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对叶榕茎皮的化学成分



全 文 :[收稿日期] 20150829(005)
[第一作者] 王绍军,中级药师,从事中药学、天然药物化学研究,E-mail:shaojunwang21@ 163. com
[通讯作者] * 赵赶,副主任药师,从事中药学、天然药物化学研究,E-mail:zhaogan1014@ 163. com
对叶榕茎皮的化学成分
王绍军1,郭思彤2,吴闯3,赵赶1*
(1. 广西壮族自治区妇幼保健院,南宁 530003;2. 广西壮族自治区人民医院,
南宁 530012;3. 广西医科大学 药学院,南宁 530021)
[摘要] 目的:研究桑科榕属植物对叶榕茎皮部位的化学成分。方法:采用硅胶、反相、凝胶等多种色谱手段分离纯化化
合物,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果:从对叶榕提取物中分离得到 13 个化合物,分别鉴定为香草酸(1),豆甾
醇(2),乌苏酸(3),齐墩果酸(4),丁香酸(5),槲皮素(6),芦丁(7),豆甾-5,22-二烯-3β-羟基-7-酮 (8),豆甾-5-烯-3β-羟基-7-
酮 (9),3β-香树素乙酸酯(10),3β-acetoxy-12-oleanen-11-one(11) ,oleanonic acid(12) ,3β-acetoxy-25-methoxylanosta-8,23-diene
(13)。结论:化合物 5 ~ 13 均为首次从该植物中分离得到。
[关键词] 对叶榕;榕属;化学成分;结构鉴定
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2016)12-0088-04
[doi] 10. 13422 / j. cnki. syfjx. 2016120088
Chemical Constituents in Stem Barks of Ficus hispida
WANG Shao-jun1,GUO Si-tong2,WU Chuang3,ZHAO Gan1*
(1. Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530003,China;
2. The Peoples Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530012,China;
3. Department of Pharmacology,Guangxi Medical University,Nanning 530021,China)
[Abstract] Objective:To investigate the chemical constituents in stem barks of Ficus hispida.
Method:The constituents were isolated by silica gel,ODS and Sephadex LH-20,and identified based on spectral
data and physicochemical properties. Result:The 13 compounds were isolated,and their structures were identified
as vanilic acid (1),stigmasterol (2) ,ursolic acid (3) ,oleanlic acid (4) ,syringic acid (5) ,quercetin (6) ,rutin
(7) ,stigmasta-5,22-dien-3β-hydroxy-7-one (8) ,stigmasta-5-en-3β-hydroxy-7-one (9) ,3β-acetoxy-α-amyrin
(10) ,3β-acetoxy-12-oleanen-11-one (11) ,oleanonic acid (12) ,3β-acetoxy-25-methoxylanosta-8,23-diene (13).
Conclusion:Compounds 5-13 were discovered from this plant for the first time.
