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甘肃瑞香提取物对菜粉蝶幼虫生物活性的影响



全 文 :2014年8月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第4 9卷
第4期83~87 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 双 月 刊
甘肃瑞香提取物对菜粉蝶幼虫生物活性的影响
杨航宇,冉福祥
(甘肃林业职业技术学院,甘肃 天水 741020)
摘要:为探明甘肃瑞香(Daphne tangutica Maxim)对菜粉蝶幼虫的生物活性,以甘肃瑞香的全株、叶、茎皮、茎
木质部、根皮和根木质部为研究对象,以甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、苯和石油醚为溶剂,采用索氏法提取其活性成
分,明确其最佳的杀虫活性部位和提取溶剂.结果表明:在干粉100mg/mL的质量浓度下,各溶剂瑞香全株的提取
物均对菜粉蝶幼虫表现出明显的拒食、胃毒和触杀作用,其中苯的提取效果最好,其粗提物对菜粉蝶5龄幼虫24h
的拒食率为92.29%,胃毒作用的LD50为19.56μg/头,7d后触杀作用的LD50为52.56μg/头.甘肃瑞香不同部位
的苯提取物对菜粉蝶5龄幼虫均表现出明显的拒食、胃毒和触杀作用,其活性部位表现为甘肃瑞香叶>根皮>茎
皮>茎木质部>根木质部.甘肃瑞香叶粗提物杀虫活性最高,其粗提物对菜粉蝶5龄幼虫24h的拒食率为
94.59%,胃毒作用的LD50为8.47μg/头;7d后触杀作用的LD50为50.41μg/头.
关键词:甘肃瑞香提取物;菜粉蝶幼虫;生物活性
中图分类号:S 443.4    文献标志码:A     文章编号:1003-4315(2014)04-0083-05
第一作者:杨航宇(1978-),男,副教授,硕士,主要从事植物源农药的开发与研究.E-mail:yhy-780601@163.com
通信作者:冉福祥,男,教授,硕士,主要从事经济管理的教学与研究.E-mail:ranfux@163.com
基金项目:甘肃省高等学校项目(2013B-113).
收稿日期:2013-09-17;修回日期:2013-12-18
Study on the biological activities of extracts
from Daphne tangutica Maxim against
Pieris rapae larvae
YANG Hang-yu RAN Fu-xiang
(Gansu Forestry Technology Colege,Tianshui 741020,China)
Abstract:To explore biological activities of Daphne tangutica Maxim on Pieris rapae larvae,the whole
plant,leaves,barks,stem xylems,root barks and root xylems of D.tangutica were selected as subject of the
study.The active components from the whole plant,leaves,barks,stem xylems,root barks and root xylems
of D.tanguticaextracted by Soxhlet method to make sure the optimal activity parts of D.tanguticaand the
best solvents against P.rapae larvae.Results showed that these extracts with the concentration of dried
powder 100mg/mL of the whole plant of D.tangutica hadsignificantly antifeeding effect,stomach toxicity
and contact effect against P.rapaelarvae.The benzene acts as the optimal solvent among of methanol,eth-
anol,ethyl acetate,chloroform,benzene and petroleum.The anti-feeding rates with 24hours,LD50of stom-
ach toxicity and contact effect after 7days of the extracts of D.tangutica with benzene were 92.29%,
19.56μg/larve and 52.56μg/larve,respectively.These extracts from different parts of D.tangutica with
benzene had significantly antifeeding effects,stomach toxicity and contact poisoning against the 5th-instar
larvae of P.rapae.The insecticidal activity on different parts of D.tanguticalisted as folows:leaf>root
bark>bark>stem xylem >root xylem.The insecticidal activity of leaf was higher than other parts of
DOI:10.13432/j.cnki.jgsau.2014.04.015
甘 肃 农 业 大 学 学 报 2014年
D.tangutica,in which the anti-feeding rates with 24hours,LD50of stomach toxicity and contact effect after
7days of leaf extracts of D.tangutica with benzene were 94.59%,8.47μg/larve and 50.41μg/larve,re-
spectively.
