全 文 ：书地钱素 C衍生物 F41 对子宫颈癌 HeLa细胞凋亡的影响
魏玉平1，郭元芳1，孙高英1，王小元2，刘永青1，胡中一1，毕文祥1
(1． 山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所，山东 济南 250012;2． 济南市中心医院妇产科，
山东 济南 250013)
摘要:目的 对地钱素 C( MC) 羟基衍生物进行筛选，寻找具有高抗肿瘤活性的 MC衍生物，并初步探
讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法 用 MTT法观察 56 种 MC羟基衍生物对子宫颈癌 HeLa细胞
的毒性作用，筛选其中细胞毒作用最强的 MC衍生物，并比较其与 MC对 HeLa细胞存活的抑制作用。用倒
置显微镜、DAPI染色和 DNA梯带检测其对细胞凋亡的影响。用流式细胞术检测其对细胞周期的影响。用
Western印迹法检测其对细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。结果 在 56 种 MC 衍生物中，F41 对
HeLa细胞毒性最强，抑制 HeLa 细胞存活的 IC50为( 11． 31 ± 2． 13 ) μmol·L
－1，明显低于 MC〔IC50为
( 17． 19 ±3． 28) μmol·L －1〕( P ＜0． 01) 。F41和MC与 HeLa细胞作用24，48和72 h，F41对HeLa细胞存活
的抑制作用均明显强于MC( P ＜0．05) 。形态学和 DNA梯带检测显示，F41处理后，HeLa细胞皱缩变小，有空
泡和凋亡小体出现，胞核浓缩变小，DNA电泳呈梯状条带。流式细胞分析显示，F41 15 μmol·L －1处理 HeLa细
胞 24 h，G2 /M期细胞占总细胞的比例为( 43． 8 ±3． 0) %，明显高于对照组的( 13． 1 ±1． 6) % ( P ＜0． 01) ;
G1 期细胞比例为( 34． 8 ±3． 8) %，明显低于对照组的( 63． 6 ±5． 5) % ( P ＜0． 01) 。Western 免疫印迹结果
表明，F41 可使 HeLa细胞内磷酸化细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 1 水平降低，细胞周期蛋白 B1 和 P53 蛋
白表达增多。结论 F41 可诱导 HeLa细胞凋亡，抑制 HeLa细胞分裂，其抗肿瘤活性可能强于 MC。
关键词:地钱素 C; 羟基衍生物; 细胞周期; 细胞凋亡
中图分类号:Ｒ966 文献标志码:A 文章编号:1000-3002(2013)03-0346-06
DOI:10． 3867 / j． issn． 1000-3002． 2013． 03． 007
地钱素(marchantin)是苔类植物特有的一类联
苄类次级代谢产物，由半月苔酸和半月苔素衍生而
来，具有抗微生物、诱导肿瘤细胞凋亡、细胞毒、逆转
耐药及抑制 DNA聚合酶和环氧合酶活性等多种药
理作用［1 －2］。地钱素 C(marchantin C，MC)是从苔
类地钱、无纹紫背苔和花萼苔中分离提纯的大环双
联苄类化合物。MC作用点位于微管蛋白秋水仙碱
结合部位，其在体内外均可引起微管解聚［3］。
MC结构简单，生物活性广泛，是很好的新药研
究的先导化合物。在其原结构骨架上引入羟基等氢
键供体，可获得更易于与微管蛋白结合的抗微管药
物［4］。研究显示，MC 衍生物不但有 MC 的许多药
理作用，而且还常有一些新的特点和功能。如有些
MC衍生物具有多药耐药逆转活性，其可抑制多药
基金项目:山东省优秀中青年科学家科研奖励基金
(2008BS03038)
作者简介:魏玉平(1986 －) ，女，硕士，主要从事抗肿
瘤药物研究。
通讯作者:毕文祥，E-mail:biwenxiang@sdu． edu． cn，
Tel: (0531)88382092
耐药蛋白 P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的转运
功能，增加长春新碱在肿瘤细胞的聚集［5］。因此，
对 MC结构进行修饰和改造，有助于发现高选择性
和高效能的新药物，有重要的现实意义。本研究用
HeLa细胞对 56 种 MC羟基衍生物进行了筛选，以
期筛选出较 MC抗肿瘤活性更好的化合物，并初步
探讨其分子机制。
1 材料与方法
1． 1 药物、试剂和仪器
MC及其 56 种羟基衍生物由山东大学药学院
天然药物化学研究所提供，纯度为 99%。药物合成
及纯化过程见文献［4］。将其用二甲亚砜(DMSO)
溶解制备成 10 mmol·L －1储存液，实验时用含 1%
新生牛血清的 ＲPMI 1640 培养基稀释至相应的浓
度。ＲPMI 1640 培养基及新生牛血清购自 Gibco
公司;MTT，DMSO 和 PI 购自 Sigma 公司;ＲIPA
细胞裂解液、4，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色
液及 BCA蛋白质定量试剂盒购自碧云天生物公司;
