCDB-131 培养液调整细胞密度 , 按每孔 150μL
(8000 个细胞)加入 96 孔培养板中 , 置 37℃、5%CO2 饱和湿
度培养箱中孵育 , 24h 后实验组分别加入不同稀释浓度的提
取物 150μL , 阴性对照组加入 150μL 培养基。 48h 后参照刘
思思等的 SRB 法〔4〕测细胞活性。实验结果以每组药物 4 个
复孔 , 重复 3 次 ,求均值±标准差。
在活性初步筛选时将所有组分以终浓度 20 , 10 , 5μg·m-1
加入各孔中 , 按公式计算抑制率 , 抑制率=(对照组 OD 值-加
药组 OD值)/对照组 OD 值。选择抑制率大于 30%的组分进
行 IC50及药物的量效关系测定。量效关系及 IC50测定时药物
终浓度依次稀释为(μg·mL -1)100 , 80 , 40 , 20 , 10 , 5 , 2.5 ,
1.25 , 0.625。
2.3　LDH 活力检测　乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含
酶之一 , 在正常情况下 , 不能透过细胞膜。当细胞受损伤时 ,
细胞膜通透性改变 , LDH 可释放至介质中 , 释放出来的 LDH
再催化乳酸生成丙酮酸 ,丙酮酸与 2.4-二硝基苯肼反应生成
丙酮酸二硝基苯腙 , 在碱性溶液中呈棕红色 , 通过比色求酶活
力。取给药组及对照组的细胞外液 , 按照试剂盒操作求酶活
力。通过酶活力大小监测药物对细胞的毒性损伤。
2.4　细胞迁移实验　参照乔洪旺等的划线灼伤法〔5〕研究细
胞迁移 , 将常规培养的 HMEC-1 细胞消化悬浮 , 以每孔 1m L
(10×104 个细胞)加到 24 孔板中 ,置 37℃、5%CO2 及饱和湿
度的培养箱中孵育 24h ,待细胞贴壁后用移液塑料枪头于每
孔中心位置划一条约 1mm 宽的灼伤带 , 然后用 PBS 洗去脱
落细胞 , 并加入含不同药物浓度的细胞培养基 , 对照组加入等
量的完全培养基。然后在 100×显微镜下拍照 , 此刻为 0h 细
胞迁移图 , 接着在 12h , 24h , 48h 分别于同一视野处拍照 , 测量
灼伤带距离 , 每个视野随机取 6 个位点 , 用 Image-pro plus6 软
件进行测量 , 所得结果进行统计处理。
3　结果
3.1　各组分得率　四条路线各部位得率如表1所示可见四条
路线的正丁醇部位 A 4 , A7 , B4 , B7 得率较高 ,其中得率大小依
次为 B7>A7>A4>B4 , 而水煮物按极性提取部位的乙酸乙酯
部位得率很低 , 只能取部分进行活性的筛选。
3.2　活性初筛结果　初筛结果(见表2、3)。A 4、B4 在 2.5μg·
mL -1时抑制率已经超过 25%, A7 、B7 在 5μg·mL-1抑制率均
>25%, 在 10μg·mL -1四个组分抑制率均>35%。
·35·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 22 No.12 2010
表 1　4条路线各组分率(%)
组分 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7
0.05 0.08 0.05 1.26 0.01 0.05 1.68 0.01 0.03 - 1.25 0.05 0.03 1.18
表 2　乙醇回流提取物各组分抑制率(%)
浓度(μg·mL-1) A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7
2.5 1.94±0.09 1.18±0.05 0.33±0.1 29.68±0.7 10.03±0.07 4.76±0.08 13.75±0.07
5 11.87±0.06 3.69±0.05 0.77±0.14 38.84±0.16 13.43±0.09 7.23±0.04 27.64±1.23
10 28.00±0.1 4.80±0.02 1.65±0.12 63.69±1.45 23.12±0.13 16.92±0.06 39.54±1.41
表 3　水煮提取物各组分抑制率(%)
浓度(μg·mL-1) B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7
2.5 0.4±0.06 0.31±0.08 1.31±0.05 25.6±4.85 9.91±0.06 1.35±0.03 16.7±31.84