Key words:extracts of Daphne tangutica Maxim;Pieris rapae larvae;biological activity
  植物源农药属于天然药物,能迅速降解,具有高
选择性,对人畜安全,而且不易产生抗性,无药害,有
肥效,对作物生长有刺激作用,可兼治病虫害.因此,
植物源农药越来越受到人们的重视,目前已成为开
发新农药的一个重要方向.甘肃瑞香(Daphne tan-
gutica Maxim)又叫唐古特瑞香,为瑞香科(Daph-
negenus)瑞香属(Daphne)植物,是一种常绿小灌
木,主要分布在甘肃迭部、舟曲、卓尼、天水、武都、文
县等地[1],其干燥茎皮及根皮入药叫祖师麻.现代药
理学研究表明,瑞香全株提取物含多种药用有效成
分,主要为香豆素类、木脂素类、二萜内酯类、酚酮
类、蒽醌类等[2],具有镇痛、活血、消肿、祛风湿的作
用,俗称“打得满地爬,离不开祖师麻”,故有“大救
驾”之称.甘肃瑞香除作为民间草药,其更重要的用
途是作为一种新型的植物源农药,具有良好的杀虫
作用[3].王海丽等[4]研究报道,唐古特瑞香叶甲醇提
取物对菜粉蝶有较强的拒食作用和较高的毒杀活
性,以及唐古特瑞香花甲醇提取物具有很强的触杀、
胃毒作用,并有一定的拒食作用;陈立等[5-6]研究表
明,唐古特瑞香的甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、苯、石
油醚抽提物中,苯抽提物对斜纹夜蛾3龄幼虫的拒
食活性最高.综上所述,前人对甘肃瑞香的研究主要
集中在叶和花,防治对象主要是夜蛾幼虫,涉及全株
和茎皮、茎木质部、根皮、根木质部提取物对菜粉蝶
幼虫毒杀作用的研究较少.鉴于此,本研究以不同极
性的甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、苯、石油醚为溶剂对
生长在甘肃天水的甘肃瑞香的全株、叶、茎皮、茎木质
部、根皮、根木质部进行了抽提,探究各提取物对菜粉
蝶(Pieris rapae)幼虫生物活性的影响,明确了甘肃瑞
香提取物的最佳提取溶剂和活性部位,以期为进一步
开发与研制新型高效杀虫剂提供科学依据.
1 材料与方法
1.1 供试植物材料
甘肃瑞香植株采自天水市麦积山土桥沟,采集
时间为2008年5月14日.
1.2 供试昆虫及饲养
供试昆虫为菜粉蝶(Pieris rapae)幼虫.将天水
市甘泉镇蔬菜地采集的低龄幼虫,在玻璃网室内用
甘蓝(Brassica oleracea)叶饲养,饲养后挑选整齐一致
的4龄和5龄幼虫供试.室内饲养条件为温度(28±
1)℃,相对湿度(80±5)%,光周期L∶D=16h∶8h.
1.3 试验方法
1.3.1 试验材料的提取 将阴干的甘肃瑞香材料
放至80℃恒温箱中干燥8h,粉碎,过40目筛(d=
0.37mm)后密封,植物材料的提取采用索氏(Sohx-
let)提取法,用6种极性不同的溶剂连续回流提
取[7],提取物在旋转蒸发器内减压浓缩至稠膏状,称
抽提物质量,置于4℃冰箱中保存备用.各种抽提物
用丙酮溶解,根据提取率大小,所配制质量浓度均以
干粉计100mg/mL.
1.3.2 生物活性的测定 
1.3.2.1 拒食作用测定 将新鲜的甘蓝叶片用圆
形打孔器(d=2cm)打成叶碟,放入到供试样品的
丙酮稀释液中(粗提物先用少量水热溶,然后用丙酮
稀释到所需的质量浓度)浸3s,让丙酮挥发掉,
30min后放入培养皿中(d=9cm,内垫滤纸,加少
量蒸馏水保湿)然后放入饥饿6h的菜粉蝶5龄幼
虫1头,重复5次,另设对照,对照仅用纯丙酮处理.
24h后用LI-3000型叶面积测定仪测定取食叶面
积,更换新鲜处理叶碟.48h后再调查取食叶面积,
更换新鲜叶碟继续观察试虫的反应.据此计算幼虫
取食叶面积和拒食率,然后依照拒食率计算出
AFC50(拒食中质量浓度)的值,并根据处理后5d和
10d试虫的死亡情况计算校正死亡率.
拒食率(%)=
对照组取食叶面积-处理组取食叶面积
对照组取食叶面积 ×100%
拒食中浓度(AFC50)的测定方法:按照拒食活
性大小,采用对半稀释法稀释5个质量浓度测得拒
食率,再将拒食率转化成机率值,质量浓度转化成对
数,计算回归方程和相关系数,根据回归方程求得
48
第4期 杨航宇等:甘肃瑞香提取物对菜粉蝶幼虫生物活性的影响
AFC50值[8].
