全 文 ：婆婆纳‘达尔文之蓝’（Veronica＇Darwin＇s
Blue＇）为玄参科婆婆纳属多年生草本植物，株高
30～35 cm，花期 5～10 月，蓝色花，是近几年从国
外引进，适宜我国北方地区的优良宿根花卉，耐
寒、耐旱及瘠薄土壤 [1-3]，主要用于园林绿化中布
置花坛、花境，以弥补夏秋季花卉稀少的现状，主
要通过常规的无性扦插和分株方式来繁殖。但在
栽培繁殖过程中发现，随着繁殖次数和栽植年限
的增加，出现了植株的长势和花的品质越来越差
的严重退化现象 [4-7],从而使繁殖率大大降低，很难
满足市场供应，甚至一物难求。针对此问题，可利
用植物组织培养技术，进行脱毒复壮和快速繁殖，
以提供大量优质种苗，但目前关于宿根婆婆纳‘达
尔文之蓝’和同属品种的茎尖剥离组织培养及脱
毒复壮快繁技术尚未见报道。
1 材料和方法
1.1 材 料
1.1.1 外植体 以带茎尖和腋芽的茎段为材料，
由北京花木有限公司宿根花卉基地提供。
1.1.2 培养基 以 MS 为基本培养基，添加不同
收稿日期：2013-10-24；修订日期：2013-11-17
作者简介：魏进莉(1975—),女，宁夏固原人，工程师，主要从事苗木、花卉和蔬菜等的脱毒检测技术、组培快繁技术和工厂化生产技术研究。
植物生理与生物技术
宿根婆婆纳‘达尔文之蓝’的组培脱毒和快繁技术
魏进莉
（北京市花木有限公司 花卉研究所，北京 100093）
摘 要 ：将供试品种的带茎尖和腋芽的茎段，用 70%酒精浸泡 30 s，然后用 20%的次氯酸钠溶液浸泡 30 min，无菌水冲洗
4 次，消毒处理后剥取 0.1～0.3 mm 的茎尖，接种于以 MS 为基本培养基添加 6-BA、IAA、N A 等外源激素的培养基中，研
究了不同条件对愈伤组织诱导芽形成和芽继代增殖、生根和移栽效果的影响。结果表明，以 MS 为基本培养基, 添加
6-BA 1.0 mg·L-1和 IAA0.5 mg·L-1为较适宜的外植体诱导愈伤组织和愈伤组织诱导芽的培养基。最佳继代增殖培养基为
6-BA2.0 mg·L-1和 NAA0.1 mg·L-1。最佳生根培养基为 1/2MS 添加 NAA0.2 mg·L-1和 IAA1.0 mg·L-1。25 d 后,组培苗移栽
成活率达到 98%以上。
关键词：宿根花卉；茎尖剥离；愈伤组织；芽诱导；玻璃化
中图分类号：S336 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2014.05.009
Virus Elimination and Rapid Propagation by the Tissue Culture Technology of Perennial Veronica Dar-
wins Blue
WEI Jin-li
（Flower Research Institute，Beijing Florascape Company Limited，Beijing 100093，China)
Abstract：Varieties were tested with stem tip and lateral bud of stem section, with 70% alcohol immersion 30 s, and then use 20%
sodium hypochlorite solution soak for 30 min, sterile water flushing 4 times, 0.1~ 0.3 mm strip after disinfection treatment of stem
tip, inoculated on the MS as the basic culture medium added 6-BA, IAA, NAA medium of exogenous hormone, effect of different
conditions on the callus induction of bud formation and transgenerational proliferation, rooting and transplanting was studied. Re-
sults showed that with MS as the basic medium, added 6 - BA1.0 mg·L-1and IAA0.5 mg·L-1 was a more suitable explant callus
induction of callus induction and bud medium. The best for transgenerational proliferation medium were 6 -BA2.0 mg·L -1and
NAA0.1 mg·L-1. The best for rooting medium were adding NAA0.2 mg·L-1and IAA1.0 mg·L-11/2 MS. After 25 d, tissue culture
seedlings transplanting survival rate reached over 98%.
