全 文 :收稿日期:2000-06-21初稿;2000-08-09修改稿
食用菌学报 2000.7(3):31~ 36
Acta Edulis Fungi
金耳糖肽胶囊的基础药理学研究
孟丽君 赵玉明 刘芰华 潘佩平
(山西省生物研究所 , 太原 030006)
刘光珍 冯玛莉 武玉鹏 杨艳华
(山西省中医研究院 , 太原 030000)
摘 要 药理学研究表明 ,金耳糖肽胶囊能抗动物肝损伤 、保护肝细胞 、降低转氨酶 , 其作用
明显优于对照组(P<0.05),还能调节动物细胞生物活性 ,提高机体的代谢水平 , 增强免疫力 , 与对
照组相比差异显著(P<0.01)。此外 ,金耳糖肽可提高动物的应激能力 , 说明该胶囊主要是通过保
护肝细胞 ,调节或稳定细胞功能活动 , 提高免疫力和机体的应激能力来防治肝炎等慢性疾病的。
关键词 金耳糖肽胶囊;基础药理;细胞生物活性;代谢水平;免疫力
金耳(Tremel la aurant ialba)是著名的食(药)兼用菌 ,其性温中带寒 ,味甘 ,具有化痰 、止
咳 、定喘理气之功效 。能平肝阳 ,理肺热 ,主治感冒咳嗽 、痰多气喘 、高血压 、神经衰弱等疾
病〔1〕 。《蕈菌医方集成》记载可治疗多种疾病〔2〕 。
金耳糖肽胶囊是以 8254金黄银耳菌株 ,通过深层发酵 ,科学精制而成〔3〕 。经临床初步验
证 ,对消除衰老症状 ,防治某些老年病及恢复肝功能 ,增强免疫功能 ,减轻肿瘤放 、化疗的毒副
作用有较满意的疗效 ,为探讨其作用机理 ,对其进行了基础药理实验 ,现将结果报道如下 。
1 材料和方法
1.1 供试样品
金耳糖肽胶囊由山西省生物研究所提供 ,将其制成 60%的口服液 ,贮于 4℃冰箱供试验
用。
1.2 其它试剂
香菇多糖片 ,武汉汉南制药厂生产;EDTA ,北京化工厂生产;I125-cAMP(cGMP 放射免
疫试剂盒),上海中医学院同位素室提供;其它试剂均为市售分析纯。
1.3 受试动物
小鼠(昆明种)体重 18 ~ 22g ,雌雄兼用 ,由山西省中医研究院动物室提供 。
1.4 实验方法〔4 ~ 6〕
1.4.1 对免疫功能的影响
1.4.1.1 对小鼠免疫器官重量的影响 取 40 只小鼠 ,随机分为四组 ,各鼠 ig 给药 ,每天 1
次 ,连续 1周。金耳高 、低剂量组分别为 12g/kg 、6g/kg ,香菇多糖组为 25mg/kg ,对照组予以
DOI :10.16488/j.cnki.1005-9873.2000.03.007
等容积生理盐水 ,于第 7 天将小鼠颈椎脱臼处死 ,取胸腺和脾脏称重 ,分别计算其湿重指数
(g/10g体重)。
1.4.1.2 对小鼠腹腔巨噬细胞(M )吞噬功能的影响 实验分组 ,给药方法同 1.4.1.1 ,于末
次给药后 2h ,各组小鼠每只均腹腔注射 5%鸡红细胞(CRBC)悬液 0.5mL , 12h 后 ,处死动物 ,
剪开腹壁皮肤 ,注射生理盐水 2mL ,轻轻按揉腹部 , 2min后腹腔洗液平铺于载玻片上 , 37℃孵
育30min ,用生理盐水冲去游离细胞吹干 , 用 1:1 丙酮-甲醇固定 , Giemsa -Wright 染色
3min ,干后油镜镜检 ,计算 200个腹腔 M 吞噬 CRBC 的百分率和吞噬指数。
1.4.1.3 对小鼠单核吞噬细胞碳粒廓清功能的影响 小鼠 50只 ,随机分为五组 ,给药组每天
ig 一次;对照组与环磷酰胺免疫抑制模型组予以等容积生理盐水 ,连续 7d。除对照组外 ,其余
各组小鼠均分别于第 4 、第 6 天按当日实际体重腹腔注射新鲜配制的环磷酰胺(CTX)溶液
60mg/kg ,于第 7 天给药后 30min 尾静脉注射 20%印度墨汁 0.1mL/10g , 于注射后 2min 、
22min分别从眶后静脉丛取血 20μL 溶于 0.1%Na2CO3 溶液中摇匀 ,置 721型分光光度计波
长 600nm 处比色 ,测定光密度(OD)。最后将小鼠脱臼处死 ,分别称取肝 、脾重量 ,按下列公式
计算廓清指数 K或校正廓清指数(吞噬活性)。
K = l0gOD1 -l0gOD2
t2 -t1
α= 3 k×体重 /(肝重 +脾重)
1.4.1.4 对CRBC免疫小鼠溶血素抗体生成的影响 取 60只小鼠 ,随机分为六组 ,给药组每
日灌胃给药(ig)1次 ,对照组予以等量生理盐水 ,连续 7d ,除对照组和金耳正常组外 ,其余各组
均于第 3 、第 5天腹腔注射 CTX液 60mg/kg 二次;另于给药后第 2天 ,各组小鼠每只分别腹腔
注射 20%CRBC悬液 0.2mL ,免疫 5d后 ,各组小鼠眼眶取血 ,收集血清 ,用生理盐水稀释血清
100倍 ,加入 10%CRBC 0.5mL和 10%豚鼠血清 1mL ,另设空白对照管(以生理盐水代血清)
和CRBC半数溶血管 ,经 37℃孵育 30min和冰浴中冷却 15min后 , 2000r/m 离心 10min ,取上
清液 2mL 加等量生理盐水混匀 ,在 721 型分光光度计 540nm 处比色 ,记录光密度 ,计算小鼠
血清样本的半数溶血值(HC50)。
样本 HC50 = 样本吸光度值CRBC半数溶血时的吸光度值 ×稀释倍数
1.4.2 对小鼠血浆中核苷酸 cAMP 、cGMP 含量的影响
取36只小鼠 ,随机分为三组 ,给药组每天 ig 金耳 12g/kg ,对照组与模型(L -T 4)组连续
7d予以等容积生理盐水 ,给药后第 3天 ,除空白对照组外 ,其余 2组每只分别开始皮下注射甲