1.3.2.2 胃毒作用测定 用微量点滴仪将一定量
的各 溶 剂 提 取 液 分 别 涂 在 甘 蓝 叶 碟 上 (d=
0.5cm),待药剂挥发掉后,用1%明胶溶液分别把
带药的叶面积和另一无毒叶片粘合成夹毒叶碟,放
入直径为9cm的培养皿内(垫有滤纸保湿).每皿放
入饥饿6h的5龄幼虫1头,待其取食完处理叶碟
后换新鲜叶碟,每组10头,重复3次,共30头虫.对
照组幼虫用纯丙酮处理过的无毒叶碟饲养,分别于
12、24和48h后调查死亡结果,并计算出LD50值.
昆虫的死亡率由以下公式计算:
死亡率(%)=
死亡虫数
供试总虫数×100%
校正死亡率(%)=
对照组死亡率-处理组死亡率
1-处理组死亡率 ×100%
1.3.2.3 触杀作用测定 选取健康一致的菜粉蝶
4龄和5龄幼虫,将各溶剂提取物用微量点滴器点
滴于幼虫的前胸背板,每虫点滴1μL,以丙酮为对
照(CK),并饲喂新鲜甘蓝叶,每隔2d换一次新鲜
饲料.处理后的幼虫置于垫有吸水纸的培养皿中,每
处理30头虫,重复3次,7d后检查试虫死亡结果,
并计算出LD50值.
2 结果与分析
2.1 甘肃瑞香6种溶剂抽提物对菜粉蝶5龄幼虫
的拒食作用
从表1可以看出,甘肃瑞香全株不同溶剂的抽
提物对菜粉蝶5龄幼虫均有很强的拒食作用,在干
粉100mg/mL质量浓度下,拒食率均在80%以上.
48h 后,苯抽提物的拒食作用最强,拒食率达
93.73%;氯仿、乙酸乙酯和丙酮抽提物的拒食作用
次之,拒食率分别为91.98%、88.17%和87.72%;
甲醇和石油醚抽提物的拒食作用最低,拒食率分别
为85.41%和81.04%.可见,从拒食作用来看,甲
醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、苯和石油醚对甘肃瑞香的
抽提效果中,苯的抽提效果最佳.
表1 甘肃瑞香6种溶剂抽提物对菜粉蝶5龄幼虫的拒食作用
Tab.1 Antifeedant effect of 6solvent extracts of D.tanguticaagainst the 5th-instar larvae of P.rapae %
抽提物 提取率
拒食率
24h 48h
校正死亡率
5d 10d
甲醇 22.32±2.71  86.60  85.41  33.14  63.97
丙酮 16.83±2.51  86.82  87.72  36.71  75.08
乙酸乙酯 10.23±2.45  91.37  88.17  29.57  71.37
氯仿 3.70±0.66  89.60  91.98  40.28  82.48
苯 3.44±0.80  92.29  93.73  43.86  86.19
石油醚 2.20±0.60  83.16  81.04  22.43  34.33
2.2 甘肃瑞香6种溶剂抽提物对菜粉蝶5龄幼虫
的胃毒作用
从表2可以看出,甘肃瑞香6种溶剂抽提物对
菜粉蝶幼虫有明显的胃毒作用,且胃毒作用随着时
间的延长而增加.48h后,苯抽提物的胃毒作用最
强,LD50为9.47μg/头,石油醚抽提物的胃毒作用
最弱,LD50为12.58μg/头.从胃毒作用来看,甲醇、
乙酸乙酯、丙酮、氯仿、苯和石油醚对甘肃瑞香的抽
提效果中,苯的抽提效果最佳.
2.3 甘肃瑞香6种溶剂抽提物对菜粉蝶4和5龄
幼虫的触杀作用
从表3可以看出,甘肃瑞香6种溶剂抽提物对
菜粉蝶4龄幼虫触杀作用较强,而对5龄幼虫触杀
作用较差.可见,随着幼虫虫龄的增长触杀作用有所
表2 甘肃瑞香6种溶剂抽提物对菜粉蝶
5龄幼虫的胃毒作用
Tab.2 Stomach toxicity of 6solvent extracts of
D.tanguticaagainst the 5th-instar larvae of P.rapae
抽提物 提取率/%
药后不同时间的LD50/
(μg·头
-1)
12h 24h 48h
甲醇 22.32±2.71  56.95  22.40  12.30
丙酮 16.83±2.51  55.43  21.82  11.85
乙酸乙酯 10.23±2.45  54.23  21.02  11.15
氯仿 3.70±0.66  55.05  21.23  11.35
苯 3.44±0.80  48.55  19.56  9.47
石油醚 2.20±0.60  57.05  22.76  12.58
减弱.7d后,苯抽提物对4和5龄幼虫触杀作用最
强,LD50分别为2.15μg/头和52.56μg/头;石油醚
抽提物的触杀作用最低,LD50分别为3.23μg/头和
58
甘 肃 农 业 大 学 学 报 2014年
54.35μg/头.从触杀作用来看,甲醇、乙酸乙酯、丙
酮、氯仿、苯和石油醚对甘肃瑞香的抽提效果中,苯
的抽提效果最佳.