细胞凋亡 DNA梯带检测试剂盒购自南京凯基生物
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书科技发展公司;ECL 化学发光底物试剂盒购自美国
Thermo公司;P53、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 1
(cyclin-dependent protein kinase 1，CDK1)、细胞
周期蛋白 B1 和 GAPDH抗体购自德国 Santa Cruz
公司;辣根过氧化物酶标记二抗购自武汉三鹰生物
技术有限公司;其他试剂均为国产分析纯。Model
680 酶标仪，美国 Bio-Ｒad公司;Alpha ImagerTM
2200 核酸凝胶成像系统，美国 Alpha Innotech 公
司;TE2000 倒置显微镜，日本 Nikon 公司;流式细
胞 仪 BD FACSCalibur，美 国 Becton-Dickinson
Bioscience公司;FluorChem Q化学发光成像系
统，美国 Cell Biosciences公司。
1． 2 细胞培养
人子宫颈癌 HeLa 细胞(本研究所保存)在
37℃，5%CO2 条件下培养于含 10%新生牛血清、
青霉素100 kU·L －1和链霉素 100 mg·L －1的 ＲPMI
1640 培养基中，细胞生长至对数期时，0． 25%胰酶
消化，1∶ 4传代。
1． 3 抗肿瘤 MC衍生物筛选
HeLa细胞以每孔 1 × 103 细胞接种于 96 孔
板，当细胞长至 60% ～ 80%融合时，用终浓度为
MC及 MC衍生物 0，5，10，20 和 40 μmol·L －1处
理细胞，对照组加相应体积的 DMSO。24 h后向各
孔加 MTT至终浓度 5 mg·L －1，培养箱放置 4 h 后
去除各孔培养基，各孔加 100 μl DMSO，震荡
10 min，酶标仪检测各孔 490 nm 处吸光度(absor-
bance，A)值，计算各衍生物抑制 HeLa细胞存活的
半数抑制浓度(IC50)。实验重复 3 次。
1． 4 MC衍生物 F41 与 MC抗肿瘤活性比较
方法同 1． 3。F41 和 MC 浓度分别为 0，5，
10，15 和 20 μmol·L －1，处理时间分别为 24，48 或
72 h。细胞生长抑制率(%)=(A对照组 － A实验组)/
A对照组 ×100%。根据细胞生长抑制率绘制细胞生长
抑制曲线。
1． 5 细胞形态观察
将 HeLa细胞以每孔 5 ×103 细胞接种于 24 孔
板，用 F41 0，5，10 和 15 μmol·L －1分别处理24 h，
随机选取 5 个高倍镜视野(× 400) ，倒置显微镜可
见光条件下对细胞和空泡进行计数，并观察不同浓
度 F41 对 HeLa细胞形态的影响。
1． 6 DAPI染色观察细胞核变化
将 HeLa细胞以每孔 5 ×103 细胞接种于 24 孔
板，用 F41 0，5，10 和 15 μmol·L －1处理 48 h 后，
PBS洗细胞2次，甲醇固定5 min，0．1% Triton X-100
固定 5 min，加 DAPI 0．5 mg·L －1染液室温避光作用
15 min，PBS清洗后加荧光防淬灭剂封片，随机选取
5个高倍镜视野(×400) ，倒置显微镜紫外线激发条
件下进行细胞核计数，并观察细胞核的变化。
1． 7 DNA 梯带检测细胞凋亡
将 HeLa 细胞以每瓶 2 × 104 细胞接种于
50 cm2培养瓶，用 F41 0，5，10 和 15 μmol·L －1处
理 48 h，离心收集细胞，PBS 洗细胞 2 次，用20 μl
SDS 细胞裂解液〔EDTA 20 mmol·L －1，Tris
100 mmol·L －1，pH 8． 0，0． 8%(W/V)SDS〕裂解
细胞 30 min，加 10 μl ＲNA酶 A(500 kU·L －1)37℃
孵育 1 h，加 10 μl 蛋白酶 K(20 g·L －1)55℃孵育
2 h，然后加5 μl 10 ×DNA上样缓冲液，混匀，取 25 μl
混合液上样，经 2%琼脂糖凝胶电泳(35 V，3 h)及
0．5 mg·L －1 EB染色后，凝胶成像系统观察并拍照。
1． 8 流式细胞术检测细胞周期
以每孔 2． 5 ×104 HeLa 细胞接种于 6 孔板，用
15 μmol·L －1的 F41 处理细胞，对照组加入相应体
积的 DMSO，24 h 后收集并用预冷的 PBS 洗细胞
2次，加1 ml 70%冷乙醇置4℃固定过夜，然后用 PBS
洗细胞，用含 PI 40 mg·L －1和 ＲNA酶 100 mg·L －1的
PBS溶液重悬细胞，37℃放置 30 min 后流式细胞
仪检测细胞周期分布。
1． 9 Western 印迹法检测 CDK1，P53 和周期蛋白
1 表达
HeLa细胞以每瓶 1 ×105 细胞接种于 50 cm2
培养瓶，用 F41 0，5，10 和 15 μmol·L －1分别处理
HeLa细胞 24 h，ＲIPA 细胞裂解液裂解细胞，BCA
法检测裂解液蛋白质浓度。取 20 μg 蛋白质样品，
