全 文 ：【收稿日期】2007-02-06
【作者简介】郑丛龙(1955-), 男 , 副教授 , 从事病原微生物学研究 ,
Email:zcl9812@yahoo.com.cn
文章编号:1005-376X(2007)04-0343-02 【论　　著】
纳豆杆菌对白假丝酵母菌的拮抗作用
郑丛龙 ,刘晓伟 ,林苗 ,周成英 ,齐金燕
(大连大学医学院 , 辽宁 大连　116622)
　　【摘要】　目的　探讨纳豆杆菌对白假丝酵母菌的拮抗作用。方法　将纳豆杆菌和白假丝酵母菌混合培养
24h后 ,应用沙保弱平板培养基分离白假丝酵母菌 ,计数菌落 ,计算纳豆杆菌对白假丝酵母菌的拮抗率。结果　纳
豆杆菌对白假丝酵母菌的拮抗作用明显 ,拮抗率高达 91.91%;纳豆杆菌肉汤培养物的除菌滤液对白假丝酵母菌也
有明显的拮抗作用 ,拮抗率为 79.05%。结论　纳豆杆菌对白假丝酵母菌具有明显拮抗作用 , 是白假丝酵母菌的理
想拮抗菌株。
【关键词】　纳豆杆菌;白假丝酵母菌;拮抗作用
【中图分类号】R378.7　　　　【文献标识码】A
TheantagonisticeffectsofBacilusnattoonCandidaalbicans
ZHENGCong-long, LIUXiao-wei, LINMiao, ZHOUCheng-ying, QIJin-yan
(MedicalColegeofDalianUniversity, Dalian116622, China)
【Abstract】　Objective　ToexploretheantagonisticeffectsofBacilusnatoonCandidaalbicans.Methods　Bacil-
lusnatoandCandidaalbicansweremixedtocultureinbrothmediumfor24 hours, isolatingCandidaalbicansbySabouraud
platemedium.TheantagonisticrateofBacilusnattotoCandidaalbicanswascalculatedaccordingtocolonynumbersonSa-
bouraudplatemedium.Results　BacillusnatowasofmarkedantagonisticeffectsonCandidaalbicans, theantagonisticrate
was91.91%.ThefiltrateofbrothcultureofBacillusnatoalsohadevidentantagonisticefectsonCandidaalbicans, thean-
tagonisticratewas79.05%.Conclusion　BacilusnattoisofremarkableantagonisticefectsonCandidaalbicans, andis
anidealantagonisticstraintoCandidaalbicans.
【Keywords】　Bacillusnatto;Candidaalbicans;Antagonisticeffects
　　白假丝酵母菌通常存在于人的口腔 、上呼吸道 、
肠道等部位 ,当机体发生菌群失调或抵抗力下降时 ,
可引起白假丝酵母菌病。白假丝酵母菌可侵犯人体
多个部位 ,如口腔 、阴道 、皮肤 、肺 、肠 、肾和脑等 。近
年来 ,由于抗菌药物 、激素和免疫抑制剂在临床上的
大量使用 ,假丝酵母菌感染日益增多。目前 ,白假丝
酵母菌已成为医院感染中最常见的病原菌之一 [ 1, 2] 。
白假丝酵母菌属条件致病性真菌 ,也是烧伤 、肿瘤 、器
官移植和艾滋病患者等主要的感染性微生物。因此 ,
积极探讨白假丝酵母菌感染的治疗和预防 ,具有重要
的临床意义 。纳豆杆菌是在 20世纪中期被发现并分