Key words: perennial root flower；stem tip；callus；bud induction；vitrification
2014，20（5）：39-42天津农业科学 Tianjin Agricultural Sciences
天津农业科学 第 20卷
种类和不同浓度水平的外源激素 [8-9], 愈伤组织和
丛生芽诱导、增殖培养基添加绵白糖 30 g·L-1，琼
脂粉 4.5 g·L-1；生根培养基添加绵白糖 20 g·L-1，
琼脂粉 5.0 g·L-1。各培养基均为 pH值 5.8～6.0，121
℃下,高压蒸汽灭菌 20 min。
1.1.3 培养条件 光照强度 3 000 lx, 光照时间 12
h，温度(24±2) ℃。增殖和生根培养与此相同。
1.2 方 法
取宿根婆婆纳‘达尔文之蓝’带茎尖和腋芽的
幼嫩茎段，长 2～3 cm，剪去叶片，用柔软的毛刷蘸
取洗衣粉水轻轻刷洗干净，用流水冲洗 0.5～1 h。
在超净工作台上，用 70%的酒精浸泡 30 s，再用
20%的次氯酸钠溶液浸泡 20 min，用无菌水冲洗
4次，待用。
1.2.1 茎尖剥离诱导愈伤组织和丛生芽 在超
净工作台上，将已消毒的外植体材料在生物解剖
镜下，剥取 0.1～0.3 mm 大小的茎尖 [10]，接种于培
养基上：①6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1;②6-
BA1.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1; ③6-BA2.0 mg·L-1+
NAA0.1 mg·L -1; ④ 6 -BA2.0 mg·L -1 +NAA0.2
mg·L-1; ⑤6-BA1.0 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1; ⑥6-
BA1.0 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1;⑦6-BA2.0 mg·L-1+
IAA0.5 mg·L-1;⑧6-BA2.0 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1。
每瓶培养基接 1 个茎尖，每种培养基 20 个重复，
共 160瓶。培养 30 d时，观察记录结果。
1.2.2 继代增殖培养 将茎尖诱导所得丛生芽剪
切成 2 cm左右带 2～3个腋芽的段，接种到增殖培
养基上：①6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1;②6-BA1.0
mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1;③6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1
mg·L-1;④6-BA2.0 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1。每种培
养基接种 5瓶，每瓶 8株，30 d观察记录结果。
1.2.3 生根培养 将株高 2～3 cm 带有 4～6 个
叶片的无根壮苗，转接到以 1/2MS 为基本培养
基，添加①NAA0.2 mg·L-1, ②NAA0.2 mg·L-1+
IAA1.0 mg·L-1，③NAA0.4 mg·L -1，④NAA0.4
mg·L-1 +IAA1.0 mg·L-1 的生根培养基上，每种
培养基接种 5 瓶，每瓶 15 株，进行生根培养，20
d 观察统计结果。
1.2.4 移栽炼苗 将培养 20 d 的生根苗移到温
室，拧松瓶盖炼苗 3～5 d，将苗从培养瓶中取出，
清洗干净根部的培养基，栽到装有基质（优质草
炭+蛭石+珍珠岩=3∶1∶1）的 128 孔穴盘上，25 d 观
察统计结果。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织和丛生芽的诱导
在宿根婆婆纳‘达尔文之蓝’的茎尖诱导愈伤
组织和丛生芽的过程中，发现外源激素的种类及
浓度对愈伤组织和芽的形成都有着不同程度的影
响。细胞分裂素（即 6-BA）的浓度高时，愈伤组织
和芽的形成相对较多，但易造成玻璃化；生长素
NAA 浓度高时，不利于芽的形成和生长，玻化严
重；生长素 IAA 浓度高时，有利于芽的形成和生
长。具体情况见表 1。
由表 1 中可看出，在 8 种添加了不同激素种
类和浓度水平的培养基中，愈伤组织和芽形成的
多少及百分率、玻璃化现象的存在、芽苗的株高和
健壮程度都有所不同，并且存在着明显的差异。其
中以编号为⑥的培养基表现性状最好，⑤和⑧较
表 1 8 种不同培养基中愈伤组织和芽的形成情况
培养基
编号
愈伤组织形成情况及
百分率
芽诱导形成情况及百分率
① 100%，愈伤组织形成
较多，无玻化现象
65%，有丛生芽形成，芽 3～5
个，高 1.0～3.5 cm，芽苗较细
弱，部分芽苗半玻化
② 55%，愈伤组织形成
较多，有玻化现象
30%，有丛生芽形成，芽 2～3
个，高 0.5～3.0 cm，芽苗细弱，
部分芽苗玻化
③ 75%，愈伤组织形成
较多，有轻微玻化现
象
60%，有丛生芽形成，2～5个，
高 0.5～3.0 cm，芽苗较细弱，
部分芽苗半玻化
④ 50%，愈伤组织形成
较少，玻化现象严重
无芽形成
⑤ 100%，愈伤组织形成
较少，无玻化现象
100%，有丛生芽形成，芽 2～5