10% SDS-PAGE 分离蛋白质后电转至 PVDF 膜，
随后经5%脱脂奶粉室温封闭1 h，分别加兔抗CDK1
和鼠抗 P53，细胞周期蛋白 B1 及GAPDH的单克隆
抗体，4℃孵育过夜，然后加辣根过氧化物酶标记的羊
抗兔 IgG或羊抗鼠 IgG 二抗，室温孵育 1 h，加适量
ECL化学发光试剂，化学发光成像系统检测各蛋白
条带显色情况，并用系统自带软件分析各蛋白条带积
分吸光度(integrated absorbance，IA)值。目的蛋
白相对表达水平用 IA目的蛋白 / IAGAPDH表示。
1． 10 统计学分析
实验结果数据用x ± s表示，用 SPSS17． 0 统计
分析软件进行分析。各组间比较采用 t 检验，P ＜
0． 05认为差异具有统计学意义。
2 结果
2． 1 MC衍生物的抗肿瘤活性
MTT实验结果表明，56 种 MC 羟基衍生物中，
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书有42 种可促进 HeLa 细胞存活(IC50为负值，数据
略) ，14 种可抑制 HeLa 细胞存活(表 1)。其中
F41 的 IC50最低，为(11． 3 ±2． 1)μmol·L
－1，显著低
于 MC的(17． 2 ±3． 3)μmol·L －1(P ＜0． 01) ，表明
F41 对 HeLa细胞的细胞毒作用明显强于 MC。
Tab． 1 IC50 for marchantin C (MC)derivatives on
HeLa cell survival
Derivative
IC50 /
μmol·L －1
Derivative
IC50 /
μmol·L －1
F41 11． 3 ±2． 1 J4 28． 1 ±3． 3
H38 25． 0 ±3． 5 W5 49． 4 ±8． 2
H43 87． 2 ±10． 7 W13 254． 8 ±30． 1
H44 51． 5 ±8． 4 W14 32． 2 ±5． 1
H47 35． 1 ±5． 5 W15 34． 6 ±4． 8
H48 51． 9 ±6． 9 W16 71． 7 ±8． 8
H51 74． 8 ±9． 7 W18 18． 8 ±2． 8
HeLa cells were respectively incubated with MC derivatives for
24 h． The cell survival rate was measured using the MTT assay．
x ± s，n =3．
2． 2 F41 对 HeLa细胞存活的影响
如图 1 所示，F41 和 MC 对 HeLa 细胞存活的
抑制作用均呈时间和浓度-效应关系。随着浓度的
增加和处理时间的延长，F41 和 MC 抑制 HeLa 细
胞存活的作用均逐渐增强。F41 作用 24 h 时效应
呈浓度依赖性增强(r = 0． 911，P ＜ 0． 05) ;F41
10 μmol·L －1时效应呈时间依赖性增强(r =0． 940，
P ＜0． 05)。然而，在药物处理的每个时间段，在一
定的浓度范围内，F41 的抑制作用均明显强于 MC
(P ＜0． 05)。另外，尽管 F41 和 MC 的细胞毒作用
都是随着作用时间的延长而明显增强，但 F41 比
MC起效更快。如药物浓度为20 μmol·L －1、处理时
间为 24 h 时，MC 的生长抑制率只有 15%，而 F41
可达到 55%，两者差异明显(P ＜0． 01)。
2． 3 F41 对细胞形态的影响
HeLa细胞经 F41 处理 24 h 后，倒置显微镜可
见光下观察可见，对照组细胞呈正常增殖状态(图
2A) ;F41 5 μmol·L －1组细胞状态和数目与对照组相
比无明显变化(图2B) ;F41 10 μmol·L －1组细胞数则
明显减少，降至对照组的 42． 9%(P ＜0． 01) ，且细胞
皱缩变小，并有空泡出现(图 2C) ;F41 15 μmol·L －1
组细胞数仅为对照组的 30． 2%(P ＜0． 01) ，而空泡
数目则占到了细胞总数的 27． 4%，且有凋亡小体出
现(图 2D)。
Fig． 1 Influences of F41 and MC on survival of HeLa
cells by MTT method． HeLa cells were treated with F41 or MC
0，5，10，15 and 20 μmol·L －1，respectively，for 24 h (A) ，48 h
(B)and 72 h (C)． x ± s，n = 3． * P ＜ 0． 05，compared with the
same concentration of MC．
Fig． 2 Morphological changes of HeLa cells treated
with F41 by inverted microscope (× 400)． HeLa cells
were treated with F41 for 24 h． Arrows indicate apoptotic cells and
