全 文 ：第 19 卷第 4 期
19更)年 12 月
惠州大学学报 ( 自然科学版 )
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白蝉的离体繁殖
魏礼文 丁运华
(惠州大学理工学院 惠州 51 印 15)
摘 要
关键词
本文通过细致的实验建立 了快速繁殖常用绿化树种白蝉的技术 , 适宜的培
养基为 : 愈伤 组织 诱 导 M S + BA几 + N A九 , 6 , 不 定 芽分化 M s + BAP , +
N从 0 . 1 , 根分化 M S + BA OP . 3 + N A人〕. : , 对光和温度在培养过程中不 同生
长阶段的影响也作 了观察和分析 .
离体繁殖 , 白蝉 , 培养基 , 愈伤组织
1 前言
植物组织培养已成为植物快速繁殖的重要手段 , 而在众多的组织培养研究中 , 主要是对
优 良作物的种和名贵花卉研究较多 , 对常用的绿化树种则少有尝试 , 这是与生产发展不相适
应的 。 据此 , 笔者对茜草科中的一种优良绿化树种— 白蝉 ( C a记 en ia jas 而no ids s E il s ) 作了离体繁殖研究 , 并取得成功 。 从而为白蝉的规模性快速繁殖提供了可靠的方法 , 并为从事组
织培养研究者在研究茜草科这类植物时提供依据 。
2 材料与方法
2
.
1 材料
2
.
1
.
1 白蝉新梢 无菌水 75 % 酒精 , 0 . 1%升汞 。
2
.
1
.
2 培养基
( l) 诱导形成愈伤组织培养基
a
.
M s + 3 n l岁 L BAP + l m g/ L N AA
b
.
M s + 2 11娜 L B A P + 0 . 6 11娜 L N AA
e
.
M s + 111官 L B AP + 0 . 3 11娜 L NAA
以上三种培养基均加蔗糖 3% , 琼脂 0 . 6 % , PH 为 5 . 80
(2) 愈伤组织分化不定芽培养基
M s + l
.
o n l岁 L BAP + o . h l嗯 / L NAA + 蔗糖 3% p H 二 5 . 8
收稿日期 : 1望刹〕一 03 一 10
魏礼文 丁运华 白坪的离体繁殖 9 1更 )年
() 3诱导形成不定根培养基
a,
.
M s + 0
.
3 11笔 / L B” + 0 . 2 11可 L NA + 蔗糖 3 % PH 二 5 . 8
b
` .
M s + 0
.
3 11娜 L BAP + 0 . 2 11娜 L N AA + 蔗糖 2% PH = 5 . 8
李M , + 0 .
乙
3 1琪少L B甘 + 0 . 2 11笔 / L N A A + 蔗糖 2% PH = 5 . 8
2
.
2 方法
2
.
2
.
1 取材与处理
切取生长良好的白蝉新梢约 c6 m , 留近梢尖 、 中间和近切 口处叶片各一片 , 其余摘除 。
先用 自来水冲洗材料 5 分钟后将 留用的叶片切下 , 再把枝梢分切为 4 段然后分别消毒处理 。
消毒时先在 0 . 1% 的升汞液中浸 8 分钟后转至 75 % 酒精中再消毒 巧 秒 (在消毒过程中应
不断搅动材料并使之浸没于消毒液中 ) 。 完后用无菌蒸馏水清洗 3 次每次约 2 分钟 。 每次洗
后取出时应挟着材料在水下拌动几下然后迅速抽出 , 以防水面有新落人的抱子沾附其上 。
将消毒好的材料 置于无菌培养皿的滤纸上 , 切去创 面后再 分成小块 。 叶片约 0 . c5 扩
(不同取处的叶片不同处理 ) , 顶牙只留约 2~ 长
, 茎段则斜削成弦长约 2~
, 高约 3~ 的半锥体 (带皮 ) 。 然后茎尖按自然极性置于培养基上 , 其余则随意接人培养基上 。
2 2
.
2 诱导形成愈伤组织
把材料分别接种到培养基 ( l) 的三一种培养基后 , 置于 28 ℃ , l《X旧h (保持 10 一 1h2 . )
的培养箱里培养 。 一周后均能在切 口处形成近白色的愈伤组织 。
表 1 诱导形成愈伤组织观察结果 (四周 )
愈伤组织生长情况 (近球形 , 以直径表示大小 , 单位 : c m )培 养 基 叶 茎 段 茎 尖
1
.