离出来的 ,其原始菌株与枯草芽胞杆菌相同 ,是枯草
芽胞杆菌的一个亚种。纳豆杆菌属于需氧菌中的非
致病菌 ,该菌能分泌多种消化酶 、维生素和天然抗菌
物质 ,是一种营养型益生菌 。目前 ,关于纳豆芽胞杆
菌对条件致病性真菌的抑制作用尚未进行广泛的研
究 。本研究通过探讨纳豆杆菌对白假丝酵母菌的拮
抗作用 ,旨为白假丝酵母菌感染的生态防治提供新的
菌株。
1　材料与方法
1.1　菌种　纳豆杆菌和白假丝酵母菌 ,为大连大学
医学院病原生物学教研室保存菌种。
1.2　培养基 　营养肉汤培养基和沙保弱 (Sab-
ouraud)培养基 ,按常规方法制备。
1.3　方法
1.3.1　纳豆杆菌对白假丝酵母菌的前拮抗作用　将
纳豆杆菌和白假丝酵母菌分别接种于 2 ml营养肉汤
培养基中 , 37 ℃恒温箱中培养 24 h。然后 ,将白假丝
酵母菌营养肉汤培养物混匀 ,取 0.1 ml分别接种于
纳豆杆菌营养肉汤培养物和营养肉汤培养基中 ,混
匀 。 37 ℃恒温箱中培养 24 h。取出上述培养物 ,混
匀 ,用无菌生理盐水分别进行 5 ×10-4稀释。然后 ,
分别取 0.1ml放入沙保弱平板培养基表面 ,用无菌
的 L棒 ,均匀涂布 ,每组 3 ～ 4平板 , 将培养物置 37
℃恒温箱中培养 , 48 h后 ,计数每个平板上的白假丝
酵母菌的菌落数 , 本实验重复 2次 。以白假丝酵母
菌单独培养组为 C,以纳豆杆菌和白假丝酵母菌的混
合培养组为 T,纳豆杆菌对白假丝酵母菌拮抗率的计
算公式如下:拮抗率(%)﹦(C-T)/C×100%。
1.3.2　纳豆杆菌对白假丝酵母菌的后拮抗作用　将
纳豆杆菌和白假丝酵母菌分别接种于 2 ml营养肉汤
培养基中 , 37 ℃恒温箱中培养 24 h。取出上述培养
物混匀 ,取 0.5 ml纳豆杆菌肉汤培养物接种于白假
丝酵母菌肉汤培养物中 ,混匀。另取营养肉汤培养基
0.5 ml加入 2ml白假丝酵母菌 24 h肉汤培养物中 ,
作为对照 。 37℃恒温箱中培养 24 h。取出上述培养
物 ,混匀 ,用无菌生理盐水分别进行 10-5稀释。然
后 ,分别取 0.1 ml放入沙保弱平板培养基表面 ,用无
菌的 L棒 ,均匀涂布 ,每组 3 ～ 4平板 , 将培养物置 37
℃恒温箱中培养 , 48 h后 ,计数每个平板上的白假丝
酵母菌的菌落数 , 本实验重复 2次。按 1.3.1计算
343中国微生态学杂志　2007年 6月第 19卷第 4期
DOI :10.13381/j.cnki.cjm.2007.04.010
纳豆杆菌对白假丝酵母菌的拮抗率。
1.3.3　纳豆杆菌除菌滤液对白假丝酵母菌的抑制作
用　将纳豆杆菌接种于营养肉汤培养基中 , 37 ℃恒
温箱中培养 24h。取出上述培养物混匀 ,用除菌滤器
将纳豆杆菌肉汤培养物除菌过滤 ,获得纳豆杆菌除菌
滤液。取 0.1 ml白假丝酵母菌肉汤培养物接种于 2
ml纳豆杆菌除菌滤液中 ,混匀。另取 0.1 ml白假丝
酵母菌肉汤培养物接种于 2 ml营养肉汤培养基作为
对照。 37 ℃恒温箱中培养 24 h。取出上述培养物 ,
混匀 ,用无菌生理盐水分别进行 10-5稀释 ,然后 ,按
1.3.1方法进行实验 ,计算纳豆杆菌除菌滤液对白假
丝酵母菌的抑菌率。
1.3.4　统计学处理　数据统计处理采用 t′检验 。
2　结果
2.1　纳豆杆菌对白假丝酵母菌的前拮抗作用　实验
结果表明 ,纳豆杆菌 24 h肉汤培养物 ,对白假丝酵母
菌有明显的拮抗作用 ,拮抗率为 91.91%,具体结果
见表 1。
表 1　纳豆杆菌对白假丝酵母菌的前拮抗作用
组别　　　　 菌落数 拮抗率(%)实验组 21.67±3.88﹡ 　　91.91对照组 268.00±22.29 　　 -
　注:对照组为白假丝酵母菌单独培养组;实验组为纳豆杆菌和白假
丝酵母菌的混合培养组 , ﹡ P<0.001
