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紫红獐牙菜对实验性肝损伤的保护作用



全 文 :·!#· 中药新药与临床药理 !!年 ##月第 #$ 卷第 % 期
证明,中华鼢鼠骨提取物对由 $%& 介导的超敏反应
所致的大鼠佐剂性关节炎早期炎症反应和继发病变均
有明显抑制作用,能明显减轻局部炎症组织的病理损
害,阻止全身病变的发生,各用药组大鼠的耳、尾部
结节等损害情况也比对照组明显减轻。其中,中华鼢
鼠骨提取物大剂量组与生理盐水组比较,致炎侧和对
侧后足跖的病变程度均明显减轻 ’ ! ( )* )+ ,。中华鼢
鼠骨提取物对免疫性炎症的这种作用,可能与其对机
体的免疫功能的抑制有关。此外,中华鼢鼠骨提取物
亦能明显抑制由角叉菜胶引起急性炎症大鼠的足肿
胀,对 -&% 所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增加有
明显抑制作用,可减少炎性渗出,减轻急性炎症症
状。中华鼢鼠骨提取物还能明显减少 -&%所致小鼠
扭体反应,具有一定的镇痛作用。因此,中华鼢鼠骨
提取物具有显著的抗炎、镇痛作用,是一个值得进一
步研究、开发和利用的动物类药物。
参考文献:
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紫红獐牙菜对实验性肝损伤的保护作用
彭 芳,刘晓波,方春生,杨再康,张华明 ’大理医学院药理教研室,云南大理 #+))) ,
摘要:目的 观察紫红獐牙菜总提物对几种物质诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法 采用 %%83 及 9%: ; <=>造成小
鼠肝损伤,并测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶 ’&?,和肝组织丙二醛 ’0@&,的含量,
同时观察肝组织病理改变。结果 紫红獐牙菜总提物能明显降低由 %%83引起的小鼠 &?的升高,缓解肝组织
病理变化,减轻肝脏水肿。而对 9%: ; <=>所致小鼠血清 &?的升高无明显降低作用,但能降低 0@&及肝脏
和脾脏指数,也能缓解肝组织病理改变。结论 紫红獐牙菜总提物具有一定保肝降酶及抗氧化作用,对 %%83 肝损伤
的保护作用比对 9%: ; <=>性肝损伤的保护效果好。
关键词:A紫红獐牙菜 ;药理学;A肝损伤 ;中药疗法
中图分类号:B426* 6 文献标识码:& 文章编号:+))! C 12! ’4))4 ,)# C )!# C )!
紫红獐牙菜 ’>DEFGHI =JKHLEI,系龙胆科 ’:EKGHIKI C
LEIE ,獐牙菜属植物,长期以来被云南彝族、白族、
纳西族等少数民族在局部地区作为治疗黄疸和非黄疸
型肝炎的药物使用。因 《中国药典》中的抗肝炎药青
叶胆资源已日趋枯竭,难于满足生产需要,而紫红獐
牙菜只在民间局部使用且资源丰富,未发挥其应有价
值。故对该植物药进行药效学的研究,进一步确定其
药理作用,对寻找新的抗肝炎的天然药物资源具有重
要的意义。因此,本实验观察紫红獐牙菜总提物对实
验性肝损伤的保护作用。
! 材料与方法
! ! 药品与试剂 紫红獐牙菜及青叶胆总提物 ’每 M
总提物均含生药量 !* !2 M ,,由大理医学院天然药物
化学教研室提供;血清丙氨酸氨基转移酶 ’&号 4)))1)+ ,及天门冬氨酸氨基转移酶 ’&>?,批号
4))+))+ ,试剂盒,均为北京中生生物工程高技术公司
生产;%%83 分析纯 ’批号 12+)+6 ,,天津化学试剂一
厂生产;9%:由卫生部成都生物制品研究所生产 ’批
号 4))+))4 C 4,;<=>由 >HMNI公司生产;0@&试剂
盒购于南京建成生物工程研究所 ’批号 11)#41 ,。
! # 动物 O%B小鼠,体重 +# P 44 M,雌雄兼用,
由云南省天然药物重点实验室提供。
! $ 仪器 &B%Q=%全自动生化分析仪 ’意大利 ,;
44光栅分光光度计 ’上海第三分析仪器厂 ,。
! % 方法
+* 3* + 对 %%83 肝损伤的影响 . +,4 / 将小鼠 #) 只随
机分为 #组:R>组;模型组;#* 2,+!* # M ; SM ’生药
量 ,紫红獐牙菜总提物组;#* 2,+!* # M ; SM ’生药量 ,
收稿日期:4))4 C )6 C !)