表3 甘肃瑞香6种溶剂抽提物对菜粉蝶4和
5龄幼虫的触杀作用
Tab.3 Contact toxicity of 6solvent extracts of D.tangutica
against the 4,5th-instar larvae of P.rapae
抽提物 提取率/%
7d后的LD50/
(μg·头
-1)
4龄 5龄
甲醇 22.32±2.71  3.12  54.13
丙酮 16.83±2.51  2.84  53.08
乙酸乙酯 10.23±2.45  2.52  52.98
氯仿 3.70±0.66  2.85  53.12
苯 3.44±0.80  2.15  52.56
石油醚 2.20±0.60  3.23  54.35
2.4 甘肃瑞香不同部位苯抽提物及甲醇萃取物对
菜粉蝶5龄幼虫的拒食作用
从表4可以看出,甘肃瑞香不同部位的苯抽提
物对菜粉蝶5龄幼虫均有拒食活性,在100mg/mL
质量浓度下,根皮、根木质部、茎皮、茎木质部、叶片
24h的拒食率分别为89.68%、67.82%、79.58%、
70.61%、94.59%.杀虫活性部位顺序为叶>根皮>
茎皮>茎木质部>根木质部.由表5可知,苯抽提后
的不同部位再用甲醇抽提,尽管提取率较高,但根
皮、根木质部、茎皮、茎木质部的甲醇抽提物的活性
均很低,说明苯能够较好地抽提出这些部位的活性
物质.而叶的甲醇抽提物仍有较高的活性,48h的
拒食率达到80.03%,校正死亡率也达到72.08%,
这些结果进一步说明甘肃瑞香的杀虫活性物质主要
存在于叶中.
表4 甘肃瑞香不同部位的苯抽提物对菜粉蝶5龄幼虫的拒食作用
Tab.4 Antifeedant effect of benzene extracts from different parts in D.tanguticaagainst
the 5th-instar larvae of P.rapae %
部位 提取率
拒食率
24h 48h
校正死亡率
5d 10d
根皮 2.62±0.42  89.68  84.37  17.74  43.36
根木质部 0.93±0.05  67.92  59.58  10.51  36.21
茎皮 3.00±0.54  79.58  72.02  21.19  50.50
茎木质部 1.33±0.37  70.61  64.23  14.30  36.21
叶 3.50±0.23  94.59  91.58  24.64  64.79
表5 甘肃瑞香不同部位苯-甲醇抽提物对菜粉蝶5龄幼虫的拒食作用
Tab.5 Antifeedant effect of benzene-methanol extracts from different parts in D.tangutica
against the 5th-instar larvae of P.rapae %
部位 提取率
拒食率
24h 48h
校正死亡率
5d 10d
根皮 23.79±3.58  31.70  34.82  27.57  49.00
根木质部 8.84±0.99  31.86  30.75  16.85  33.61
茎皮 8.76±2.89  56.15  46.92  24.00  37.47
茎木质部 8.42±0.70  29.44  23.41  16.85  25.93
叶 11.84±2.34  75.79  80.03  20.43  72.08
2.5 甘肃瑞香不同部位苯抽提物对菜粉蝶5龄幼
虫的胃毒作用
从表6可以看出,甘肃瑞香不同部位的苯抽提
物对菜粉蝶5龄幼虫均有胃毒作用,在100mg/mL
质量浓度下,作用24h,甘肃瑞香叶、根皮、茎皮、茎
木质部、根木质部的苯抽提物对菜粉蝶5龄幼虫胃
毒作用的LD50分别为17.56、18.40、18.79、20.23、
22.82μg/头.从胃毒作用效果来看,甘肃瑞香杀虫
活性部位顺序为叶>根皮>茎皮>茎木质部>根木
质部.
2.6 甘肃瑞香不同部位苯抽提物对菜粉蝶5龄幼
虫的触杀作用
从表7可以看出,甘肃瑞香不同部位的苯抽提
物对菜粉蝶5龄幼虫均有触杀作用,其中叶的苯抽
提物触杀作用最强,LD50为50.41μg/头;根木质部
苯抽提物的触杀作用最低,LD50为57.08μg/头.