2.2　纳豆杆菌对白假丝酵母菌的后拮抗作用　向白
假丝酵母菌 24h肉汤培养物中加入一定量的纳豆杆
菌 ,然后 37 ℃恒温箱中培养 24 h。实验结果表明 ,纳
豆杆菌对白假丝酵母菌具有明显的后拮抗作用 ,拮抗
率为 86.57%,具体结果见表 2。
表 2　纳豆杆菌对白假丝酵母菌的后抑制拮抗作用
组别　　　　 菌落数 拮抗率(%)实验组 44.17±4.22﹡ 　　86.57对照组 328.83±24.25 　　-
　注:对照组为白假丝酵母菌单独培养组;实验组为纳豆杆菌和白假
丝酵母菌的混合培养组 , ﹡ P<0.001
2.3　纳豆杆菌除菌滤液对白假丝酵母菌的拮抗作用
将纳豆杆菌接种于营养肉汤培养基中 , 37 ℃恒
温箱中培养 24h,取出培养物用除菌滤器过滤 。实验
结果表明纳豆杆菌除菌滤液对白假丝酵母菌有明显
的拮抗作用 ,拮抗率为 79.05%,具体结果见表 3。
表 3　纳豆杆菌除菌滤液对白假丝酵母菌的拮抗作用
组别　　　　 菌落数 拮抗率(%)实验组 58.00±5.40﹡ 　　79.05对照组 276.83±18.57 　　-
　注:对照组为白假丝酵母菌单独培养组;实验组为纳豆杆菌除菌滤
液组 , ﹡ P<0.001
3　讨论
近年来 , 随着广谱抗生素 、激素和免疫抑制剂的
普遍应用 ,以及肿瘤患者的化疗 、放疗及艾滋病等获
得性免疫功能低下患者的逐年增加 ,致使医源性菌群
失调频发 , 继发真菌感染明显增多 ,白假丝酵母菌已
成为黏膜和内脏真菌感染的主要致病菌之一 。白假
丝酵母菌病的治疗主要应用抗真菌药物 ,但副作用较
大 ,易产生耐药性 。目前 ,对白假丝酵母菌病的高危
人群尚未建立有效的预防措施 。这些问题给白假丝
酵母菌病的防治带来了很大困难 。因此 ,积极探讨微
生态疗法控制白假丝酵母菌的感染日益受到关
注 [ 3, 4] 。本研究的结果表明纳豆杆菌及其除菌滤液
对白假丝酵母菌有明显的拮抗作用。纳豆杆菌对白
假丝酵母菌的前拮抗作用的结果提示 ,纳豆杆菌对白
假丝酵母菌的感染可能具有预防作用。纳豆杆菌对
白假丝酵母菌的后拮抗作用的结果提示 ,纳豆杆菌对
白假丝酵母菌的感染可能具有一定的治疗作用 。
纳豆杆菌对白假丝酵母菌拮抗作用的机制可能
是多方面的。纳豆杆菌的大量增殖 ,可通过营养竞争
抑制白假丝酵母菌的生长[ 5] ;纳豆杆菌产生的吡啶
二羧酸和其他大量短链脂肪酸可抑制白假丝酵母菌
的生长 ,丁酸可通过抑制几丁质合成酶 、破坏真菌细
胞壁而阻止真菌发生形态改变 ,有学者报告纳豆杆菌
产生的吡啶二羧酸可对革兰阳性菌有较大的拮抗性 ,
特别对伤寒 、副伤寒 、痢疾等传染病的抑制作用较为
明显 ,可以有效地抑制致病性大肠埃希菌的生长 ,尤
其对痢疾杆菌 O157原发性大肠埃希菌 、伤寒沙门菌
等都有较强的抑制作用[ 6] ;纳豆杆菌可分泌一种肽
类抗生素 ,能对一些重要肠道致病菌 ,如病原性大肠
埃希菌 、沙门菌 、霍乱弧菌 、阿米巴变形痢疾原虫等起
杀灭或抑制作用 [ 7] 。
纳豆杆菌是拮抗白假丝酵母菌的理想生产菌株 。
纳豆杆菌属于需氧菌中的非致病菌 ,这类细菌在条件
不利的情况下能形成芽胞 , 将自己保护起来 ,复活率
高 。在使用时多制成该菌休眠状态的活菌制剂 。由
于纳豆杆菌具有芽胞 , 因而能耐酸 、耐碱 、耐高温
(100℃)及耐挤压 , 在制粒过程及酸性胃环境中均
能保持高度的稳定性。纳豆杆菌的需氧的特性能促
进有益厌氧菌的生长 ,抑制需氧菌的生长。纳豆杆菌
具有分泌很强的蛋白酶 、脂肪酶 、淀粉酶等活性 。纳
豆杆菌的这些生物学特性使其具备了微生态制剂理
想菌株的条件 ,值得深入研究。
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344 ChineseJournalofMicroecology, June2007, Vol.19 No.4