[Key words] Ficus hispida;Ficus;chemical constituent;structural identification
对叶榕俗名大牛奶、牛奶木,为桑科榕属植物,主
要分布于我国南部地区,如广东、广西、云南等地。其
根、茎为壮族,傣族地区常用民族药,其性甘、微苦、
凉,有疏风清热、消积化痰、健脾除湿、行气散瘀等功
效,用于感冒发热、结膜炎、支气管炎、消化不良、风湿
痹痛等[1-2]。研究表明,该植物中含有生物碱、黄酮、
三萜等成分[3-5]。现代药理研究表明其有抗肿瘤、保
护心脑血管、降糖等作用[6-8]。文献中对对叶榕的化
学成分报道并不多见,为了更好的开发利用该植物资
源,找到药效的物质基础,笔者对其茎皮部位进行化
学成分研究,从它的乙醇提取物中分离得到 13 个化
合物,分别为香草酸(1),豆甾醇(2),乌苏酸(3),齐
墩果酸(4),丁香酸(5),槲皮素(6),芦丁(7),豆甾-
5,22-二烯-3β-羟基-7-酮 (8),豆甾-5-烯-3β-羟基-7-酮
(9),3β-香树素乙酸酯(10),3β-acetoxy-12-oleanen-
11-one (11) ,oleanonic acid (12) ,3β-acetoxy-25-
methoxylanosta-8,23-diene(13)。其中化合物 5 ~ 13
均为首次从该植物中分离得到。
1 材料
XT-4 型显微熔点测定仪(温度未校正,北京泰
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 22,No. 12
Jun.,2016
克仪器有限公司),AV III-500 型核磁共振仪 (1H-
NMR,500 MHz;13 C-NMR,125 MHz;TMS 作内标,
Bruker),1100 Seires LC /MSD Trap SL 质 谱 仪
(Agilent),硅胶(100 ~ 200,200 ~ 300 目),铺板用薄
层硅胶 GF254(青岛海洋化工厂),羟丙基葡聚糖凝
胶 (Sephadex LH-20,Pharmacia 公 司),ODS-C18
(40 ~ 63 μm,Fuji 公司),MCI 凝胶(三菱化学株式
会社);实验过程中所用试剂均为分析纯。药材对
叶榕的茎皮于 2014 年 10 月采自广西南宁高峰林
场,经广西医科大学药学院余丽莹研究员鉴定为桑
科榕属植物对叶榕 Ficus hispida 的茎皮,凭证标本
(No. FH201410)保存在广西妇幼保健院药学部。
2 提取与分离
干燥的对叶榕茎皮 6 kg,粉碎,用 95%乙醇热
回流提取 3 次,每次 3 h,减压回流浓缩至无醇味,得
总浸膏 1. 2 kg。总浸膏用适量水混悬,依次用石油
醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。其中乙酸乙酯萃取物
420 g用硅胶柱色谱(三氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱)
后,用 TLC检视,合并后得到 8 个流分,其中 1 号流
分经硅胶柱(石油醚-丙酮梯度洗脱),ODS 梯度洗
脱,Sephadex LH-20 色谱柱及制备 HPLC 色谱纯化
后,得到化合物 2(25 mg),8 (31 mg) ,9 (18 mg) ,
13 (21 mg) ;2 号流分 48. 0 g 经硅胶(二氯甲烷-甲
醇梯度洗脱),ODS 反相,Sephadex LH-20 及制备
HPLC纯化后得到化合物 10(10 mg),11 (15 mg) ,
12 (24 mg) ;4 号流分 34. 0 g 经相同色谱方法得到
化合物 1(11 mg),3 (12 mg) ,4 (19 mg) ,5 (22
mg) ,6 (27 mg) ,7 (23 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1 无色针晶(甲醇),FeCl3 反应阳性。
ESIMS m/z 167 [M - H]-。1H-NMR (500 MHz,
CD3OD)δ:7. 56 (2H,m,H-2,6),6. 81 (1H,d,
J = 9. 0 Hz,H-3) ,3. 91 (3H,s,OCH3-3);
13C-NMR
(125 MHz,CD3OD)δ:167. 0 (C-7),151. 3 (C-3) ,
147. 3 (C-4) ,123. 3 (C-6) ,121. 2 (C-1) ,115. 1
(C-2) ,112. 4 (C-5) ,55. 7 (-OCH3)。以上数据与
文献[9]报道基本一致,故鉴定该化合物为香草酸。
化合物 2 白色针晶(三氯甲烷),mp 178 ~ 180