68
第4期 杨航宇等:甘肃瑞香提取物对菜粉蝶幼虫生物活性的影响
表6 甘肃瑞香不同部位的苯抽提物对
菜粉蝶5龄幼虫的胃毒作用
Tab.6 Stomach toxicity of benzene extracts from
different parts in D.tanguticaagainst
the 5th-instar larvae of P .rapae
部位 提取率/%
药后不同时间的LD50/
(μg·头
-1)
24h 48h
根皮 2.62±0.42  18.40  9.30
根木质部 0.93±0.05  22.82  13.85
茎皮 3.00±0.54  18.79  9.76
茎木质部 1.33±0.37  20.23  10.35
叶 3.50±0.23  17.56  8.47
表7 甘肃瑞香叶的苯提物对菜粉蝶5龄
幼虫的触杀作用
Tab.7 Contact toxicity of benzene extracts from
different parts in D.tanguticaagainst the
5th-instar larvae of P.rapae
部位 提取率/%
7d后的LD50/
(μg·头
-1)
根皮 2.62±0.42  52.13
根木质部 0.93±0.05  57.08
茎皮 3.00±0.54  53.28
茎木质部 1.33±0.37  54.12
叶 3.50±0.23  50.41
3 讨论
植物的化学成分是非常复杂的,在未知某种植
物的活性成分的情况下,所选的提取溶剂合适与否,
直接关系到对抽提物的生物活性评价.本研究选择
极性由强到弱的6种溶剂对甘肃瑞香进行抽提,测
定抽提物对菜粉蝶幼虫的拒食、胃毒和触杀作用,发
现甘肃瑞香的苯抽提物活性最高,从而确定苯为最
佳的提取溶剂.然后用苯分别提取甘肃瑞香的叶、茎
皮、茎木质部、根皮、根木质部,结果发现叶的生物活
性最强,因而应对甘肃瑞香叶的苯抽提物作进一步
的研究,分析其杀虫活性成分,是开发与利用甘肃瑞
香作为植物源农药的关键之一.甘肃瑞香的化学成
分多[9],其主要为二砧内酯类和香豆素类化合
物[10-11],甘肃瑞香的毒性成分对菜青虫杀虫作用的
探索,是我们进一步研究的重要内容之一.
王海丽等[3-4]和陈立等[5-7]对生长在青藏高原的
唐古特瑞香提取物进行了研究,发现它们对斜纹夜
蛾和菜粉蝶幼虫有一定的杀虫活性.本研究针对生
长在甘肃天水的甘肃瑞香全株及其不同部位用不同
极性溶剂提取,测定了甘肃瑞香对菜青虫的生物活
性的影响,发现甘肃瑞香对菜青虫均有较好的拒食、
胃毒和触杀作用,其测定值比王海丽等[4]的报道高,
可能与甘肃瑞香的生长环境有关.同时,通过观察菜
青虫的发病症状(如:抽搐、痉挛、兴奋等),推测其可
能对昆虫神经系统有影响.
从全球发展趋势看,研究植物活性成分主要是
为了寻找供化学合成的先导活性化合物.下一步的
工作应以活性较高的提取物为基础,对提取物活性
成分进行分离、纯化及结构鉴定,从而人工合成,开
发与环境相容的植物源农药产品,为农业经济建设
更好的服务.
4 结论
研究表明,甘肃瑞香的甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯
仿、苯和石油醚提取物,在干粉100mg/mL的质量
浓度下,均对菜粉蝶幼虫表现出明显的拒食、胃毒和
触杀作用,其中苯的提取效果最好,其粗提物对菜粉
蝶5龄幼虫24h的拒食率为92.29%,胃毒作用的
LD50为19.56μg/头,7d后触杀作用的LD50为
52.56μg/头.甘肃瑞香不同部位的苯抽提物对菜粉
蝶5龄幼虫均表现出明显的拒食、胃毒和触杀作用,
其活性部位表现为甘肃瑞香叶>根皮>茎皮>茎木
质部>根木质部.甘肃瑞香叶粗提物杀虫活性最高,
其粗提物对菜粉蝶5龄幼虫24h的拒食率为
94.59%,胃毒作用的LD50为8.47μg/头;7d后的
触杀作用LD50为50.41μg/头.可见,甘肃瑞香对菜
粉蝶幼虫表现出明显的杀虫活性,是开发对环境友
好的生物源农药的一种重要材料.
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