作者简介:彭芳 ’ +1#6 C ,,女,副教授,主要从事天然药物药理研究。
基金项目:云南省教委资助项目 ’批号 11+4)#) ,。
·!·中药新药与临床药理 #$$# 年 %% 月第 %!卷第 & 期
表 # 对 ’’() 肝损伤小鼠肝脏病理改变及损伤程度分级的影响 * ! + %$ ,
注:与 -. 组比较:!! / $0 $%;与模型组比较,& / $0 $1,&& / $0 $%。肝损伤程度分级: “2”表示变性是以肝细胞浆疏松化为主或
脂肪变性的肝细胞占肝细胞总数的 % 3 ! 以下,坏死以单个或几个肝细胞坏死为主,占肝细胞总数的 %$ 4以下,炎细胞浸润是指每个高倍视野
& 5 %$ 个。 “2 2”表示变性是以肝细胞气球样变为主或脂肪变性的肝细胞占肝细胞总数的 % 3 ! 5 % 3 #,坏死以肝细胞小片状坏死为主,占肝细
胞总数的 %$ 5 #$4,炎细胞浸润是指每个高倍视野 %$ 5 #$ 个。 “2 2 2”表示变性是以肝细胞气球样变为主或脂肪变性的肝细胞占肝细胞总数
的 % 3 # 以上,坏死以肝细胞大片状坏死为主,占肝细胞总数的 #$4以上,炎细胞浸润是指每个高倍视野 #$ 个以上。损伤程度分级计算: “2”
按 $0 % 分值计算。 “2 2”按 $0 # 分值计算, “2 2 2”按 $0 ! 分值计算。
组别 剂量
* 3 6·76 5 % ,
变性 损伤程
度分级
坏死 损伤程
度分级
炎细胞浸润 损伤程
度分级
-.组
模型组
紫红獐牙菜总提物
青叶胆总提物
5
5
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&0 8
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$
青叶胆总提物组。各组按 #$ :; 3 76 进行 <6,-. 组
及模型组则 <6 等体积的 -.。% 次 3 =,连续 %$ =,末
次给药 % > 后除 -. 组外,其余每鼠均 *花生油稀释 , %$ :; 3 76,然后禁食不禁水,%& > 后
眼眶取血,常规分离血清,于 @A’B C’全自动生化
分析仪上测定 @;D、@.D;取肝脏作脏器指数 E脏器
重量 *:6 , 3体重 * 6 , F测定;另取部分肝脏,用 %$4
甲醛固定,石蜡包埋,切片,GH染色,作肝脏病理
组织学检查。
%0 )0 # 对 I’J 3 ;C. 肝损伤的影响 E !, ) F 分组同
上。于第 %天给药前 % >,每只小鼠尾部 的 I’J %$ :; 3 76,而 -.组尾部 组按上述剂量 <6给药。-.组和模型组则 <6等体积的
-.,连续 %$ =,于第 %$天给药后 % >,除 -.组尾部
;C. %$ :; 3 76。注射 ;C. %& > 后摘小鼠眼球取血,
常规分离血清,于 @A’B C’全自动生化分析仪上测
定 @;D、@.D;并取肝脏、脾脏称重,以计算脏器系
数 *计算同上 ,。另取部分肝脏,用 %$ 4甲醛固定,
石蜡包埋,切片,GH染色,作病理组织学检查。同
时取少量肝脏,制备 %$ 4的肝匀浆,测定丙二醛
*LM@,。
%0 )0 ! 统计学处理 所有数据均以 # $ % 表示,进
行方差分析和两两比较的 &检验。
! 结果
! # 对 $$%&肝损伤的影响 与 -.组比较,模型组
@;D、@.D均明显升高 * / $0 $$% ,,表明肝损伤造模
成功。与模型组相比,不同剂量组的紫红獐牙菜总
提物均明显抑制 @;D及 @.D的升高 * / $0 $$% ,,并
呈剂量依赖趋势,这与青叶胆总提物作用相似。与
-. 组比较,模型组的肝脏指数明显增大 * /