℃,Libermann-Burchard 反应为阳性,为甾醇类化合
物。ESIMS m/z 413[M + H]+。经与豆甾醇对照品
展开显色以后,Rf 值与颜色均一致,且混合后熔点
不下降,故鉴定该化合物为豆甾醇。
化合物 3 白色粉末(三氯甲烷),ESIMS m/z
491[M + Cl]-。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 27
(1H,t,J = 3. 5 Hz,H-12),3. 23 (1H,d,J =
11. 0,5. 0 Hz,H-3) ,2. 17 (1H,d,J = 11. 5 Hz,
H-19) ,0. 93 (3H,d,J = 6. 0 Hz,H-30) ,0. 86
(3H,d,J = 6. 5 Hz,H-29) ,[1. 10,1. 02,0. 94,
0. 92,0. 79,0. 77,(each 3H,s) ];13C-NMR (125
MHz,CDCl3) δ:182. 6 (C-28),138. 2 (C-13) ,
126. 3 (C-12) ,79. 3 (C-3) ,55. 6 (C-5) ,52. 8 (C-
6) ,48. 2 (C-17) ,47. 8 (C-9) ,42. 2 (C-14) ,39. 6
(C-19) ,39. 0 (C-20) ,38. 8 (C-1) ,38. 8 (C-8) ,
38. 6 (C-4) ,37. 1 (C-10) ,36. 7 (C-22) ,33. 2 (C-
7) ,30. 8 (C-21) ,28. 3 (C-15) ,28. 1 (C-23) ,
27. 3 (C-2) ,24. 1 (C-16) ,23. 6 (C-29) ,23. 3 (C-
27) ,21. 2 (C-30) ,18. 4 (C-6) ,17. 2 (C-26) ,
17. 0 (C-11) ,15. 8 (C-25) ,15. 6 (C-24)。以上数
据与文献[10]报道的乌苏酸基本一致,故确定该化
合物为乌苏酸。
化合物 4 白色粉末(三氯甲烷),乙酸-浓硫酸
反应阳性。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 20(1H,
t,J = 4. 0 Hz,H-12),3,22(1H,dd,J = 10. 2,
4. 5 Hz,H-3) ,1. 13(3H,s,H-27) ,0. 94(3H,s,
H-25) ,0. 93(3H,s,H-30) ,0. 91(3H,s,H-24) ,
0. 90(3H,s,H-29) ,0. 77(3H,s,H-27) ,0. 75
(3H,s,H-26) ;13C-NMR(125 MHz,CDCl3) δ:
183. 3(C-28),143. 6(C-13) ,122. 6(C-12) ,79. 0
(C-3) ,55. 2(C-5) ,47. 7(C-9) ,46. 5(C-17) ,
45. 9(C-19) ,41. 6(C-14) ,41. 0(C-18) ,39. 3(C-
8) ,38. 8(C-4) ,38. 4(C-1) ,37. 2(C-10) ,33. 8
(C-21) ,33. 1(C-7) ,32. 6(C-22) ,32. 5(C-29) ,
30. 7(C-20) ,28. 1(C-23) ,27. 7(C-15) ,27. 2(C-
2) ,25. 9(C-27) ,23. 5(C-30) ,23. 4(C-16) ,22. 9
(C-11) ,18. 3(C-6) ,17. 2(C-26) ,15. 5(C-24) ,
15. 3(C-25)。以上数据与文献[11]报道的基本一
致,故确定该化合物为齐墩果酸。
化合物 5 无色晶体(三氯甲烷-甲醇),FeCl3
反应阳性;ESIMS m/z 199[M + H]+。1H-NMR (500
MHz,CD3OD) δ:7. 32 (2H,s,H-2,6),3. 92
(6H,s,-OCH3 × 2);
13C-NMR (125 MHz,CD3OD)
δ:168. 7 (C-7),149. 1 (C-4) ,141. 7 (C-3,5) ,
121. 5 (C-1) ,108. 6 (C-2,6) ,57. 6 (-OCH3 × 2)。
以上数据与文献[12]报道基本一致,故确定该化合
物为丁香酸。
化合物 6 黄色针晶(三氯甲烷-甲醇),ESIMS
m/z 301[M - H]-。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)
δ:12. 50 (1H,s,5-OH),7. 73 (1H,d,J = 2. 0
Hz,H-2) ,7. 62 (1H,dd,J = 8. 8,2. 0 Hz,H-
