全 文 ：　作者简介:周剑侠 ,男 ,硕士研究生　　＊通讯作者:沈征武 ,男 ,博士生导师　　Tel:(021)51322207　　E-mail:jeff.shen@jipharma.com
天目藜芦生物碱成分研究
周剑侠 ,康露 ,沈征武＊(上海中医药大学中药学院 ,上海 201203)
摘要:目的　研究天目藜芦(Veratrum schindleri Loes.f.)生物碱成分。方法　利用酸碱处理及硅胶柱色谱进行分离 , 通过理化
性质和波谱数据鉴定结构。结果　分离并鉴定了其中 5 个生物碱成分 , 分别是异红介藜芦碱(Ⅰ)、藜芦胺(Ⅱ)、介藜芦碱
(Ⅲ)、藜芦酰棋盘花碱(Ⅳ)、藜芦托素(Ⅴ)。结论　上述 5个生物碱均为首次从该植物中被发现。
关键词:天目藜芦;异红介藜芦碱;藜芦胺;介藜芦碱;藜芦酰棋盘花碱;藜芦托素
中图分类号:R284　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2006)18-1379-03
Studies on the Alkaloid Constituents of Veratrum schindleri Loes.f.
ZHOU Jian-xia ,KANG Lu , SHEN Zheng-wu＊(School of Pharmacy , Shanghai University of Traditional Chinese Medicine , Shanghai
201203 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the alkaloid constituents of Veratrum schindleri Loes.f.METHODS 　The compounds were isolated
by acid and alkali treatment and column chromatography , and the structures are identified by physicochemical properties and spectral data.RE-
SULTS　Five alkaloids were isolated and identified as isorubijervine(Ⅰ), veratramine(Ⅱ), jervine(Ⅲ), veratroylzygadenine(Ⅳ), veratrosine
(Ⅴ).CONCLUSION 　All the compounds are isolated for the first time from the plant.
KEY WORDS:Veratrum schindleri Loes.f.;isorubijervine;veratramine;jervine;veratroylzygadenine;veratrosine
　　天目黎芦(Veratrum schindleri Loes.f.)别名邢氏
黎芦 、牯岭黎芦 ,分布于江西 、浙江 、江苏 、安徽 、福
建 、湖南 、湖北 、广东等省区 。与黎芦(V.nigrum
L.)、毛叶黎芦(V.grandiflorum Loes.f.)、蒙自黎芦
(V.mengtzeanum Loes.f.)、狭叶黎芦(V.stenophyl-
lum Diels)、大理黎芦(V.taliense Loes.f.)、毛穗黎芦
(V.maackii Regel)、兴安黎芦(V.dahuricum Loes.
f.)、黑紫黎芦(V.japonicum Loes.f.)等统称为中药
藜芦入药应用[ 1] 。
我国有 20余种藜芦植物 ,经研究比较发现藜芦
属植物品种不同其生物碱化学结构差别较大 ,为了
安全 、合理用药 ,值得深入研究 。目前对于天目藜芦
生物碱的研究报道较少 ,朱任宏等[ 2]从中分离得到
天目藜芦碱甲和天目藜芦碱乙(仅报道化学组成
C27H43ON 、C34H51O8N ,未鉴定分子结构)。赵伟杰
等[ 3]分离鉴定了其中的一种生物碱当归酰棋盘花胺
(angeloylzygadenine)。
笔者对天目藜芦生物碱成分进行了研究 ,分离
得到了多个甾体生物碱 ,根据其理化性质和光谱数
据分析鉴定 ,化合物 Ⅰ ～ Ⅴ分别是:异红介藜芦碱
(isorubijervine)、藜芦胺(veratramine)、介藜 芦碱
(jervine)、藜芦酰棋盘花碱(veratroylzygadenine)、藜芦
托素(veratrosine)。上述 5个化合物均为首次从该植
物中分离得到 。
1　仪器与试剂
Bǜchi B-540显微熔点测定仪(温度未校正),
Bruker AMX 500超导核磁共振仪 ,Micromass LCT 液
相色谱-质谱联用仪 ,色谱用硅胶板 GF254(青岛海洋
化工厂),实验用原植物采自浙江天目山 ,经上海中
医药大学周秀佳 、李西林教授鉴定为天目藜芦(Ver-
atrum Schindleri Loes.f.)。
2　提取与分离
天目藜芦干燥根 800 g ,粉碎后乙醇冷浸 3次 ,
减压回收乙醇得浸膏 120 g 。5%酒石酸水溶液处
理 ,过滤除去不溶物 。滤液调节至 pH 4 ,用乙醚萃
