全 文 ：文章编号:1001 － 4829(2012)03 － 1056 － 05
收稿日期:2011 － 08 － 02
作者简介:侯志江(1982 －) ，男，助理研究员，主要从事食用菌
栽培和育种方面的研究，E-mail:houzhijiang123@ 126． com，*
为通讯作者。
菌种保藏条件对尖顶羊肚菌(Morchella conica)
菌丝生长的影响
侯志江1，李荣春2，程远辉1，戚淑威1，和琼姬1，赵 琪1，徐中志1*
(1．云南省农业科学院高山经济植物研究所，云南 丽江 650201;2．云南农业大学食用菌研究所，云南 昆明 674100)
摘 要:研究了尖顶羊肚菌菌种在不同条件下的短期保藏对其菌丝生长的影响，以寻求适宜的菌种保藏条件。采用 10 ℃ /5 ℃
(昼 /夜)和 15 ℃ /10 ℃ 2 种变温条件、散射光和黑暗 2 种光照条件，分别保藏菌种 30 d和 60 d，以冰箱(4 ℃)保藏为对照。结果
表明，10 ℃ /5 ℃保藏时，尖顶羊肚菌的菌丝生长优于 15 ℃ /10 ℃及对照保藏;散射光保藏菌落颜色和菌丝气生性好于黑暗保藏;
在 10 ℃ /5 ℃温度下，保藏时间对菌丝生长影响不大，可以继续延长保藏时间，在 15 ℃ /10 ℃温度下，不宜超过 60 d的保藏时间。
因此，较适宜的保藏条件是 10 ℃ /5 ℃、散射光、保藏 30 d，菌株表现为菌落边缘整齐，菌丝气生性中等，菌丝致密，菌落角变面积
小，菌丝长速均匀稳定和菌丝干重较高。说明尖顶羊肚菌菌种在较低的常温、有散射光条件下保藏比保藏在冰箱里效果佳。
关键词:尖顶羊肚菌菌种;短期保藏条件;菌丝生长;角变面积
中图分类号:S646． 7 文献标识码:A
Effect of Different Preservation Conditons on Mycelia
Growth of Morchella conica
HOU Zhi-Jiang1，LI Rong-Chun2，CHENG Yuan-hui1，QI Shu-wei1，HE Qiong-ji1，ZHAO Qi1，XU Zhong-zhi1*
(1． Institute of Alpine Economic Plants，Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Yunnan Lijiang 674100，China;2． Edible Fungi Insti-
tute，Yunnan Agricultural University，Yunnan Kunming 650201，China)
Abstract:The effect of different short-term preservation conditions on mycelial growth and of Morchella conica was studied in order to search
for suitable preservation condition． The treatments included 10 ℃ /5 ℃(day /night) ，15 ℃ /10 ℃(day /night) ，scattering light and dark，
thirty and sixty days，and the control of refrigerator preservation． The results showed that the mycelial growth of Morchella conica under the
condition of 10 ℃ /5 ℃ were better than those under the conditions of 15 ℃ /10 ℃and the control． The colony color and aerial hyphae with
the treatment of scattering light were also better relative to the dark treatment． Additionally，the preservation time had no distinct effect on