状腺素 T 4 0.6mg 5d。于第 8天小鼠眼眶取血 ,加入内含 50μL EDTA抗凝剂的试管中 ,摇匀 、
离心 、取血浆 100μL ,加入 2mL 无水乙醇 ,振摇 ,静止 5min后离心 ,取出上清液 ,残渣再用 1mL
75%乙醇提取一次。合并上清液 ,在 60℃水浴中蒸干制样待测 ,用放射免疫分析(RIA)法测定
样品的 cAMP 、cGMP 含量(pmol/mL)。
1.4.3 对小鼠急性 CCl4 肝损伤的影响
1.4.3.1 对血清ALT 活性的影响 取 50只小鼠 ,随机分为五组 ,给药组每天 ig 1次 ,对照组
与模型组予以等容积生理盐水 5d。末次给药后 ,除对照组外 ,其余各组分别腹腔注射0.1%的
32 食 用 菌 学 报 7 卷
CCl4 花生油溶液 10mL/kg 1次 ,16h后眼眶静脉取血 ,测定血清 ALT 活性 。
1.4.3.2 对肝脏形态学的影响 上述 CCl4 肝损伤小鼠处死 ,剖取肝组织 ,4%甲醛固定 ,常规
染色切片 ,光镜下检查 ,观察结果。
1.4.4 对小鼠体重和体力的影响
1.4.4.1 对体重的影响 取 72只小鼠 ,随机分为三组 ,给药组每天分别 ig 金耳溶液 6g/kg ,
12g/kg ,对照组予以等体积生理盐水 ,共 9d ,称其体重。
1.4.4.2 对爬绳时间的影响 分别选取 12只上述各组小鼠 ,进行爬绳训练 3次 ,正式实验 ,
记录其爬绳持续时间 。
1.4.4.3 对游泳时间的影响 各组小鼠在水温 20℃,水深 20cm 的水桶中自由游泳 ,使其力
竭 ,头全部淹没水面 ,不再挣扎上浮为止 ,记录游泳时间 。
2 结果与分析
2.1 对免疫功能的影响
2.1.1 对小鼠免疫器官重量的影响
经统计分析 ,金耳组小鼠免疫器官重量与对照组相比有显著差异(表 1)。
表 1 对小鼠免疫器官重量的影响(X±SD)
Table 1 Effect on mouse immune organ weight(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) 胸腺指数(%)Thymus index 脾指数(%)Spleen index(%)
对照
Cont rol
10 0 0.0279±0.0016 0.0416±0.0084
金耳组
Tremella auran tia lba group
10
10
6
12
0.0312±0.0079
0.0372±0.0067**
0.0482±0.0073
0.0551±0.0008**
香菇多糖组
LTN g roup
10 25mg 0.0299±0.0085 0.0493±0.0001**
注:与对照组比较 , **P<0.01 Note:Compared with the cont rol , P<0.01
2.1.2 对小鼠腹腔巨噬细胞(M )吞噬功能的影响
经统计分析 ,金耳组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数与对照组相比 ,均有显著
性差异(表 2)。
表 2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(X±SD)
Table 2 Effect on the phagocytic function of mousy abdominal cavi ty macrophage(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) 吞噬百分率(%)Phagocytic rate(%) 吞噬指数(%)Phagocytic index(%)
对照
Cont rol
9 0 29.4±5.5 0.409±0.074
金耳组
Tremella auran tia lba group
10
10
6
12
30.7±6.5
39.4±5.1*
0.510±0.101*
0.543±0.107*
香菇多糖组
LTN g roup
10 25mg 43.5±8.8** 0.611±0.052*
注:与对照组比较 , *P<0.05 , **P<0.01 Note:Compared with the cont rol , *P<0.05 , **P<0.01
2.1.3 对小鼠单核细胞碳粒廓清功能的影响
经统计分析 ,金耳组小鼠单核细胞吞噬活性与环磷酰胺模型组小鼠相比差异显著(表 3)。
333 期 孟丽君等:金耳糖肽胶囊的基础药理学研究
表 3 对小鼠单核细胞碳粒廓清功能的影响(X±SD)
Table 3 Effect on carbon granule sweeping away function of mousy uninuclear cell(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) K 值(×10
-3)
K value
α值αvalue
对照
Cont rol
10 0 10.43±2.57** 4.29±0.04**
金耳组
Tremella aurant ialba group 10 12 8.96±2.43** 4.87±1.15**
环磷酰胺组
CTX group
10 0 2.80±0.91 2.26±0.45
环磷酰胺+金耳组
CTX+T .aura ntialba g roup 1010 612 6.14±1.87
**
7.35±2.01**
3.41±0.69**
3.30±0.48**