取 3次 ,乙醚层通过干燥后 ,减压回收溶剂。水相用
氨水碱化至 pH 10 ,然后以氯仿萃取 3次 ,无水硫酸
钠干燥 ,减压回收溶剂 ,得到氯仿萃取物 15 g 。
柱色谱分离上述氯仿萃取物 ,分别采用石油醚-
丙酮-二乙胺及氯仿-甲醇-二乙胺系统梯度洗脱 ,
TLC 检测合并相同流分 ,分得化合物 Ⅰ(25 mg), Ⅱ
(900 mg), Ⅲ(80 mg), Ⅳ(12 mg), Ⅴ(60 mg)。
3　结构鉴定
化合物 Ⅰ :无色针状结晶(石油醚-丙酮), mp
·1379·中国药学杂志 2006年 9月第 41卷第 18期　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2006 September , Vol.41 No.18
　　215.2 ～ 217.8 ℃, Dragendorff 试剂显黄色 。EI-MS
m/z(%)413(M+ 3.10),398(3.45), 383(2.70),275
(3.16),164(1.48),150(8.23),125(100), 98(32.51),
推测其分子式为 C27H43NO2 。 13C-NMR(500 MHz ,
CDCl3)δ:37.28(C1), 33.04(C2), 71.75(C3), 42.37
(C4), 140.87(C5), 121.41(C6), 31.98(C7), 30.77
(C8), 50.49(C9), 36.71(C10), 21.30(C11), 36.71
(C12), 45.47(C13), 57.25(C14), 29.39(C15), 68.38
(C16), 62.28(C17), 62.96(C18), 19.37(C19), 35.95
(C20), 19.23(C21), 73.77(C22), 30.48(C23), 31.69
(C24),31.76(C25),57.77(C26),19.31(C27)。1H-NMR
(500 MHz , CDCl3)δ:0.84(3H , d , J =6.2 Hz , C21),
1.01(3H ,d , J =6.7 Hz ,C27),1.03(3H , s , C19), 3.50
(H ,m ,C3)。以上数据与文献[ 4-5]对照相符 ,推定化
合物结构为异红介藜芦碱(isorubijervine)。
化合物 Ⅱ:无色细针状结晶(石油醚-丙酮), mp
203.5 ～ 205.1 ℃, Dragendorff试剂显黄色 。ESI-MS:
m/z 410[M +H] + , 推测其分子式为 C27H39NO2 。
13C-NMR中的低场信号 δ133.34 , 143.71 , 144.60 ,
120.55 ,125.95 ,140.99 ,提示有一四取代苯环存在 ,
在低场中另外的信号δ143.01 , 121.66 ,提示有环双
键存在 , 13C-NMR(500 MHz ,CDCl3)见表 1。对照参
考文献[ 6-7] ,与藜芦胺(veratramine)及其异构体 20-异
藜芦胺(20-isoveratramine)接近。通过 HMQC 及1H-
NMR ,H-20与 H-22存在明显的耦合作用 ,H-20(qd ,
J =7.1 ,4.6 Hz);H-22(dd , J =9.1 ,4.5 Hz)与藜芦胺
(veratramine)的文献报道一致[ 7] 。 1 H-NMR(500
MHz ,CDCl3):δ0.84(3H , d , J =6.6 Hz , C27), 1.14
(3H , s ,C19),1.39(3H d , J =7.2 Hz ,C21),2.32(3H , s ,
C18),3.50(H ,m ,C3)。根据以上数据分析 ,确定该化
合物结构为藜芦胺(veratramine)。
化合物 Ⅲ :无色针状结晶(石油醚-丙酮), mp
236.2 ～ 238.0 ℃,Dragendorff试剂显黄色 ,UV λmax =
250.1 nm ,ESI-MS:m/ z 426[ M+H] + ,推断分子式
为 C27H39NO3 。化合物 Ⅲ的 13C-NMR 在低场 δ:
207.54 ,137.87 ,140.55 ,结合紫外吸收可推断此结构
中存在 α、β 不饱和共轭双键 。13C-NMR(500 MHz ,
CDCl3)δ:37.51(C1), 31.90(C2), 72.42(C3), 42.16
(C4), 143.01(C5), 121.66(C6), 31.42(C7), 38.63
(C8), 63.25(C9), 37.74(C10), 207.54(C11), 137.87
(C12), 140.55(C13), 45.58(C14), 25.07(C15), 31.70
(C16), 86.22(C17), 12.83(C18), 19.19(C19), 41.12
(C20), 11.50(C21), 67.33(C22), 77.18(C23), 39.64
　　
　
表 1　化合物 Ⅱ , Ⅴ13C-NMR谱数据(Ⅱ CDCl3 , Ⅴ DMSO-d6 ,
500 MHz)