the mycelial growth under the condition of 10 ℃ /5 ℃ ． So the time could be extended，but the maximal preservation time was sixty days un-
der the condition of 15 ℃ /10 ℃ ． Therefore，under the appropriate preservation condition of 10 ℃ /5 ℃，scattering light for thirty days，the
performances of strain had the neat colony edge，media aerial hyphae，dense hyphae，lower sectorial variation，uniform mycelial growing rate
and high dry weight of mycelial ．
Key words:Morchella conica;Short-term preservation condition;Mycelial growth;Sector area
尖顶羊肚菌(Morchella conica)是一种营养价值
及药用价值极高的名贵食用菌［1］，其人工栽培已经
成功，但产量和质量不稳定［2 ～ 3］。其中的原因之一
是生产菌种的退化。因此，如何保藏尖顶羊肚菌菌
种，使其保持原有遗传性状不变异和不退化，在科研
工作和产业化生产中都有着重要意义。在长期保藏
菌种方面目前最好的方法是液氮保藏法，而传统上
短期保藏菌种方法比较常用的是斜面低温保藏法。
在实际生产中发现，一些羊肚菌生产者把菌种放置
于常温散射光下保藏备用，这种短期保藏的菌种受
季节等因素影响很不稳定，而菌种不同的保藏方法
和条件主要影响菌丝的生长和子实体的产量［4 ～ 6］。
樊美珍［7］研究白僵菌菌种退化和耿丽娟［8］研究虫
草菌种退化原因时认为，低温、低湿，全光照引起的
角变频率低，角变面积小，有利于菌株性状的稳定。
然而关于光照条件是否影响尖顶羊肚菌菌种稳定性
目前尚未见报道，另外，不同温度条件下可维持菌株
稳定性的保藏时间也不明确。因此本试验在短期保
6501
西 南 农 业 学 报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
2012 年 25 卷 3 期
Vol. 25 No. 3
DOI:10.16213/j.cnki.scjas.2012.03.073
表 1 尖顶羊肚菌菌种保藏条件试验设计
Table 1 The experimental design of preservation conditions of Morchella conica
处理
Treatment
昼温 /夜温(℃)
Temperature
(day /night)
光照条件
Light
condition
保藏时间(d)
Preservation
time
1 10 /5 散射光 30
2 10 /5 散射光 60
3 10 /5 黑暗 30
4 10 /5 黑暗 60
5 15 /10 散射光 30
6 15 /10 散射光 60
7 15 /10 黑暗 30
8 15 /10 黑暗 60
9 4 黑暗 90
藏菌种方面研究了不同保藏温度、光照、处理时间等
条件对尖顶羊肚菌菌丝生长的影响，以期得到较优
保藏条件，以提高尖顶羊肚菌子实体的产量，减缓菌
株优良性状的变异和退化。
1 材料与方法
1． 1 材料
供试菌种野生尖顶羊肚菌(取自云南省维西
县)经组织分离和人工驯化后选出的优良菌株。试
验采用的培养基有用于保藏菌种的固体斜面培养基
(小麦 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g、磷酸二氢钾
1 g、维生素 B1 10 mg、水 1000 mL、pH值自然)、用于
培养菌丝的液体培养基(小麦 200 g、葡萄糖 20 g、磷
