全 文 ：收稿日期:2005-03-31;　修订日期:2005-10-26
作者简介:罗琥捷(1979-),男(汉族),广东湛江人 ,现在读陕西科技大学
化学与化工学院硕士研究生 ,主要从事中药新剂型研究工作.
*通讯作者简介:李临生 (1941-), 男(汉族),山东人 ,现任陕西科技大学
教授 ,主要从事化学教学和科学研究工作.
鱼腥草挥发油纳米脂质体的制备及其肺靶向效果
罗琥捷 , 李临生*
(陕西科技大学应用化学研究所 ,陕西 咸阳　712081)
摘要:目的 研究鱼腥草挥发油脂质体肺靶向效果给药。方法 酰化磷脂以逆相蒸发 -搅拌超声法制备鱼腥草挥发油脂
质体 , 过柱分离检测包封率 ,显微镜法观察形态 ,最后通过小鼠静脉注射给药 0. 5 h后 ,肺部提取药物 , 通过气质联用和抑
菌圈实验比较脂质体与乳剂给药浓度。结果 鱼腥草挥发油脂质体药物包封率达 94. 77%, 鱼腥草挥发油脂质体呈双层
结构 , 其平均粒径为 97 nm , 鱼腥草挥发油脂质体给药后肺脏提取液中未检出甲基正壬酮 , 而亚油酸乙酯质量分数为
0. 259%, 鱼腥草挥发油乳剂给药时两者均无 , 鱼腥草挥发油脂质体给药后肺脏提取液抑菌圈直径可达 1. 2 mm , 鱼腥草挥
发油乳剂给药时抑菌圈最大仅为 0. 5 mm。结论 以逆相蒸发 -搅拌超声法制备鱼腥草挥发油纳米酰化磷脂脂质体肺靶
向效果优于乳剂。
关键词:酰化磷脂;　鱼腥草挥发油脂质体;　肺靶向;　抑菌圈实验;　气质联用
中图分类号:R285. 5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)01-0056-02
Preparation ofNanoVolatileO il ofHouttuyn ia corda ta Thunb. L iposom e and Lung Tar-
geting E ffect
LUO H u-jie, L I L in-sheng*
(Applied Chem istry R esearch Institute ofShanxiUniversity of Science＆Technology, X ianyang , Shanxi 712081,
China)
Abstract:Objective The lung targeting e ffect of the vo la tile o il of Houttuym ia corda ta Thunb. liposom e w as studied.
M ethods The nano vo la tile o il ofHouttuym ia cordata Thunb. liposom e wasm ade of acy la ted pho spha tide w ith succ in ic anhyd ride
and prepared by reve rse phase evapoation and ag ita ting - ultrasonic d ispersion, the entrapment ratio of liposom e w as stud ied by
Sephadex -G25 chrom atography, and the appea rance of liposom e w as obse rved by m icrog raphy, through ta il intravenous injec-
tion, the sm allw hite m ice we re g iven the em ulsion and the nano lipo som e, and them icew ere k illed afte r 0. 5 h, the lung sw ere
taken out and tritu ra ted, the drugs in lungs could be abstrac ted by so lvent and the drug concen tra tions could be compared by GC /
M S and a series of bac te ricida l tests. Resu lts The entrapment ratio of lipo som ew as 94. 77%, the vo la tile oil o fhouttuym ia cordata
Thunb. liposom e has two lay ers, the average size w as 97 nm , in abstrac ting liquor, w ith the lipo som e, 2 -undecanone could no t
be found and the qua lity po ints o f 9, 12 - oc tadecadieno ic acid e thy l e ste rw as 0. 259%, but w ith the emu lsion, 2 - undecanone
and 9, 12 - octadecadienoic ac id e thy l e ster we re bo th not be found, in bacter ic ida l tests and w ith abstracting liquo r, a fter g iven
the lipo som e, the diame ter o f the bac te ricida l circles could get to 1. 2 mm, however, a fter g iven the emu lsion, the diam e te r of the
bigg ist bacteric ida l circle was on ly 0. 5 mm. Conc lu sion The nano vola tile o il of hou ttuym ia corda ta thunb lipo som em ade o f acy-
lated phosphatidew ith succin ic anhydr ide and prepa red by reve rse phase evapoation and ag itating -u ltrasonic dispersion w as be tter
than the emu lsion in lung targe ting.