apoptotic bodies． A:control;B － D:F41 5，10 and 15 μmol·L －1，
respectively．
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书2． 4 F41 对细胞核形态的影响
如图 3所示，对照组细胞核均匀，细胞有丝分裂
正常(图 3A) ，F41 5，10和 15 μmol·L －1组镜下细胞
数目逐渐减少，分别为对照组的 45． 1%(P ＜0． 01)、
30．0%(P ＜0．01)及 16．8%(P ＜0．01) ，同时胞核浓
缩变小，出现典型的凋亡形态(图 B，C，D)。
Fig． 3 Morphological alterations of nuclei of HeLa
cells treated with F41 by inverted microscope (×400)．
HeLa cells were treated with F41 for 48 h． Arrows indicate nuclei
of apoptotic cells． A: control; B － D: F41 5， 10 and
15 μmol·L －1，respectively．
2． 5 F41 处理后细胞染色质 DNA 的变化
图 4 结果显示，用 F41 10 和 15 μmol·L －1处理
HeLa细胞 48 h 后，细胞 DNA 电泳后呈梯状条带，
表明细胞 DNA 出现片段化，被处理的细胞发生明
显的凋亡;而对照细胞和 F41 5 μmol·L －1处理细胞
的 DNA分子质量大，电泳时不移动或移动较慢，迁
移距离较短，表明这些细胞发生凋亡较少，DNA 比
较完整。
Fig． 4 Effect of F41 on DNA fragmentation in HeLa
cells． HeLa cells were treated with F41 for 48 h． Lane 1 －4:F41
0，5，10 and 15 μmol·L －1 groups，respectively．
2． 6 F41 对细胞周期的影响
如图 5 和表 2 所示，F41 处理 24 h后，HeLa细
胞G2 /M期细胞占总细胞的比例与对照组比较明显
增高(P ＜0． 01) ，G1 期细胞比例则明显降低(P ＜
0． 01) ，S期细胞比例无明显变化。
Fig． 5 Effect of F41 on cell cycle distribution in HeLa
cells． A:control;B:HeLa cells treated with F41 15 μmol·L －1 for
24 h．
Tab． 2 Cell cycle distribution of HeLa cells treated
with F41
Group G1 /% S/% G2 +M/%
Control 63． 6 ±5． 5 23． 2 ±1． 7 13． 1 ±1． 6
F41 34． 8 ±2． 8＊＊ 21． 3 ±2． 0% 43． 8 ±4． 0＊＊
HeLa cells were treated with 15 μmol·L －1 of F41 for 24 h． x ± s，
n =3． ＊＊P ＜0． 01，compared with control cells．
2． 7 F41 对细胞周期相关蛋白表达的影响
如图 6 所示，随着 F41 处理浓度的增加，HeLa
Fig． 6 Expressions of cyclin-dependent protein kinase
1 (CDK1) ，cyclin B1 and P53 in HeLa cells by Western
blotting． HeLa cells were incubated with F41 0，5，10 and 15
μmol·L －1 for 24 h，respectively． Lane 1 －4:F41 0，5，10 and 15
μmol·L －1 ． IA:integrated absorbance． B was the semiquantitative
result of A． x ± s，n =3． * P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01，compared with
control group．
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书细胞内磷酸化 CDK1 水平逐渐降低(P ＜0． 05) ，而
周期蛋白 B1 表达水平则随着 F41 处理浓度的增加
而升高(P ＜ 0． 01)。另外，HeLa 细胞内 P53 蛋白
表达水平在 F41 处理后升高(P ＜0． 05)。
3 讨论
MC是一种双联苄类化合物，对多种肿瘤细胞
具有很强的细胞毒作用［6］，且可通过 EＲK /MAPK
信号通路抑制神经胶质瘤 T98G 和 U87 细胞的侵