5 1
.
6 切 口处约 0 . 6 , 芽尖无明显变化
b 1
.
3 1
.
5 切 口处边缘有 .0 4 , 并形成长约 .0 4C m 的不定芽
1
.
3 1
.
3 切 口处约 0 . 6 , 芽尖无明显变化
形成愈伤组织大小与材料面积基本上成正 比 , 与茎段及叶片取处则无明显差异 。
2
.
2
.
3 诱导形成不定芽
培养基 (2) 为液体培养基 , 用海绵作支持物 , 无须振荡 。 将愈伤组织接人培养基 ( 2 )
后置于 28 ℃ 150 h ( 10 一 1h2 . ) 恒温培养 。 16 天后就可清楚地看到愈伤组织转绿并形成约
1
~ 的球形突点
,
23 天后这些突点形成淡绿色的不定芽 。
试验 中发现 , 将愈伤组织接人分化培养基之前 , 作变温和减少光照处理能促进 白蝉愈伤
组织分化 。 方法是把培养好的愈伤组织先在箱外放置 3 天 (或在箱内停电 3 天 ) 后再接人分
化培养基置于箱内恒温培养 , 则转绿可提前到 14 天 , 形成不定芽的数量也较多 。 然而效果
并不与处理时间成正相关关系 。 试验证明 3 天为宜 (在夏季 , 日平均温度 28 ℃ ) 。 愈伤组织
在琼脂培养基上则不会转绿形成不定芽 。 可见物理因素在 白蝉从愈伤组织诱导形成不定芽时
起着重要作用 。
待丛生不定芽长至 2 一 3c m , 有 4 片叶时 , 可转至生根培养基中诱导形成不定根 。
2
.
2
.
4 诱导形成不定根
将丛生不定 芽 分切成 单芽 后 , 分别接人培 养基 ( 3) 的三种 培养 基上 , 置 于 28 ℃ ,
2X( 刃h ( or ~ 12 h . ) 恒温培养 , 培养 3 周后 , 结果如下 。
第 4期 惠州大学学报 (自然科学版 )
表 2 诱导形成不足根观察结果 (三周 )
培养基 根长至 0
.
s c m时所需
时间 (天 )
根 数 根的强弱 一般苗高
(
em )
、 ,了
452
z叮、,l,1内、
l 7
14
粗壮
较粗壮
较细
可见培养基 b’ 较适宜 , 且根的分化与糖浓度有关 。
2
.
2
.
5 移栽
当根长至 I Cm (约 犯 天 ) 时 , 即可移栽 。 苗床可用浅木箱 (高约 2c0 m ) , 基质用河沙与
塘泥按 2 : l 混合均匀 。 在移栽前半月用 0 . 5% 的福尔马林浇透苗床 , 再 以薄膜密封 , 2 天后
揭去薄膜 , 淋水至箱底有水渗出 , 让其 自然风干 , 以此杀灭基质里的线虫和真菌 。 苗植人基
质深度以平第二片叶为宜 , 并轻加压实根部泥土 。 完后浇水至透 , 检查有无倒苗 。 然后离苗
高约 20 c m 处支盖薄膜 , 置于荫棚 内培养 。 以后隔 3 天浇水一次 , or 天后可掀去薄膜 , 并按
一般花卉繁育方法管理 , 一个月后置于棚外以增加光照 (在冬季要注意保温 ) 。 半年后苗高
可达 25 c m , 成活率达 10 % 。
3 结语
在进行离体繁殖研究时 , 要获得成功或取得最适培养基和环境条件是有一定困难的 , 但
可 以从相近物种的成功培养的例子中得到启示 , 并以此作为基本培养条件 , 再在取材 、 培养
基成份与用量以及物理因素等方 面加以选择处理 , 就有可能或较快地获得成功 。
参 考 文 献
李浚民 . 植物组织培养教程 . 北京 : 北京农业大学出版社 , 1卯 5 . 85 一卯 , 15 一 1印
郑开文 . 植物繁殖原理和技术 . 中国林业出版社 , 19 85 . 以巧 一 610
谭文澄 . 植物生理学通讯 , 19 85 , (3) : 27
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