$0 $$% ,,而用药组有不同程度的缓解,结果见表 %。
对肝脏病理组织的影响可见:-.组小鼠肝脏病检多
数未见异常,少数可见轻度炎症细胞浸润和气球样
变。而模型组肝脏损伤严重,可见严重的灶状坏死和
炎症反应,给药组小鼠肝脏病变明显减轻,见表 #。
! ! 对 ’$( ) *+,肝损伤的影响 与 -.组相比,
模型组的 @;D 明显升高 * / $0 $$% ,;@.D亦明显升
高 * / $0 $% ,。与模型组相比,二个剂量组的紫红獐
牙菜总提物降低 @;D及 @.D不明显,而青叶胆总提
物各剂量组则一定程度降低 @;D和 @.D* / $0 $1,
或 / $0 $$% ,。紫红獐牙菜及青叶胆总提物各剂量
表 % 对 ’’()肝损伤小鼠血清 @;D、@.D水平及肝脏指数的影响 * # $ %, ! + %$ ,
注:与 -.组比较,! / $0 $1,!! / $0 $%,!!! / $0 $$%;与模型组比较,& / $0 $1,&& / $0 $%,&&& / $0 $$%;与相同剂量的青叶
胆总提物比较,NNN / $0 $$%。
组别
-.组
模型组
紫红獐牙菜总提物
青叶胆总提物
剂量 3 * 6·76O% ,
5
5
&0 8
%!0 &
&0 8
%!0 &
@;D 3 *P·;O% ,
%0 &! Q 10 &8
%&%0 % Q !!0 1!!!!
%!0 #% Q %0 &&&&
90 &% Q %0 #!&&&
%#0 & Q %0 &)&&&
%%0 #1 Q !0 $$!&&&
@.D 3 *P·;O% ,
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肝脏指数 3 * :6·6O% ,
1!0 & Q #0 )!
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1&0 9% Q !0 #%&&&
&$0 ) Q )0 9!!&
1)0 8 Q %0 91&&&
·!#· 中药新药与临床药理 !!年 ##月第 #$ 卷第 % 期
表 ! 对 $%& ’ ()*肝损伤小鼠血清 +(,、+*,及肝脏 -.+含量和脏器指数的影响 / ! #, $ 0 12 3
组别
4*组
模型组
紫红獐牙菜总提物
青叶胆总提物
剂量 ’ / 5·6571 3
8
8
9: #
1!: 9
9: #
1!: 9
+(,/;·(71 3
1<: = > ?: @#
?#: ?# > ?: 1@!!!
?#: <: 1!!
?9: 19 > ?: !@!!AA
??: #9 > !: 9!!&
?2: @1 > !: #2&&&
+*, ’ /;·(71 3
@: =< > 2: <1
9: @? > 2: @!!
9: > 1: ?9: !1 > 2: 1!!!!
<: =9 > 2: <1
@: =1 > 2: 肝脏指数 ’ /B5·571 3
<@: ! > ?:
<: 2 > ?: 2!!
<@: = > 1: 9!!&&
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<1: @ > 1: #!!&&&
脾脏指数 ’ /B5·571 3
<: <# > 2: <@
9: ! > 2: !1!!
<: = > 2: 91
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<: @? > 2: !?&&&
<: 19 > 2: -.+ ’ /CBDE·571 3
??: = > <: #
?==: 1 > !9: !!!