6) ,6. 93 (1H,d,J = 8. 8 Hz,H-5) ,6. 42 (1H,
d,J = 1. 9 Hz,H-6) ,6. 20 (1H,d,J = 1. 9 Hz,H-
8) ;13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ:176. 9 (C-1),
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 22,No. 12
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165. 0 (C-7),162. 0 (C-5) ,157. 6 (C-9) ,148. 4
(C-4) ,146. 9 (C-2) ,145. 5 (C-3) ,136. 9 (C-
3) ,123. 9 (C-1) ,123. 8 (C-6) ,116. 2 (C-5) ,
116. 1 (C-2) ,115. 8 (C-2) ,104. 3 (C-10) ,99. 3
(C-6) ,94. 6 (C-8)。以上数据与文献[13]报道的
一致,故确定化合物 6 为槲皮素。
化合物 7 黄色粉末(甲醇),ESIMS m/z 609
[M - H]-。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)δ:7. 59
(1H,s,H-2),7. 53 (1H,d,J = 8. 6 Hz,H-6) ,
6. 85 (1H,d,J = 8. 6 Hz,H-5) ,6. 43 (1H,br s,
H-8) ,6. 22 (1H,br s,H-6) ,5. 38 (1H,d,J =
7. 5 Hz,H-1″) ,4. 41 (1H,br s,H-1) ,1. 05 (3H,
d,J = 6. 2 Hz,H-6) ;13C-NMR (125 MHz,DMSO-
d6)δ:178. 0 (C-4),164. 9 (C-7) ,161. 9 (C-5) ,
157. 3 (C-2) ,157. 0 (C-9) ,149. 0 (C-4) ,145. 7
(C-3) ,133. 7 (C-3) ,122. 1 (C-1) ,117. 1 (C-
5) ,116. 2 (C-2) ,104. 6 (C-10) ,101. 4 (C-1″) ,
101. 1 (C-1) ,99. 4 (C-6) ,94. 3 (C-8) ,77. 1 (C-
3″) ,76. 4 (C-5″) ,74. 8 (C-2″) ,72. 3 (C-4) ,
71. 2 (C-3) ,71. 0 (C-2) ,70. 9 (C-4″) ,68. 4
(C-5) ,67. 8 (C-6″) ,18. 6 (C-6)。以上数据与
文献[14]报道基本一致,故确定该化合物为芦丁。
化合物 8 白色粉末(三氯甲烷)。ESIMS m/z
427[M + H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 67
(1H,d,J = 1. 5 Hz,H-6),5. 16 (1H,dd,J =
15. 5,9. 0 Hz,H-22) ,5. 01 (1H,dd,J = 15. 0,
8. 5 Hz,H-23) ,3. 66 (1H,m,H-3) ,1. 21 (3H,
s,H3-19),1. 05 (3H,d,J = 6. 5 Hz,H3-21),0. 86
(3H,d,J = 6. 5 Hz,H3-27),0. 81 (3H,t,J = 7. 5
Hz,H3-29),0. 78 (3H,d,J = 7. 0 Hz,H3-26),
0. 70 (3H,s,H3-18);
13C-NMR (125 MHz,CDCl3)
δ:202. 3 (C-7),165. 4 (C-5) ,138. 3 (C-22) ,
129. 6 (C-23) ,126. 4 (C-6) ,70. 8 (C-3) ,55. 2
(C-17) ,51. 6 (C-24) ,50. 2 (C-14) ,50. 0 (C-9) ,
45. 5 (C-8) ,43. 2 (C-13) ,42. 0 (C-4) ,40. 3 (C-
20) ,38. 8 (C-12) ,38. 6 (C-10) ,36. 6 (C-1) ,
32. 1 (C-25) ,31. 4 (C-2) ,29. 2 (C-16) ,26. 6 (C-
15) ,25. 5 (C-28) ,21. 6 (C-26) ,21. 4 (C-27) ,
21. 2 (C-11) ,19. 2 (C-21) ,17. 5 (C-19) ,12. 3
(C-18) ,12. 1 (C-29)。以上数据与文献[15]中报
道一致,故确定该化合物为豆甾-5,22-二烯-3β-羟