Key words:Acy la ted pho sphatide;　The vo la tile oil o fHouttuym ia corata Thunb. liposome;　 Lung targe ting;　Bac te ricida l
test;　GC M/ S
　　鱼腥草挥发油有抗菌 、抗病毒 、消炎 、解热的作用 , 广泛地运
用于临床 , 常用于治疗肺部疾病 , 疗效确切。脂质体作为药物载
体可提高药物的疗效和降低其毒副作用 ,并可达到缓控释和靶向
给药目的 [ 1, 2] , 而酰化磷脂制备的脂质体的稳定性更佳。为了解
鱼腥草挥发油酰化磷脂脂质体体内给药的特点 ,采用气质联用和
抑菌圈法比较了解鱼腥草挥发油脂质体与乳剂体内给药肺部靶
向的效果。
1　实验材料
1. 1　菌种与实验动物 金黄色葡萄球菌为陕西科技大学生命科
学与工程学院微生物实验室提供;小鼠购于咸阳动物供应站 ,并
在实验前 10 d以馒头和水喂食。
1. 2　主要试剂及仪器 干品鱼腥草(购于咸阳民生大药房 , 自制
鱼腥草挥发油),酰化大豆磷脂(丁二酸酐酰化 , 自制 ), 葡聚糖凝
胶 G-25(上海化学试剂采购供应站分装厂 , Pharm acia进口分
装), span-80为化学纯 , 牛肉浸膏和琼脂为生化试剂 , 其余试剂均
为分析纯。
电子分析天平(北京赛多利斯公司), 78-1型磁力加热搅拌
器(浙江乐清乐成电器厂), 多频声化学发生器 (成都市九洲机电
工程研究所), FLUKO均化器 FA25(上海弗鲁克流体机械制造有
限公司 ), R205旋转蒸发器 (上海申生科技有限公司 ), SH B-Ⅲ
(A)型循环水多用真空泵 (河南省太康科教仪器厂 ), 722S可见
分光光度计(上海校光技术有限公司 ), 800离心机 (常州国华电
器有限公司), H-600透射电子显微镜 (日本日立公司), 九阳料
理机 JYL-350(山东九阳小家电有限公司),气质联用仪(GC型号
6890,M S型号 5973,美国安捷伦公司)。
2　实验方法
2. 1　鱼腥草挥发油脂质体制备方法 [ 3, 4] 采用逆相蒸发 -搅拌
超声法制备脂质体:将鱼腥草挥发油 、磷脂 、胆固醇和非离子表面
活性剂按一定比例溶于乙醚 , 加入一定体积的蒸馏水 , 冰水浴中
在超声作用下进行搅拌 ,形成稳定的W /O型乳剂 , 常温下先在真
空度小的情况下旋转减压蒸发再在真空度高的情况下旋转减压
蒸发 , 形成水性悬液 , 用氮气短时吹拂 , 再加入一定体积蒸馏水 ,
最后冰水浴中短时搅拌超声即得。
2. 2　鱼腥草挥发油乳剂的的制备 [ 3] 取少量乙醚溶解磷脂和鱼
腥草挥发油 ,加入蒸馏水 , 冰水浴中 10 000 r /m in均化 1 m in, 旋
转真空减压 ,氮气短时吹拂至无乙醚味 , 再冰水浴中 10 000 r /m in
均化 2 m in即得。
2. 3　鱼腥草挥发油脂质体包封率的检测 [ 4] 在用空白脂质体已
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 1期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 1
饱和的 SephadexG-25柱(1. 1 cm ×28. 0 cm)上 ,移入 1. 00 m l制
得的鱼腥草挥发油脂质体 , 以 0. 8 m l /m in水合介质洗脱 , 弃去前
4 m l洗脱液 ,收集紧接着的 32 m l洗脱液 ,吸取 7. 5 m l洗脱液于
50 m l容量瓶中 , 加入部分无水乙醇充分混合后再加无水乙醇至
刻度 , 过滤 ,弃去初滤液 , 取后续液在 415 nm处测定吸光度 ,换算
成质量分数 , 并计算包封率:包封率 =包封于脂质体的药质量
(g) /药物投料质量(g)×100%。
2. 4　鱼腥草挥发油脂质体稳定性的检测 把脂质体乳液常温下
放置 10d后观察是否有沉淀出现。
2. 5　鱼腥草挥发油脂质体的显微形态观察 用电子显微镜观察
的方法 将原液滴到铜网上 5 m in后 , 用滤纸吸去上面的多余液
体 , 然后在向铜网滴上 1%的磷钨酸染色 2 m in, 吸干多余液体后
在 H-600透射电子显微镜下观察拍照。
2. 6　体内给药 [ 5, 6] 选取体重为 20 ～ 22 g的健康小鼠 6只 , 分 3
组 , 每组 2只。每只小鼠由尾静脉注入鱼腥草挥发油脂质体 0. 5
m l, 0. 5 h后剖杀 , 取肺脏置捣碎器中 , 加入 10 m l甲醇 , 1次 /30