注:与环磷酰胺模型组比较 , **P<0.01 Note:Com pared w ith the CTX model group , **P<0.01
2.1.4 对 CRBC 免疫小鼠血清溶血素抗体生成的影响
经统计分析 ,金耳组小鼠血清溶血素抗体与环磷酰胺免疫抑制模型组相比 ,有显著差异
(表 4)。
表 4 对小鼠血清溶血素抗体生成的影响(X±SD)
Table 4 Effect on the production of mouse serum hemolysin antibody(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg)
HC50
HC50
对照
Cont rol
10 0 610±65.83*
金耳组
Tremella aurant ialba group 10 12 645±55.03*
环磷酰胺组
CTX group
10 60mg 265.5±57.66
环磷酰胺+金耳组
CTX+Tremella aurant ialba group 1010 60mg+660mg+12 529.5±64.05
**
536.0±50.59**
环磷酰胺+香菇多糖组
CTX+LTN group 10 60mg+25mg 505.5±79.48**
注:与环磷酰胺免疫抑制模型组比较 , **P<0.01 Note:Compared w ith the CTX model group , **P<0.01
2.2 对小鼠血浆中核苷酸 cAMP 、cGMP 含量的影响
经统计分析 ,金耳组小鼠血浆中核苷酸 cAMP 、cGMP 含量与甲状腺素模型组相比有较显
著差异(表 5)。
表 5 对血浆 cAMP 、cGMP含量的影响(X±SD)
Table 5 Effect on the content of cAMP and cGMP in plasma(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals cAMP含量(pmol/mL)cAMP content(pmol/mL) cGMP 含量(pmol/mL)cGMP content(pmol/mL) cAMP/ cGMPcAMP/ cGMP
对照
Cont rol
12 119.21±32.70* 71.02±13.97** 1.68±0.36**
L-T4 模型组
L-T4model group 12 150.45±29.77 127.07±17.59 1.18±0.24
L-T4 模型+金耳组
L-T4 model+T.aurantialba group 12 115.79±34.03* 71.49±13.04** 1.60±0.31**
注:与 L-T4 模型组比较 , **P<0.01 Note:Compared with the L-T 4model group , **P<0.01
2.3 对小鼠急性 CCl4肝损伤的影响
2.3.1 对血清 ALT 活性的影响
经统计分析 ,金耳组小鼠血清 ALT 活性与四氯化碳模型组比较有显著差异(表 6)。
34 食 用 菌 学 报 7 卷
2.3.2 对肝脏形态学的影响
结果显示 , CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏的肝细胞变性坏死严重 ,并发现肝小叶中央坏死 ,
胆总管狭窄 ,而给金耳的二组动物 ,其肝组织变性坏死的程度均较CCl4 肝损伤模型组为轻 。
表 6 对血清ALT活性的影响(X±SD)
Table 6 Effect on serum ALT activity(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) ALT(u)ALT(u)
对照
Cont rol
10 0 33.6±64.02
CCl4 模型组
CCl4 model group
10 0 117.4±17.18
CCl4+金耳组
CC l4model+T .auran tia lba group
10
10
10
6
12
0.2
76.3±15.16**
80.20±18.25**
48.8±16.19**
注:与四氯化碳模型组比较 , **P<0.01 Note:Com pared w ith the CCl4 model group , **P<0.01
2.4 对小鼠体重和体力的影响
经统计分析 ,与对照相比 ,金耳组小鼠的体重及爬绳 、游泳时间均无显著差异 ,但均有增高
趋势(表 7 、表 8 、表 9)。
表 7 对小鼠体重的影响(X±SD)
Table 7 Effect on mouse weight(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) 体重增加值(kg)Increment in weigh t(kg)
对照
Cont rol
24 0 8.1±0.7
金耳组
Tremella auran tia lba group
24
24
6
12
9.1±0.7
9.4±0.8
表 8 对小鼠爬绳时间的影响(X±SD)
Table 8 Effect on mouse rope-crawling time(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) 爬绳时间(min)Rope-craw ling t ime(min)
对照
Cont rol
11 0 2.66±1.54