Tab 1　13C-NMR spectral data for compounds Ⅱ , Ⅴ(Ⅱ CDCl3 ,
Ⅴ DMSO-d6 , 500 MHz)
C Ⅱ Ⅴ C Ⅱ Ⅴ
1 38.72 37.93 18 16.50 15.55
2 32.02 31.58 19 19.94 18.92
3 72.52 76.77 20 36.84 36.62
4 42.59 40.66 21 20.10 20.50
5 143.17 141.64 22 67.76 67.13
6 122.73 121.62 23 71.57 69.32
7 31.23 30.08 24 44.77 44.17
8 41.94 40.00 25 32.84 34.37
9 57.65 56.64 26 54.72 53.86
10 37.60 37.58 27 19.49 18.92
11 31.06 30.04 Glc
12 133.34 132.09 1′ 100.83
13 143.71 142.28 2′ 73.44
14 144.60 142.63 3′ 77.05
15 120.55 119.10 4′ 70.11
16 125.95 125.95 5′ 76.77
17 140.99 140.34 6′ 61.09
(C24), 32.30(C25), 55.45(C26), 19.52(C27)。1H-NMR
(500MHz ,CDCl3):δ0.95(3H , d , J =6.4 Hz ,C27),
0.96(3H ,d , J =6.9 Hz , C21), 1.01(3H , s , C19), 2.18
(3H , s ,C18)。以上数据与文献[ 6 ,8]对照相符 ,此化合
物为介藜芦碱(jervine)。
化合物Ⅳ:无色针状结晶(石油醚-丙酮), mp
260.2 ～ 262.5 ℃, Dragendorff 试剂显黄色 , IRνmax
cm-1:3 460 ,2 960 ,2 930 , 2 850 ,2 760 ,1 720 , 1 610。
ESI-MS:m/z 658 [M +H] +。 13C-NMR(500 MHz ,
CDCl3)δ:33.53(C1), 27.56(C2), 76.65(C3), 105.62
(C4),47.22(C5), 19.72(C6),17.90(C7),44.70(C8),
96.96(C9), 46.56(C10), 33.95(C11), 47.07(C12),
34.88(C13), 81.46(C14), 70.44(C15), 70.99(C16),
45.05(C17), 62.38(C18), 19.72(C19), 73.98(C20),
20.53(C21), 70.55(C22), 19.13(C23), 29.67(C24),
28.11(C25), 62.08(C26), 17.78(C27), 167.88(C1′),
123.04(C2′),110.99(C3′),149.50(C4′),154.16(C5′),
113.07(C6′), 124.50(C7′), 56.77(COMe-4′), 56.77
(COMe-5′)。 1H-NMR(500 MHz , CDCl3):δ1.01(3H , s ,
C19),1.08(3H ,d , J =7.1 Hz ,C27),1.23(3H , s ,C21),
3.93(3H , s , OMe-4′), 3.95(3H , s ,OMe-5′)。以上数
据与文献[ 9]对照相符 ,推定化合物结构为藜芦酰棋
盘花碱(veratroylzygadenine)。
化合物Ⅴ:白色针状结晶(MeOH),mp 239.8 ～
242.1 ℃, Dragendorff 试剂显黄色 , EI-MS m/z(%)
571(M+0.50),457(0.38), 392(0.40),279(1.24),114
(100), 推测其分子式为 C33H49NO7。 13C-NMR(500
·1380· Chin Pharm J , 2006 September , Vol.41 No.18 　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2006年 9月第 41卷第 18期
　　
　
基金项目:湛江市科技攻关项目(EK0125);卫生厅科研基金项目(2002474)
作者简介:梁统 ,男 ,教授　　Tel:(0759)2388581-1　　E-mai l:liangt@gdmc.edu.cn
侧柏总黄酮的分离纯化及对 5-脂氧合酶的抑制作用
梁统 ,覃燕梅 ,梁念慈(广东医学院生物化学与分子生物学教研室 ,广东湛江 524023)
摘要:目的　从侧柏叶中分离纯化活性成分总黄酮并探讨其对 5-脂氧合酶的抑制作用。方法　石油醚加热回流除去大部分
叶绿素等脂溶性杂质 ,再用体积分数为 50%乙醇加热回流提取;提取液浓缩去除乙醇后用乙酸乙酯提取 , 减压浓缩得粗黄酮;
粗黄酮过聚酰胺色谱柱 ,用体积分数为 70%的甲醇洗脱 ,浓缩得总黄酮;高效液相色谱法测定大鼠中性白细胞 5-脂氧合酶的