个，高 1.0～4.5 cm，芽苗较粗
壮，无玻化
⑥ 100%，愈伤组织形成
较少，无玻化现象
100%，有丛生芽形成，芽 3～7
个，高 1.0～8 cm，芽苗粗壮，
大苗多，无玻化
⑦ 90%，愈伤组织形成
相对较多，有玻化现
象
80%，有丛生芽形成，芽 3～6
个，高 0.5～4.5 cm，芽相对较
细弱，大苗相对较少，部分苗
玻化
⑧ 100%，愈伤组织形
成相对较多，有玻化
现象
90%，有丛生芽形成，芽 3～7
个，高 0.5～6.0 cm，芽相对
较粗壮，大苗较多，部分苗
半玻化
·40·
第 5期
好，⑦次于⑤和⑧，①和③较差，②很差，④最差。
2.2 继代增殖
继代增殖培养基的设计，以茎尖诱导愈伤组
织和芽的结果为参考依据。在继代增殖培养过程
中，发现激素种类和浓度不同对芽增殖的影响也
有所不同，并且与芽诱导的结果较为一致。6-BA
浓度高时有利于芽的形成，IAA 浓度高时有利于
苗的生长。6-BA与 NAA配比时更有利于芽的增
殖培养，而与 IAA 配比时有利于壮苗培养。具体
情况见表 2。
由表 2 可看出，编号为③的培养基增值系数
最高，从整体情况来看为最好的增殖培养基；④次
之，增殖系数略低一点，但苗较高壮一些，且有老
化生根现象；①和②相对较差，增值系数低。
2.3 生根培养
生根培养基的设计，以增殖培养结果为参考
依据。在生根培养过程中，发现激素种类和浓度对
根的形成有着很大影响。单独使用 NAA 时，不利
于根的形成，且当 NAA 浓度增高时，苗基部产生
较多愈伤组织，使根的形成严重受阻；当将 NAA
与 IAA结合使用时，情况较好。具体情况见表 3。
由表 3 可看出，编号为②的培养基中生根情
况最好，生根率达到 100%，根的数量较多，苗基
部产生的愈伤组织很少，有利于移栽成活。①和④
较差，生根率相对较低，根的数量也相对较少，不
利于移栽成活。③最差，生根率不到半数，根数少
且苗基部愈伤组织形成较多，很不利于移栽成活。
2.4 移栽炼苗
宿根婆婆纳‘达尔文之蓝’的生根苗在移栽
25 d时根已满穴，株高 10 cm左右，苗健壮有分枝
形成，成活率达到 98%以上。
3 讨 论
3.1 玻璃化现象形成的影响因素
在增殖培养过程中发现，当温度升高时，易形
成玻璃化苗，尤其当温度高于 24 ℃时，随着温度
的升高玻璃化苗的数量明显增多；当温度降低时，
玻璃化现象减少或无玻化，但苗的生长缓慢。另
外，在相同温度条件下，当细胞分裂素 6-BA 和生
长素 NAA的浓度增加时，易形成玻璃化苗。当两
种因素同时存在时，玻璃化现象加重。玻璃化程度
较轻时，在温度条件适宜时会恢复成好苗；而玻璃
化严重时，无法恢复，会慢慢褐化死亡。玻璃化苗
的产生，使苗增殖扩繁和生根培养的数量与质量
都受到影响。尤其是在大量扩繁生产时，应注意避
免玻璃化苗的形成，以提高苗的生根率和质量，有
效降低成本。
3.2 影响生根率和根数量的因素分析
在生根培养过程中发现，除了激素影响苗的
生根率和根的数量外，苗的老幼程度和是否玻璃
化也影响生根率和根的数量。苗越大，越易生根，
根的数量和生根率都较高；反之，相对较低。玻璃
化苗不易生根，甚至不生根。在大量生产时，在生
根培养前，根据苗的生长状况，可进行一次壮苗培
养，壮苗培养基中的激素浓度可适当降低一些，这
样有利于提高生根率和缩短生根培养时间，有效
降低成本。
3.3 茎尖培养脱毒效果的分析
婆婆纳‘达尔文之蓝’在常规无性繁殖栽培过
程中，出现了退化现象，其表现症状为：叶皱缩，
分枝减少，植株矮小，花量减少，花期短，植株枯
死。此退化现象严重地影响了其观赏性和栽培繁
殖。经茎尖剥离培养出的芽苗，叶片恢复正常，移
栽后很快形成分枝，达到了脱毒壮苗的效果。但由
于各种因素，未进行专业的病毒检测工作。
表 2 4 种不同培养基中芽苗的增殖和生长情况
培养基编号 增殖系数 芽苗的生长情况
① 3.5 无玻璃化，丛生芽 2～4个，高 2～4 cm，
苗健壮，茎相对较细弱，无根形成
② 3 无玻璃化，丛生芽 2～3个，高 3～6 cm，
苗健壮，茎相对较粗壮，有根形成
③ 7 偶有玻璃化，丛生芽 3～8个，高 2～6
cm，苗健壮，茎相对较细弱，无根形成
④ 5.5 偶有玻璃化，丛生芽 3～5个，高 3～8
cm，苗健壮，茎相对较粗壮，有根形成
表 3 4 种不同培养基中的生根情况
培养基编号 生根率/% 生根数量/条 基部愈伤组织形成情况
① 70 0～4 较少
② 100 4～8 少
③ 44 0～4 多
④ 84 0～5 较多
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天津农业科学 第 20卷
4 结 论
综上所述，茎尖剥离诱导愈伤组织和芽形成
的最佳培养基为 MS+6-BA1.0 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1，
在此培养基中芽形成的数量和苗的生长情况最
好；最佳增殖培养基为 MS+6-BA2.0 mg·L -1+
NAA0.1 mg·L-1，在此培养基中苗的增值系数和生
长情况相对优于其它 3种培养基；最佳生根培养
基为 1/2MS+NAA0.2 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1，在此
培养基中苗的生根率和生根数量明显高于其它 3
种培养基；生根苗移栽炼苗容易成活，25 d 时成
活率达 98%以上；适宜的培养温度为 22～24 ℃。
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