金耳组
Tremella auran tia lba group
9
12
6
6
3.61±1.66
3.46±1.69
表 9 对游泳时间的影响(X±SD)
Table 9 Effect on mouse swimming time(X±SD)
组别
Groups
动物数(只)
No.of animals 剂量(g/ kg)Dose(g/ kg) 游泳时间(min)Swimming time(min)
对照组
Cont rol
12 0 8.11±2.39
金耳组
Tremella auran tia lba group
12
12
6
12
9.03±3.09
10.12±4.16
353 期 孟丽君等:金耳糖肽胶囊的基础药理学研究
3 讨论
随着医学的发展 ,逐渐认识到免疫系统与神经系统 、内分泌系统一样 ,是人体生理基本调
节系统的重要组成因素。肝炎 、肿瘤等多种疾病的发生 ,都是由于免疫功能低下或紊乱所致 。
研究表明 ,金耳能显著增加小鼠胸腺和脾脏的重量 ,增强巨噬细胞吞噬功能 ,提高血清溶素抗
体水平 ,从而有提高机体免疫功能的作用。因此 ,利用金耳防治肝炎等疾病有一定意义 。其
次 ,金耳能调节细胞 cAMP/cGMP 生成水平 ,而 cAMP/cGMP 在体内有广泛的生物活性 ,对许
多细胞的生理功能具有调控作用 ,其水平高低与机体的代谢活动密切相关。金耳对于调节
cAMP/cGMP 水平 ,稳定细胞生理功能具有重要意义。特别是金耳具有对抗 CCl4 肝损伤 ,保
护肝细胞 ,降低转氨酶的作用 。而保护肝细胞免受致病因素的损害 ,恢复其功能 ,是临床治疗
肝炎的重要目标 。加上该药的抗应激作用 ,亦能增强动物的体力 。故认为 ,金耳主要是通过保
护肝细胞 ,调节或稳定细胞功能活动 ,提高免疫力等作用来防治肝炎等疾病的。这些可能是金
耳防治肝炎等疾病的主要药理学基础。
参 考 文 献
1 刘波.中国药用真菌(第三版).太原:山西人民出版社 , 1984.37 ~ 41.
2 陈士瑜等.蕈菌医方集成.上海:上海科学技术文献出版社 , 2000.68 ~ 71.
3 孟丽君等.保健型金耳胶囊的研制.中国食用菌 , 1999 ,(3):35 ~ 36.
4 李仪奎等.中药药理实验方法学.上海:上海科学技术出版社 , 1991.155~ 159.
5 徐叔云等.药理实验方法学(第二版).北京:人民卫生出版社 , 1991.333~ 334.
6 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社 , 1993.836~ 837.
Basic Pharmacological Studies on
Tremella aurantialba Polysaccharide-Peptide Capsule
Meng Lijun Zhao Yuming Liu Jihua Pan Peiping
(Shanxi Institute of Biolog y , Taiyuan 030006)
Liu Guangzhen Feng Mali Wu Yupeng Yang Yanhua
(Shanxi Academy of Traditional Chinese Medicine , Taiyuan 030000)
Abstract Pharmaco logical studies showed that Tremella aurantialba polysaccharide-peptide capsule had su-
perior effects(P<0.05)on resisting animal liver damage , protecting liver cells , reducing the level of transaminase to
the controls , and tha t it also had significant effects(P<0.01)on regulating bioactivity of animal cells , enhancing
the body metabolism level and improving the immunity function , w hich were remarkably different than the controls.
Besides , the capsule could increase animal ir ritable ability.These results indicate that the prevention and cure of
chronic diseases such as hepatitis by the capsule are through pro tecting liver cells , regulating or stabilizing the func-
tio nal activity of cells , improving the immunity and increasing the irritable ability of the body.
Key words Tremella aurantialba polysaccharide-peptide capsule;Basic pharmacolog y;Bioactivity of cell;
Metabolism level;Immunity
36 食 用 菌 学 报 7 卷