酸二氢钾 l g、维生素 B1 10 mg、水 1000 mL、pH值自
然)和平板培养基(小麦 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂
20 g，水 1000 mL，pH值自然)。
1． 2 试验设计
将尖顶羊肚菌试管菌种放置于 LRH-70 生化培
养箱中保藏，试验设 10 ℃ /5 ℃(昼 /夜)和 15 ℃ /10
℃ 2 种不同温度处理;散射光(把菌种试管用两层
报纸遮盖，形成散射光)和黑暗(把菌种试管用黑色
纸包裹后放于不透光的纸盒内)2 种不同光照处理;
试验设 30 和 60 d 2 种不同保藏时间处理;以 4 ℃恒
温黑暗保藏 90 d为对照(CK) ，共 9 个处理(表 1)。
1． 3 调查项目
1． 3． 1 菌种平皿复活 随机在保藏后的供试菌种
斜面上挑取直径 5 cm 大小的菌块，在 PDA 平板培
养基上各接 5 个点，23 ℃恒温培养，调查 5 个点的
不同小写字母代表差异显著水平(P ＜ 0． 05)。下同
Different letter indicate significant difference between treatment (P ＜ 0． 05)． The same as below
图 1 不同保藏温度、光照及时间对菌丝萌动时间的影响
Fig． 1 Effect of different preservation temperature，light and treatment time on the mycelium germinating time
75013 期 侯志江等:菌种保藏条件对尖顶羊肚菌(Morchella conica)菌丝生长的影响
萌动时间，计算平均值。
1． 3． 2 菌落形态观测 随机在保藏后的供试菌种
斜面上挑取直径 5 cm 大小的菌块，接种在 PDA 平
板培养基的中央，用封口膜封口，23 ℃恒温培养 17
d，调查菌丝颜色、菌落疏密、菌丝气生性、边缘整齐
度、菌落角变面积率(菌落角变面积率 =角变总面
积 /被测菌落总面积 × 100%，角变面积 = 1 /2 角变
弧长 ×半径)和菌丝的生长速度(生长速度 =菌落
直径 /时间)。
1． 3． 3 菌丝干重测定 用接种刀在试管斜面上挑
取直径 5 cm大小的菌块，接种到装有 40 mL液体培
养基的 100 mL的三角瓶中，23 ℃恒温静止培养 15
d，将形成的菌丝膜过滤，60 ℃烘干，称重。
试验所得的数据采用 DPS 软件进行差异显著
性分析。
2 结果与分析
2． 1 不同保藏温度、光照及时间对菌丝萌动的影响
由图 1 可知，处理 3 菌丝萌动所需要的时间最
短(27 h) ;菌丝萌动所需时间最长的是处理 2 和处
理 8(40 h) ;所有处理均在 40 h 内萌动。随着保藏
时间的延长和保藏温度的升高，菌丝萌动所需的时
间明显延长，黑暗保藏较光照保藏菌丝萌动需要的
时间短，但差异不显著。总体来看，在 10 ℃ /5 ℃
(昼 /夜)、黑暗、30 d 保藏条件下，菌丝萌动所需时
间最短。
2． 2 不同保藏温度、光照及时间对菌落形态的影响
由表 2 可知，处理 3 和处理 5 菌落形态表现最
好。菌落黄色、边缘整齐、菌丝致密、气生性中等、
角变面积小，处理 3 仅为 2． 7 %，二者角变面积差
异不显著;处理 2、处理 6 和处理 8 菌落形态表现最
差，菌落颜色淡黄、边缘不整齐、角变面积大，其中
处理 6 和处理 8 均为 5． 0 %。但二者角变面积差
异显著。可见，随着保藏天数的延长和温度的升
高，菌丝致密性和边缘整齐度下降，角变面积增大;
黑暗保藏则气生性增强，而散射光保藏则减弱;在
低温条件下，保藏时间相同，散射光保藏和黑暗保
藏对菌落形态的影响差异不显著，在高温条件下，
散射光保藏菌落形态要优于黑暗保藏，且差异显
著。因此，在 10 ℃ /5 ℃、散射光、30 d 保藏条件
下，菌落形态最佳。
2． 3 不同保藏温度、光照及时间对菌丝生长速度和
干重的影响
由图 2可知，菌丝干重最高的是处理 3(0． 65 g) ，
其次是处理 1(0． 62 g) ，菌丝干重值最低的是处理 6
(0． 54 g)。由图 3 可知，菌丝生长速度最快的是处