袭［7］。联苄类化合物除具有抗微生物活性外，还可
抑制一氧化氮合酶［6］和 α-葡萄糖苷酶活性，且对人
上皮性口腔癌 KB 细胞和鼠白血病 P388 细胞表现
出很强的细胞毒作用［3，6］。史艳秋等［8 －9］发现，在
人恶性胶质瘤 A172 细胞和子宫颈腺癌 HeLa 细
胞，MC能够结合微管，并可引起肿瘤细胞凋亡。目
前，对 MC 进行结构分析和改造的研究还不多。
席广民等［5］用 MC 及 MC 的 3 种甲基化衍生物
MC1，MC2 和 MC3 处理长春新碱敏感型 KB 细胞
和长春新碱非敏感型 KB /VCＲ 细胞，发现 MC2 处
理能够抑制 KB /VCＲ 细胞 P-gp 的转运能力，提高
KB /VCＲ 细胞对多柔比星等化疗药物的敏感性。
孙斌等［4］在 MC的基础上人工合成了 24 种羟基化
衍生物，其中有 8 种衍生物对 HeLa 细胞的 IC50低
于 MC，表现出更好的细胞生长抑制活性。显然，构
建新的 MC衍生物有助于寻找新的抗肿瘤药物。
因此，本研究用 HeLa 细胞做为抗肿瘤药物筛
选的模型细胞，对 56 种 MC 羟基衍生物进行了筛
选，发现其中的 F41 具有最强的抗肿瘤作用。尽管
F41 在结构上仅有一个位置上的取代基团与 MC不
同，但其 IC50仅是 MC 的 65． 8%。MTT 法分析结
果表明，F41 无论是在时间效应上还是在浓度效应
上，其对 HeLa细胞的细胞毒作用都明显强于 MC。
因此 F41 是一个具有潜在应用前景的 MC 衍生物。
为此，本研究进一步探讨了 F41 抗肿瘤作用的细胞
与分子生物学机制。细胞形态学观察、DAPI 细胞
核染色实验及 DNA梯带检测显示，F41 可以明显促
进 HeLa 细胞凋亡，表明 F41 抑制 HeLa 细胞生长
的作用可能与其促进 HeLa 细胞凋亡有密切的关
系。由于 MC 可使 HeLa 细胞 Bcl 表达水平下降，
Bax表达水平增高，能通过 Bcl /Bax 参与的凋亡途
径促进细胞凋亡［4］，因此本研究亦观察了 F41 处理
前后 HeLa 细胞内 Bcl-2 和 Bax 的表达水平，发现
Bcl-2和 Bax的表达水平均未发生明显的变化(数据
略) ，推测 F41促进细胞凋亡的分子机制与 MC有所
不同。流式细胞分析显示，F41 可引起 HeLa细胞周
期的改变，具体表现为 G2 /M 期细胞比例明显增加，
G1 期细胞显著减少。本研究还观察了 F41 对 HeLa
细胞磷酸化 CDK1 水平及细胞周期蛋白 B1 和 P53
蛋白表达的影响，发现 F41 处理后 HeLa 细胞内
CDK1活性降低、细胞周期蛋白 B1 及 P53 蛋白表达
增多。这表明与 MC 相似，F41 导致 G2 /M 期细胞
比例增加可能是由 G2 /M 期阻滞引起的，亦即 F41
对 HeLa细胞的细胞毒作用也可能与其抑制细胞周
期有关。另外，P53 表达水平的升高也提示，F41 引
起的 HeLa细胞凋亡可能与此有关。
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·053· 中国药理学与毒理学杂志 2013 年 6 月第 27 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 27，No 3，Jun 2013
书Effect of marchantin C derivative F41 on apoptosis of human
cervical cancer HeLa cells
WEI Yu-ping1，GUO Yuan-fang1，SUN Gao-ying1，WANG Xiao-yuan2，LIU Yong-qing1，
HU Zhong-yi1，BI Wen-xiang1
(1． Institute of Biochemistry and Molecular Biology，School of Medicine，Shandong University，
Jinan 250012，China;2． Department of Gynecology and Obstetrics，Jinan Central Hospital，
Jinan 250013，China)
Abstract:OBJECTIVE To select a derivative of marchantin C (MC)with the highest antitumor ac-
tivity by screening hydroxyl derivatives of MC and investigate the cellular and molecular biological mecha-
nisms of its antitumor action． METHODS Fifty-six kinds of MC hydroxyl derivatives were screened
using human cervical cancer HeLa cells by MTT assay in order to find the MC derivative with the stronger