?2?: ! > @=: !!!&
1@: ! > @: ?29: @ > @?: 9!!!&
@=: 1 > 19: 1!&&&
注:与 4*组比较:! % F 2: 2<;!! % F 2: 21;!!! % F 2: 221;与模型组比较,& % F 2: 2<,&& % F 2: 21,&&& % F 2: 221;与相同剂量的青叶
胆总提物比较,AA % F 2: 21,AAA % F 2: 221。
组均能降低 -.+,后者优于前者 / % F 2: 221 3。各用
药组能降低肝脏和脾脏指数,结果见表 !。紫红獐牙
菜总提物能一定程度缓解肝脏病理组织变化,结果见
表 @。
! 讨论
一般认为 %%E@ 引起肝损伤的机理是 %%(@ 进入肝
脏经还原活化产生自由基 /·%%1! 3,而直接损伤质
膜,自由基与膜脂质和膜蛋白共价结合,引起部分肝
细胞破坏而致化学中毒性肝损伤 G ? H。$%& ’ ()* 所致
肝损伤的机制为巨噬细胞 /-! 3介导的免疫性肝损
伤,激活的 -!释放多种免疫效应分子如活性氮、活
性氧和细胞因子等 G @ H,最终都导致组织严重的过氧化
损伤,致使 +(,、+*, 释放入血导致血液中 +(,、
+*,升高。+(,只分布在细胞浆内,而 +*,有 #2 I
分布在线粒体内,其余分布在细胞浆内。转氨酶活性
高低与肝细胞受损程度相一致,在轻型中毒性急性肝
损伤时,血清酶活性 +(, 升高最为明显,在重型肝
损伤时,肝细胞受到严重损伤,可累及胞浆膜和线粒
体,酶来自两处,从而改变了酶的比例,使 +*, 超
过 +(,G< H。实验中我们成功的复制了 %%1@ 所致的急
性肝损伤模型,+*,升高幅度远高于 +(,,结果与重
型肝炎表现一致。我们以 《中国药典》中的抗肝炎药
青叶胆作为对照,发现紫红獐牙菜具有与青叶胆非常
相似的作用,紫红獐牙菜对 %%E@ 所致的肝损伤具有
明显的保肝降酶作用。
由于 -.+ 含量的高低能反映脂质过氧化物的水
平,是了解氧自由基致机体组织细胞损伤的重要指标
之一。在 $%& ’ ()*诱导的免疫性肝损伤模型中,模
型组的 -.+明显高于 4*组,提示 $%& ’ ()*诱导的
免疫性肝损伤有自由基的参与。紫红獐牙菜总提物能
降低 -.+ 及肝脏、脾脏指数,对 +(,、+*,无明显
影响,一定程度上可缓解肝脏病理变化。这些结果说
明紫红獐牙菜在对免疫性肝损伤保护方面具有抗氧化
及保护免疫功能等作用,但不及青叶胆的作用强,紫
红獐牙菜对化学性肝损伤的保护作用则强过对免疫性
肝损伤的效果。
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4*组
模型组
紫红獐牙菜总提物
青叶胆总提物
8
8
9: #
1!: 9
9: #
1!: 9
8
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1: #!!
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1: !!
1: #!!
注:与 4*组比较:!! % F2: 21;与模型组比较,& % F2: 2<,&& % F2: 21。与相同剂量的青叶胆总提物比较,A % F2: 2<,AA % F2: 21。肝损伤
程度分级及计算同表 ?。
组别 剂量
’ / 5·65 8 1 3
变性 损伤程
度分级
坏死 损伤程
度分级
炎细胞浸润 损伤程
度分级
·!#·中药新药与临床药理 $$ 年 %% 月第 %&卷第 ’ 期
!#$%!&$ ’( ’%)*)+!, !%$)&,-#
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!@A14>01B ’@C/016D/B :@ @KA,9L, :8, B9@:,C:.L, ,FF,C: @F XM,9:.; R+/.C,; @/ ,OB,9.E,/:;< 8,B;:.C ./I+9- ./D+C,D K- 77H74 V 5RX 9,AB,C:.L,<-= E/1<2;Aa (@+A, E@D,
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