全 文 ：实验研究
珍珠草乙肝舒康胶囊药效学研究
侯敏全 1　虢红梅 2
(1西安交通大学医学院 ,西安市雁塔西路 76号 , 710061;2陕西东科中医药研究所)
摘要　目的:探讨珍珠草乙肝舒康胶囊抗 HBV及保护肝细胞的药效学作用及其特点。方法:通过体外 2.2.15细胞株实验观察
珍珠草乙肝舒康胶囊抑制 HBV的效果 ,建立大鼠 CCl4慢性肝损伤模型 , 分为空白对照组 , CCl4组 , 乙肝宁组 ,珍珠草乙肝舒康
大 、中小剂量组 ,检测各组生化及肝左叶病理学组织差异;参照文献方法 , 测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及小鼠血清溶血素含
量 , 观察珍珠草乙肝舒康对小鼠免疫功能的影响。结果:HBsAg, HBeAg的最大抑制率为 76.47%(d7), 71.43%(d5), 且呈现
HBV分泌 、复制越是旺盛 ,抑制作用越强的特点;珍珠草乙肝舒康组与模型组相比 ,肝功能明显改善 , 肝组织结构破坏轻 , 纤维
组织增生程度轻 , 与乙肝宁组相比 , 各项指标变化略占优势;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能增强 ,羊红细胞致敏的小鼠血清溶血素
含量提高 , 显著优于空白对照组 , 与阳性对照组盐酸左旋咪唑片相似。结论:珍珠草乙肝舒康胶囊具有抗 HBV、保护肝细胞作
用。
关键词　珍珠草乙肝舒康胶囊 /药效学
PharmacodynamicResearchonHBVRecoveryCapsulePreparedwithCommonLeafflower
HouMinquan1 , GuoHongmei2
(1 MedicalColege, Xi anJiaotongUniversity, Add.:No.76, YantaWestRoad, Xi anCity, Shan xiProvince, Postalcode:710061;
2.ShaanxiDongkeResearchInstituteofChineseMedicine)
Abstract　Objective:toconductapharmacodynamicresearchintoHBVrecoverycapsulepreparedwithCommonLeaffloweraboutits
anti-HBVandprotectiveeffectoflivercells.Methods:anti-HBVeffectwasobservedthroughinvitroexperimentin2.2.15 cellline.
RatmodelofchronicliverinjurywasestablishedusingCCl4 , andwasdividedtoblankcontrolgroup, CCl4 group, YiganNingGroup,
andLeaflowerhigh-dosegroup, middle-dosegroupandlow-dosegroup.Eachgroupwassubjecttobiochemicalexaminationandhisto-
logicalexaminationtopathologicalchangesinlefthepaticlobe;peritonealmacrophagephagocytosisandcontentofhaemolysinwerede-
terminedinmicetoobservethecapsule sefectonimmunefunction.Results:maximuminhibitionratioofHBsAgandHBeAgwerere-
spectively76.47%(d7)and71.43%(d5), moreover, HBVsecretionandreplicationcorrelatedpositivelywithinhibitiveaction.When
comparedwithCCl4 group, theleaflowergroupimprovedsignificantlyinliverfunction, withlesssevereliverdisorganizationandfibro-plasias;andwassuperiorovervariousparametervaluetoYiganNinggroup.TheleafflowergrouphadsimilareffectasLevamisole,
whichwasbeterthantheblankcontrolgroup:phagocytosisofperitonealmacrophagewasreinforced, andcontentofhaemolysinin-
creasedfolowingsensitizationinducedbysheepredbloodcel.Conclusion:HBVrecoverycapsulepreparedwithCommonLeaflowerhad
anti-HBVeffectandprotectionoflivercels.