5 1.13±0.07 1.28±0.08 2.7±0.07 42.74±4.28 10.91±0.06 2 , 25±0.05 32.69±7.52
10 2.44±0.05 2.49±0.07 2.97±0.08 51.82±0.19 10.69±0.05 3.97±0.18 48.18±3.73
3.2　4个有效部位的活性　A4 , A7 , B4 , B7 4 个组分 IC50 分
别为 6.44±0.2 , 12.78±0.4 , 7.25±0.07 及10.35±0.21 ,表
明活性大小依次为 A4>B4>B7>A7。由 4 个组分量效关系
图(图 1)可以看出 , 在 20μg·mL-11 之前 , 各组分抑制率与浓
度呈线性关系 ,因此取 10μg·mL-1和 20μg·mL-11 时的细胞
外液做 LDH 实验 , 实验严格按照说明书进行。
图 1　组分 A4 , A7 , B4 , B7量效关系图
3.3　LDH 活力检测结果　阴性对照组的细胞外液活力为
541.48±88.63(U·L-1)。给药实验组结果如表 4 所示 , 与对
照组相比各组细胞外液活力均有上升的趋势 , 随着浓度增加
细胞外液活力显著增加 , 活力越大表明其对细胞损伤越大 ,
A7和 B4 对细胞损伤显著大于其他两个组分。
表 4　组分 A4 ,A7 , B4 , B7细胞外液 LDH 活力(U·L -1)
浓度
(μg·mL -1) A4 A7 B4 B7
15 719.17±87.18 754.39±147.56 649.1±157.89 777.18±226.71
20 758±19.73＊＊ 1006.54±129.41＊ 1111.11±36.97＊＊ 617.45±75.93
＊(＊＊)与对照组相比 P<0.5(0.01)
3.4　细胞迁移结果　给药24h 后阴性对照组的迁移距离为
64.074±4.70μm , A4 , A 7 , B4 , B7 迁移距离分别为 19.78 ±
3.14μm , 30.56±6.99μm , 20.99±1.69μm , 36.88 ±0.42μm ,
与对照组均有显著差异(P <0.01), 在给药 12h 及 48h 给药
组迁移距离与隐形对照组均无显著差异。
4　讨论
血管新生不仅为肿瘤的生长提供氧气和营养 , 也为肿瘤
的转移提供了途径。血管生成抑制剂是目前抗肿瘤药物研究
的热点。血管内皮细胞不仅是构成血管与组织屏障的主要成
分 , 而且血管内皮细胞可以以出芽等多种方式形成新的血管 ,
激活的内皮的迁移到特定位置并增殖形成新的血管 , 因此可
以通过抑制血管内皮的增殖和迁移抑制血管生成 , 从而抑制
肿瘤的生长〔6-9〕。因此本实以人微血管内皮细胞 HMEC-1 为
模型筛选出 4 个显著抑制血管内皮细胞增殖迁移的组分 , 其
中 A 4、B4作用较为明显 ,且得率也较高。
内皮细胞的损伤可导致多种疾病 , 包括糖尿病 , 高血脂 ,
高血压等〔10〕。因此在注重药物对内皮细胞增殖抑制的同时
应当注意药物对内皮细胞的损伤。本实验结果表明 , 在浓度
为 20μg·mL-1时各组分细胞外液 LDH 活力与对照组产生了
显著的差异 , 其中 A4 , B7 差异较小即对细胞产生的损伤较小 ,
其他组分虽有损伤但导致损伤的浓度远远大于其 IC50。
4 个组分中 A 4 即王不留行醇提取物按系统溶剂萃取法
得到的正丁醇部位是相对活性好 , 毒性小的有效部位。然而
体外抗肿瘤模型存在一定的局限性 , 因此在后期工作中应考
虑建立体内抗肿瘤模型 ,以及其用药安全范围。
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石见穿 化学 成 分及 药 理研 究 进展
雷　涛1 ,孟繁钦1 ,王艳芳2 ,吴宜艳＊(1.牡丹江医学院合成制药教研室 牡丹江 157011;2.吉林农业大学 长
春 130118)
摘要:核桃树皮具有抗氧化 、抗肿瘤等作用 ,目前对石见穿化学成分 、药理作用的研究已取得一定的进展 , 尤其在其抗肿瘤方面的作用受到医药
领域的广泛关注。对石见穿的化学成分和药理作用作进一步的研究将有利于开发新的药物和充分利用天然药用资源。
关键词:石见穿;化学成分;药理
中图分类号:R969.4　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2010)-12-0037-03