理 3(10． 3 mm /d) ，最慢的是处理 6(8． 6 mm /d) ，处
理 3 菌丝干重值最大，菌丝生长速度也为最大。从
整体来看，低温保藏的菌丝干重和菌丝生长速度均
高于高温保藏，且差异显著;在相同温度和光照条件
下，保藏时间短的处理菌丝干重和生长速度优于保
藏时间长的处理，且差异显著;在相同温度条件下，
光照保藏的菌丝干重高于黑暗保藏，而菌丝生长速
度低于黑暗保藏，且差异不明显。因此，在 10 ℃ /5 ℃、
散射光、30 d 保藏条件下菌丝干重较高，且菌丝生
长速度均匀。
表 2 不同保藏温度、光照及时间对菌落形态的影响
Table 2 Effect of different preservation temperature，light and treatment time on colonial morphology
处理
Treatment
菌落颜色
Colony
colour
菌丝气生性
Aerial hyphae
菌丝密度
Hyphae
closeness
边缘整齐度
Edge
uniformity
角变面积率(%)
Sector area
1 黄 中 中等 整齐 3． 9b
2 淡黄 弱 稀疏 不整齐 4． 8c
3 黄 强 致密 整齐 2． 7a
4 黄 中 中等 整齐 4． 1b
5 黄 强 致密 整齐 3． 0a
6 淡黄 弱 稀疏 不整齐 5． 0c
7 黄 中 中等 整齐 4． 0b
8 淡黄 弱 稀疏 不整齐 5． 0c
9 黄 中 中等 整齐 3． 9b
8501 西 南 农 业 学 报 25 卷
3 结论与讨论
试验结果表明，尖顶羊肚菌较适宜的保藏条件
是 10 ℃ /5 ℃(昼 /夜)、散射光、保藏 30 d，菌株表现
为菌落边缘整齐，菌丝气生性中等，菌丝致密，菌落
角变面积小，菌丝生长速度均匀稳定和菌丝干重高，
保藏效果强于冰箱保藏。因此，把尖顶羊肚菌菌种
保藏在较低的常温、有散射光的条件下，既可保证菌
种的优良性状又可以节省设备。
本研究结果表明，10 ℃ /5 ℃条件下保藏的菌
种菌丝生长优于 15 ℃ /10 ℃的处理，且差异显著也
优于 4 ℃保藏。但是无论光照和保藏时间如何变
化，只要温度条件不变，对菌丝生长影响不大，且差
异不显著。因此，在温度、光照和保藏时间 3 个影响
因子中，温度因子起着首要作用。菌种保藏在散射
光下菌落角变面积率低，全黑暗下菌落角变面积率
高，这与樊美珍研究白僵菌和耿丽娟研究虫草菌种
退化的结论是一致的。而且，保藏温度较高时，散射
光保藏菌落为黄色，黑暗保藏菌落为淡黄色。散射
光保藏菌丝气生性中等，菌丝不瘠薄也不徒长，生长
速度均匀，边缘整齐，这样的菌落子实体的形成能力
强。在 15 /10 ℃条件下保藏时间长短对菌株稳定性
的影响较为显著，保藏 60 d 后菌落角变面积率增
大，菌丝干重低，可见在此温度条件下保藏时间不宜
超过 60 d。在 10 ℃ /5 ℃保藏时，保藏时间影响不
显著，因此可以继续延长保藏时间。菌株在不同温
度、光照、保藏时间下，菌落均出现了不同程度的角
变现象，菌落角变现象的出现意味着菌株发生了遗
传变异，其变异机制主要与异核现象有关。菌株在
固体培养基上菌落出现了角变区，是异核体发生分
解的一个重要标志［9，10］。
本试验发现，尖顶羊肚菌在 10 ℃ /5 ℃、散射光
条件下保藏 30 d，菌落角变面积小，说明在尖顶羊肚
菌菌种保藏过程中，选择合适的外界条件，亦可以防
止异核体分解和同核体的累积，从而确保形成优势
子实体的能力。
95013 期 侯志江等:菌种保藏条件对尖顶羊肚菌(Morchella conica)菌丝生长的影响
在短期保藏尖顶羊肚菌菌种方面虽然能有最适
宜的保藏条件，但保藏的时间仍然较为短暂，对生产
实际造成了不利因素，因而能够延长尖顶羊肚菌菌
种的短期保藏时间对于尖顶羊肚菌的生产乃至其他
食用菌的生产都会起到积极的作用。因此，如何能
够延长尖顶羊肚菌菌种的短期保藏时间还有待于下
一步的研究。
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(责任编辑 王家银)
0601 西 南 农 业 学 报 25 卷