KeyWords　 HBVRecoveryCapsulePreparedwithCommonLeaflower/ Pharmacodynamics
1　实验材料
1.1　药物　珍珠草乙肝舒康胶囊由杨凌东科麦迪森
制药有限公司生产 ,批号:070301。乙肝宁颗粒 ,批号:
20080102。盐酸左旋咪唑片由山东仁和堂有限公司生
产 ,批号:060902。
1.2　2.2.15细胞　引自北京 302医院病毒室。
1.3　动物　Wistar大鼠及 ICR种小鼠 ,均由西安交通
大学医学院实验动物中心提供 。
2　实验方法
2.1　抑制 HBV的体外 2.2.15细胞株实验
2.1.1　2.2.15细胞的培养　DMEM中加入 380mg/
LG418 , 15%新生小牛血清 , 2mmol/L谷氨酰胺 , 1%青霉
素 , 1%链霉素 , 4.4%NaHCO3调 pH至 7.2 ～ 7.4 , 37℃
5%CO2培养 ,每隔 10d传代 1次 。
2.1.2　药物对细胞的毒性作用试验　将 2.2.15细胞
按(1×104)/mL接种 96孔细胞培养板 ,每孔 0.2mL,
次日用培养液将各种药物做系列 2倍稀释(1∶100, 1∶
200, 1∶400, 1∶800, 1∶1600)加入细胞孔 ,每稀释度 5孔 ,
每 4d换相同浓度的相同药液 ,设不加药物细胞对照 ,
每天观察记录结果。毒性判断标准为:不加药物孔细
胞无自然蜕变为 -, 加药物孔细胞被破坏 75% ～
100%为 ++, 50% ～ 74%为 ++, 25% ～ 49%为 ++,
1% ～ 24%为 +。按 Reed-Meuench法计算药物对细胞
生长的半数毒性浓度(TC50)。
2.1.3　HBsAg, HBeAg分泌和 HBV-DNA复制规律试
验　将 2.2.15细胞按(2×105)/mL接种 24孔细胞培
养板 , 1.2mL/孔 ,共 10孔 ,收集培养液上清液 250μL/
d,培养液补足原量至第 13天量 ,培养上清 -30℃冻
·50· WORLDCHINESEMEDICINE　January.2009, Vol.4, No.1
存 ,最后集中按试剂盒说明书用 ELISA法测定 HBsAg、
HBeAg,用 PCR法检测 HBV-DNA。
2.1.4　药物对 HbsAg表达和 HBV-DNA复制的抑制
试验　将 2.2.15细胞按(2×105)/mL接种 24孔细胞
培养板 , 1.2mL/孔 , 次日弃培养液。以不同药物对
2.2.15细胞的最大无毒剂量为起始浓度 ,加入培养液
稀释(系列 2倍稀释)的不同浓度的不同药物 ,每浓度
6孔 ,同时设不加药物对照 ,以后每天每孔取培养上清
250μL,补足原液 , -30℃冻存 ,集中用 ELISA法检测
HBsAg、HBeAg,用 400nm波测定 A值;并计算药物对
抗原的抑制率 、半数有效浓度(IC50)治疗指数(TI)判
断药物效果。用 PCR法测定 HBV-DNA,结果表示方
法为:以当天不加药物 2.2.15细胞上清经 PCR扩增
DNA条带荧光强度为 ++,较之有减弱为 +,不出现
条带为 -。药物对抗原的半数有效浓度 (IC50):按
Reed-Meuench法计算;治疗指数(TI)=TC50 /IC50 ,以
上实验均重复 1次。
2.2　对慢性肝损伤(CCl4模型)的保护作用　取大鼠
60只 ,除空白对照组(10只动物)外 ,其余动物每 3d皮
下注射 10%四氯化碳(CCl4)0.5mL/100g体重 ,连续
注射 10周 ,于第 5周由尾静脉取血测定 ALT,根据其
活力高低分层随机分为 5组:四氯化碳模型组 ,乙肝宁
组 ,珍珠草乙肝舒康大剂量组 (1.5g/kg)、中剂量组
(0.75g/kg)、小剂量组(0.38g/kg),按 1mL/100g体重
给生理盐水或药 ,每天 1次 ,灌胃 ,连续 5周 ,末次用药
或生理盐水 24h后处死全部动物 ,取血标本做生化检
查(ALT, AST,总蛋白 /白蛋白)并对结果均数进行方差
分析(F检验 , OneWayANOVA),取肝左叶做病理组
织学检查(HE染色 、VanGieson胶原纤维染色)。
2.3　珍珠草乙肝舒康对小鼠免疫功能影响的实验　
取小鼠 60只 ,随机分为 5个组:空白对照组 、阳性对照
(盐酸左旋咪唑片)组 、珍珠草乙肝舒康 3个剂量组 ,按
0.2mL/10g体重给生理盐水或药 ,每天 1次 ,灌胃 ,按
文献 [ 2]方法进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及小鼠血
清溶血素含量测定实验 , 对吞噬百分率 、吞噬指数及