作者简介:雷涛 , 男(1976-)。职称:硕士 , 讲师。 联系电话:0453-
6582156-3681 , E-mail:leitao1976@yahoo.com.cn
通讯作者:吴宜艳 ,女(1963-)。职称:硕士 ,教授 , 主要从事药理学
教学 及 科 研 工 作。 联 系 电 话:0453-6582156-3686 , E-mail:
w yy6582222@163.com
项目来源:校企合作项目(抑瘤胶囊的研制)
Research review on Chemical const ituents and pharmacological effects of
the salvia chinensis benth
LEI Tao1 ,MENG Fan-qin1 ,WANGYan-fang1 ,WU Yi-yan＊(1.Mudanjian Medical University ,Mudanjian 157011 ,
China;2.Jilin Agricultureal University ,Changchun 130118 ,China)
ABSTRACT:The Salvia chinensis Benth has antioxidant , anti-tumor and the other pharmacological ef fects.At pre-
sent , there is a few development of the studies on this materials , especially in the aspect of anti—tumo r.The fur-
ther research on the chemical and pharmacological effects of the bark of The Salvia chinensis Benth s chemical
consti tuents and pharmacological effects w ill help the development of new drugs and make full use of natural
medicinal resources.
KEY WORDS:Salvia chinensis Benth;chemical constituents;pharmacolog ical effects
　　石见穿系唇形科植物华鼠尾草(Salvia chinensis benth)的
干燥地上部分。性凉 ,味微苦辛平 , 归胃 、肝 、肺经。有清热解
毒 ,活血理气止痛等功能 , 亦名紫参 、小丹参(《植物名实图
考》)、月下红(《苏州本产药材》)、石打穿 、石大穿(《全国中草
药新医疗法展览会资料选编》)、紫丹花(浙江)、红参根(安徽)
等 ,广泛分布于江苏 、安徽 、江西 、湖北 、湖南 、广东 、广西 、四
川 、云南等地。民间主治噎嗝 、痰喘 、肝炎 、赤白带 、痈肿 、瘰疬
等症〔1〕 ,近年来由于其多糖成分具有抗癌活性 , 成为研究热
点。
石见穿易混淆品为石打穿 , 《本草纲目拾遗》始载的石打
穿〔2〕 ,为蔷薇科植物龙芽草(仙鹤草);石见穿应为菊科植物鬼
针草 , 而不是唇形科植物华鼠尾草。《中国药典》 1977 年版一
部的石见穿才是华鼠尾草 , 华鼠尾草是近现代石见穿的新兴
品种。
1　化学成分研究进展
南京药物研究所许美娟〔3〕等从石见穿全草干粗粉甲醇
提取液的析出部分经硅胶柱层析 , 石油醚 、石油醚-乙酸乙酯
递增洗脱分得 4 个结晶根据物理常数及红外 、质谱等光谱分
析 , 鉴定为分离出 β-谷甾醇 、α-乳香酸 、齐墩果酸 、乌苏酸。其
中 , 墩果酸含量最高 ,得率 0.4%。胡丹〔4〕等测定石见穿中齐
墩果酸含量为 0.36%。康琛等从石见穿水提取物中分得丹
参素和迷迭香酸 , 丹参素为首次从该植物中分离得到。王业
玲〔6〕等从石见穿的 70%乙醇提取液中 , 分离得到 19 个化合
物。鼠尾草二烯醇 , 鼠尾草二烯醇 B , angelicoidenol , dehy-
drovomifoliol , 布卢门醇 A , clovane-2β , 9α-diol , methy l-ent-4-epi-
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 22 No.12 2010