cytotoxicity． The inhibitory effect of the MC derivatives on the growth of HeLa cells was compared with
that of MC by MTT assay． An inverted microscope，DAPI staining，and apoptosis-DNA ladder assay
were used to observe its effects on apoptosis． Its influences on cell cycle were detected by flow cytome-
try． The influences on expression of proteins related to cell cycle and apoptosis were detected using
Western blotting． ＲESULTS F41 showed the strongest cytotoxicity to HeLa cells among the 56 kinds of
MC derivatives． The IC50 of HeLa cells exposed to F41 and MC were 11． 3 ±2． 1 and
(17． 2 ±3． 3)μmol·L －1，respectively，which had obvious difference (P ＜0． 01)． The MTT assay showed
that when HeLa cells were treated with F41 and MC for 24，48，and 72 h，the growth inhibitory rate of
HeLa cells treated with F41 was higher than that with MC (P ＜0． 05)． Morphological observations and
DNA ladder assay indicated that after HeLa cells were treated with F41，they shrank and became smal-
ler，vacuoles and apoptotic bodies appeared，the nuclei condensed and became smaller，and a typical
ladder pattern of DNA fragmentation in them was observed． Flow cytometry analysis showed that after
HeLa cells were treated with F41 15 μmol·L －1 for 24 h，the percentage of HeLa cells at G2 /M phase was
(43． 8 ±3． 0)%，much more than (13． 1 ± 1． 6)% in control cells (P ＜ 0． 01)while the percentage of
HeLa cells at G1 phase was (34． 8 ± 3． 8)%，much less than (63． 6 ± 5． 5)% in control cells (P ＜
0． 01)． Western blotting results demonstrated that F41 could reduce the level of phophorylated cyclin-de-
pendent protein kinase 1 and increase the expression of cyclin B1 and P53 in HeLa cells． CONCLUSION
F41 can promote HeLa cell apoptosis and inhibit their division and has much stronger cytotoxicity against
HeLa cells than MC．
Key words:marchantin C;hydroxyl derivatives;cell cycle;apoptosis
Foundation item:The project supported by Shandong Young Scientists Award Fund(2008BS03038)
Corresponding author:BI Wen-xiang，E-mail:biwenxiang@sdu． edu． cn，Tel: (0531)88382092
(收稿日期:2012-11-20 接受日期:2013-03-22)
(本文编辑:齐春会)
·153·中国药理学与毒理学杂志 2013 年 6 月第 27 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 27，No 3，Jun 2013