HV50的均数进行方差分析 (F检验 , OneWayANO-
VA)。
3　结果
3.1　对 2.2.15细胞的毒性作用　珍珠草乙肝舒康胶
囊 、乙肝宁颗粒对 2.2.15细胞的最大无毒剂量分别为
2.5mg/mL, 2.0mg/mL;对 2.2.15细胞的 TC50分别为
(3.75±0.25)mg/mL和(2.98±0.24)mg/mL。
3.2　2.2.15细胞的 HBsAg, HBeAg分泌规律及 HBV-
DNA复制规律　2.2.15细胞分别于第 2、3天及第 1
天开始有 HBsAg, HBeAg分泌及 HBV-DNA复制 ,以后
逐渐增加 ,于第 7天达到高峰 ,然后逐渐减弱 ,持续到
第 13天。分泌 、复制规律相似 。
3.3　不同药物对 2.2.15细胞分泌 HBsAg, HBeAg及
复制 HBV-DNA的抑制作用　结果见表 1。作用较强
时期的 IC50 (mg/mL)为 HBsAg(d7)0.48 ±0.26,
HBeAg(d5)0.47±0.23;TI为 HBsAg(d7)7.81±0.4,
HBeAg(d5)7.98±0.03。抑制率 =(2.2.15细胞孔 A
值 -药物孔 A值)/(2.2.15细胞孔 A值 -阴性血清对
照 A值)×100%。
3.4　对 ALT、AST活力及白蛋白 /球蛋白比值作用　
珍珠草乙肝舒康胶囊各剂量组与模型组比较 ,能使
ALT及 AST活力明显降低 ,并提高白蛋白与球蛋白比
值;炎症 、肝细胞浊肿及疏松化 、肝细胞变形坏死(脂
表 1　不同浓度不同药物对 2.2.15细胞分泌 HBsAg, HBeAg及复制 HBV-DNA的抑制作用
时间(d) 药物 HBsAg抑制率(%)
2.0 1.0 0.5 0.25
HBeAg抑制率(%)
2.0 1.0 0.5 0.25
HBV-DNA条带荧光强度
2.0 1.0 0.5 0.25
1 珍珠草乙肝舒康 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 ++ ++ ++ ++
乙肝宁 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 ++ ++ ++ ++
3 珍珠草乙肝舒康 61.53 53.85 53.85 46.15 63.63 63.63 63.63 45.45 + + ++ ++
乙肝宁 23.08 15.38 15.38 7.06 45.45 63.63 27.27 18.18 ++ ++ ++ ++
5 珍珠草乙肝舒康 73.91 73.91 65.21 34.78 71.43 27.27 61.90 61.90 + + + ++
乙肝宁 34.78 34.78 26.05 30.43 42.86 39.10 33.30 28.57 + + + ++
7 珍珠草乙肝舒康 76.47 76.47 70.59 38.24 63.67 63.67 59.10 54.55 - - + ++
乙肝宁 52.49 47.06 44.12 32.35 40.90 40.90 31.82 27.27 - + + ++
9 珍珠草乙肝舒康 64.00 52.00 48.00 12.00 46.15 30.80 30.80 30.80 + + + ++
乙肝宁 24.00 20.00 20.00 8.00 15.38 7.69 7.69 7.69 + ++ ++ ++
11 珍珠草乙肝舒康 30.00 10.00 10.00 5.00 0.0 0.0 0.0 0.0 ++ ++ ++ ++
乙肝宁 5.00 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 ++ ++ ++ ++
13 珍珠草乙肝舒康 12.50 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 ++ ++ ++ ++
乙肝宁 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 ++ ++ ++ ++
·51·世界中医药　2009年 1月第 4卷第 1期
表 2　对 CCl4所致慢性肝损伤大鼠 ALT、AST活力及白蛋白 /球蛋白比值的影响( x±s)
组别 动物数(只) 剂量(g/kgd) ALT(卡式u) AST(卡式 u) A/G
空白对照 10 - 20.05 22.1 0.98
CCl4 10 - 72.00＊＊ 53.90＊＊ 0.82＊＊
乙肝宁 10 9.0 45.95△△ 32.40◆◆ 0.93△△
珍珠草乙肝舒康大剂量 10 1.5 39.80△△ 32.60◆◆ 0.94△△