s,总共捣碎 3次 , 制成均浆 , 2 500 r /m in转速下离心 15 m in,取上
清液。
鱼腥草挥发油乳剂(其药物浓度与脂质体一样)体内给药
同上。
2. 7　抑菌圈实验
2. 7. 1　 取一定浓度的提取液于灭菌培养皿中。
2. 7. 2　 将直径为 5mm 的圆形滤纸片浸入培养皿中 , 而一组样
品检测用四片滤纸片 。
2. 7. 3　 将高层培养基融化保温在 48℃的水浴中数分钟 , 用抹
平棒将菌液在培养皿中抹匀(接入金黄色葡萄球菌 0. 1 m l)。
2. 7. 4　 抹匀后 ,用玻璃蜡笔在皿底背面标号。
2. 7. 5　 用无菌镊子夹取浸有试样的滤纸片在皿壁上碰刮去多
余的溶液 , 平铺于编号对应的含菌培养基上 (不同样品应换镊
子)
2. 7. 6　 置于 28℃的温箱中培养 1 d,记录抑菌圈的大小 ,按 2次
实验平均值计算抑菌圈直径。
2. 8　气质联用分析 [ 7] 气相色谱条件:载气氦气 0. 8 m l /m in ;分
流比 20∶1;色谱柱 HP - 1(30 m ×0. 25 mm);进样口 280 ℃;柱
温程序:从 60 ℃开始升温 , 5℃ /m in保温 3 m in,至 265℃后则保
温 10 m in。
质谱测定条件:离子源 EI 230 ℃;电子能量 70 eV;四极杆
150℃;质量扫描范围 15 ～ 500。
取肺部提取液 1 m l加入 9 m l食盐水充分混合 , 2 500 r /m in
转速下离心 20 m in,取清液再用氯仿萃取 , 静置分层 ,分液定容为
25 m l,再取样进行气质联用分析。
3　结果与分析
3. 1　鱼腥草挥发油脂质体性能测定结果 酰化磷脂制备的鱼腥
草挥发油脂质体包封率为 94. 77%, 脂质体乳液常温下放置 10d
未见沉淀。
3. 2　鱼腥草挥发油脂质体微观形态 由鱼腥草挥发油脂质体透
射电镜照片(图 1)可以看出酰化改性磷脂包封的鱼腥草挥发油
脂质体为粒径均匀的球状或近球状的小单层脂质体 ,双层膜结构
清楚 , 其平均粒径为 97 nm。
3. 3　抑菌圈实验结果 见表 1。
由表 1可以看出 , 通过尾静脉注射体内给药后 , 鱼腥草挥发
油脂质体组的小白鼠肺部提取液抑菌效果好于乳剂组 ,其抑菌圈
大小是乳剂组大小的两倍以上。但抑菌圈偏小 ,这与鱼腥草挥发
油加入量小 、挥发油中抑菌成分损失 、注射量小 、多级稀释等因素
有关。另外在抑菌实验过程中 ,甲醇的挥发也会带走部分挥发油
成分。
3. 4　气质联用分析结果 鱼腥草挥发油中甲基正壬酮的质量分
数仅为 4. 424%,而亚油酸的质量分数 32. 515%。体内给药后 ,
脂质体组和乳剂组肺部提取液中均没发现甲基正壬酮 ,但脂质体
组中发现有质量分数为 0. 259%的亚油酸乙酯 , 是可以理解的。
这可能与肺部提取液中挥发油含量微少 , 而又加盐水 、加氯仿萃
取处理时进一步导致甲基正壬酮的损失有关。而亚油酸乙酯可
能来自于亚油酸的衍变。结合抑菌实验结果 ,可以推测脂质体组
应当比乳剂组更能提高鱼腥草挥发油在肺部的浓度。
图 1　鱼腥草挥发油脂质体透射电镜照片 (×150 000)
表 1　两种鱼腥草挥发油给药肺部提取液的抑菌效果比较　　mm
鱼腥草挥发油药剂 抑菌圈直径平均结果
纳米脂质体 0. 9, 1. 2, 1. 1
乳剂 0. 5, 0. 3, 0. 4
4　结论
本研究在冰水浴中采用逆相蒸发 -搅拌探头超声法有利于
制得稳定的鱼腥草挥发油纳米脂质体。
据抑菌圈实验和气质联用分析结果 ,可以推测该法制备的鱼
腥草挥发油酰化磷脂纳米质体相对于鱼腥草挥发油酰化磷脂乳
剂能较好提高肺部靶向的效果。这符合脂质体形式的药物用于
iv给药可使药物的肺沉积量剧增 [ 2] 。
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(上接第 32页)性肝损伤大鼠血中 ALT、AST含量 ,对大鼠的肝损
伤具有显著的防治作用 [ 2] 。药理实验证明甘草酸二铵能使小鼠
减轻因四氯化碳 、硫代乙酰胺和 D-氨基半乳酸引起的血清谷丙
氨基转移酶及谷草氨基转移酶升高 , 还能明显减轻 D-氨基半乳
酸对肝脏的形态损伤和改善免疫因子对肝脏形态的慢性损伤。
柴胡疏肝散加减与甘草酸二铵联合治疗证属肝郁气滞的慢性乙
肝病人 , 疗效优于单用甘草酸二铵 , 提示中西药结合治疗的疗效
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