产物 5-羟廿碳四烯酸 , Fura-2/ AM荧光技术测定细胞内游离钙浓度。结果　用芦丁作参照品 , 测得分离的产物总黄酮含量为
93%,总黄酮对 5-脂氧合酶抑制的 IC50为 22.2;25 ～ 125 mg·L-1的总黄酮对 fMLP 诱导的细胞内游离 Ca2+水平增高抑制率为
15.2%～ 35.9%。结论　该方法较简单 , 分离的总黄酮纯度高 , 是一种可行的总黄酮提取方法;侧柏总黄酮对 5-脂氧合酶的活
性有较强的抑制作用 ,抑制细胞内游离 Ca2+水平增高可能是抑制 5-脂氧合酶的作用机制之一。
关键词:侧柏叶;总黄酮;提取;5-脂氧合酶
中图分类号:R965　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2006)18-1381-04
Study on Isolation of Total Flavonoids from Platychadus orientalis and Its Inhibition for 5-Lipoxygenase
LIANG Tong , QIN Yan-mei ,LIANG Nian-ci(Department of Biochemistry and molecular biology , Guangdong Medical College , Zhan-
jiang 524023 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To isolate total flavonoids from the leaf of Platychadus orientalis and investigate its inhibition for 5-lipoxygenase.
METHODS　After the dried leaf of Platychadus orientalis was refluxed with petroleum ether, the residue was dried absolutely , and subse-
quently refluxed with 50% ethyl alcohol.After the removal of the ethyl alcohol solvent in vacuo , residue was extracted with ethyl acetate , and
the crude flavonoids was obtained after ethyl acetate was removed.The crude flavonoids was loaded onto a polyamide column and subsequently
eluted with 70%methanol solvent.The total flavonoids was obtained after the 70% methanol solvent was removed in vacuo.The levels of 5-
hydroxyeicosatetraenoic acid(5-HETE)in the cells of rat polymorphonuclear leukocytes were measured by HPLC.The intracellular free calcium
was quantitated by Fura-2 fluoresence technique.RESULTS　The content of total flavonoids was 93% with rutin as reference.Total
Flavonoids was showed to inhibit the activity of 5-lipoxygenase with IC50 value of 22.2 mg·L-1.The concentration of 25.0～ 125.0 mg·L-1 of
MHz ,DMSO-d6)δ:100.83(单糖中与 O 连接的碳),
73.44 ,77.05 , 70.11 , 76.77 , 61.09(单糖中其余 5 个
碳),其余碳的化学位移与化合物 Ⅱ中的碳位移接
近。1H-NMR(500 MHz ,DMSO-d6):δ0.72(3H , d , J =
6.5 Hz ,C27), 1.08(3H , s , C19), 1.22(3H , d , J =7.2
Hz ,C21),2.24(3H , s ,C18),3.5 ～ 4.5为葡萄糖环质子
信号。以上数据与文献[ 8 , 10] 对照相符 ,推定化合物
结构为藜芦托素(veratrosine)。
致谢:感谢上海诺德生物实业有限公司唐生斌为本课
题提供的天目藜芦原药材。
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(收稿日期:2005-07-22)
·1381·中国药学杂志 2006年 9月第 41卷第 18期　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2006 September , Vol.41 No.18