珍珠草乙肝舒康中剂量 10 0.75 40.20△△ 32.20◆◆ 0.99△△
珍珠草乙肝舒康小剂量 10 0.38 42.40△△ 33.70◆◆ 0.90■
　　注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.001,与模型组比较 , ■P<0.05, △△P<0.01, ◆◆P<0.0015。
表 3　对 CCl4所致慢性肝损伤大鼠病理组织学改变的影响
不同等级病理改变的动物数(只)
细胞胞浆疏松化 肝细胞脂肪化 肝细胞坏死 肝间质纤维增生
0 + ++ +++ 0 + ++ +++ 0 + ++ +++ 0 + ++ +++
10 0 0 0 10 0 0 0 10 0 0 0 10 0 0 0
0 0 10 0 0 1 6 3 0 0 7 3 0 1 5 4
5 2 2 1 5 3 1 1 4 6 0 0 2 3 4 1
2 5 3 0 4 6 0 0 6 4 0 0 5 5 0 0
3 4 3 0 8 1 1 0 4 6 0 0 6 4 0 0
4 3 3 0 5 3 2 0 4 6 0 0 4 4 2 0
表 4　对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清溶血素含量的影响( x±s)
组别 动物数(只) 剂量(g/kgd) 吞噬百分率　　 吞噬指数　　 HC50　
空白对照 12 - 28.90±4.65 0.37±0.06 98.05±40.64
盐酸左旋咪唑片 12 0.04 50.20±6.27＊＊ 0.63±0.09＊＊ 168.03±57.42＊＊
珍珠草乙肝舒康大剂量 12 1.5 53.64±6.42＊＊ 0.67±0.08＊＊ 158.06±52.48＊
珍珠草乙肝舒康中剂量 12 0.75 47.20±3.43＊＊ 0.57±0.07＊＊ 152.66±39.01＊
珍珠草乙肝舒康小剂量 12 0.38 41.30±3.89＊ 0.50±0.07＊ 143.68±26.19＊
　　注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.001, ＊P<0.01。
肪点 、点灶状及碎屑状坏死等),肝间质纤维增生等形
态学病理改变均较之轻 ,且有一定的量效关系 ,见表
2、表 3。
3.5　对巨噬细胞的吞噬功能　珍珠草乙肝舒康胶囊
能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能 ,对绵羊红
细胞所致小鼠特异性抗体生成有明显增强作用。见表 4。
4　结论
近来国外有学者利用体外细胞模型进一步阐述了
叶下珠抗 HBV的机制 ,并证实了其能降低 HBV复制
过程中 HBsAgmRNA的水平 。在我们的体外抗 HBV
实验中亦证实了以叶下珠(珍珠草)为主 ,配清热 、解
毒 、祛湿 、健脾的治疗肝病常用中药而成的珍珠草乙肝
舒康胶囊具有较好的抑制 HBsAg、HBeAg及 HBV-
DNA作用 ,分析动态结果可以看出有如下特征:1)均
存在一个相似的药物作用曲线 ,即从开始用药到见到
效果有个过程 ,需 3 ～ 4d,较强的抑制 HBV作用可维
持 3 ～ 5d,然后逐渐减弱 、消失;2)对照本实验方法的
HBV分泌与复制规律可以看出 ,在 HBV分泌 、复制越
是旺盛的时期 ,药物对 HBV的抑制作用表现得越强 ,
越能显示出药物的作用;3)药物的作用具有呈正比的
量效关系 ,即药效强弱与剂量大小有一定的依赖关系。
从分层分组后的对照结果可以看出 ,珍珠草乙肝
舒康胶囊使肝细胞得到有效的保护 ,肝损伤明显减轻 ,
而同时病理显示肝纤维化的发生发展亦得到了阻止 ,
中药的抗肝损伤 、抗肝纤维化研究往往出现这种现象 ,
2个免疫实验结果还看出珍珠草乙肝舒康胶囊具有调
节小鼠的免疫机制 、提高免疫能力的作用。上述实验
说明珍珠草乙肝舒康胶囊在治疗慢性乙型肝炎中所发
挥的抗肝纤维化作用 ,除了可能与抑制肝星状细胞的
增生 、活化及减少胶原蛋白合成有关外 ,与药物直接减
轻肝损伤 、保护肝细胞 、调节机体免疫机能 、直接影响
结缔组织代谢等多条途径也有很大关系。
综上实验研究所述 ,本项实验研究证实了 “珍珠
草乙肝舒康胶囊 ”具有抑制 HBV、抗慢性肝损伤及调
节机体免疫功能作用。另外 ,我们还发现珍珠草乙肝
舒康胶囊的抗 HBV作用的特点是 HBV复制越明显越
能反映药物抗 HBV作用 ,作用越强。
(2008-11-10收稿)
·52· WORLDCHINESEMEDICINE　January.2009, Vol.4, No.1