基-7-酮。
化合物 9 白色粉末(三氯甲烷)。ESIMS m/z
429[M + H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 69
(1H,d,J = 1. 5 Hz,H-6),3. 66 (1H,m,H-3) ,
1. 22 (3H,s,H3-19),0. 94 (3H,d,J = 6. 5 Hz,
H3-21),0. 84 (3H,t,J = 7. 5 Hz,H3-29),0. 82
(3H,d,J = 7. 0 Hz,H3-27),0. 80 (3H,d,J = 6. 5
Hz,H3-26),0. 69 (3H,s,H3-18);
13C-NMR (125
MHz,CDCl3)δ:202. 3 (C-7),165. 1 (C-5) ,126. 2
(C-6) ,70. 6 (C-3) ,54. 7 (C-17) ,50. 3 (C-14) ,
50. 0 (C-9) ,46. 1 (C-24) ,45. 8 (C-8) ,43. 2 (C-
13) ,42. 1 (C-4) ,38. 8 (C-12) ,38. 3 (C-10) ,
36. 4 (C-1) ,36. 1 (C-20) ,34. 0 (C-22) ,31. 3 (C-
2) ,29. 3 (C-25) ,28. 6 (C-16) ,26. 4 (C-15) ,
26. 2 (C-23) ,23. 1 (C-28) ,21. 3 (C-11) ,20. 0
(C-26) ,19. 1 (C-27) ,19. 0 (C-21) ,17. 5 (C-
19) ,12. 3 (C-18,29)。以上数据与文献[16]中报
道一致,故确定该化合物为豆甾-5-烯-3β-羟基-7-酮。
化合物 10 白色粉末(三氯甲烷)。ESIMS m/z
455[M + H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 10
(1H,t,J = 4. 0 Hz,H-12),4. 50 (1H,m,H-3) ,
2. 03 (3H,s,-COCH3),0. 97 (3H,d,J = 5. 3 Hz,
H-29) ,0. 91 (3H,d,J = 5. 3 Hz,H-30) ,[1. 07,
1. 01,0. 89,0. 86,0. 81,0. 78 (each 3H,s) ];13C-
NMR (125 MHz,CDCl3)δ:171. 0 (C-31),139. 5
(C-13) ,124. 2 (C-12) ,81. 2 (C-3) ,59. 1 (C-
18) ,55. 4 (C-5) ,47. 5 (C-9) ,42. 0 (C-14) ,41. 3
(C-22) ,40. 0 (C-8) ,39. 5 (C-19) ,39. 4 (C-20) ,
38. 6 (C-1) ,37. 8 (C-4) ,36. 7 (C-10) ,33. 5(C-
17) ,32. 8 (C-7) ,31. 2 (C-21) ,28. 6 (C-23) ,28. 3
(C-28) ,28. 0 (C-15) ,26. 6 (C-16) ,23. 7 (C-2) ,
23. 4 (C-11) ,23. 2 (C-27) ,21. 3 (C-32) ,21. 2 (C-
30) ,18. 1 (C-6) ,17. 3 (C-29) ,16. 8 (C-24) ,16. 7
(C-26) ,15. 4 (C-25)。以上数据与文献[17]报道一
致,故确定该化合物为 3β-香树素乙酸酯。
化合物 11 白色粉末(二氯甲烷)。ESIMS m/z
483[M + H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 59
(1H,s,H-12),4. 45 (1H,dd,J = 12. 0,4. 0 Hz,
H-3) ,2. 32 (1H,s,H-9) ,[1. 31,1. 13,1. 08,
0. 88,0. 85,0. 84,0. 83,0. 80 (each 3H,s) ],
0. 75 (1H,dd,J = 10. 0,3. 0 Hz,H-5) ;13C-NMR
(125 MHz, CDCl3 ) δ:200. 3 (C-11), 171. 1
(-COCH3),170. 4 (C-13) ,128. 2 (C-12) ,80. 4
(C-3) ,61. 8 (C-9) ,55. 2 (C-5) ,47. 5 (C-18) ,
45. 3 (C-8) ,45. 0 (C-19) ,43. 4 (C-14) ,38. 6 (C-
1) ,38. 2 (C-4) ,36. 9 (C-10) ,36. 4 (C-22) ,34. 6
(C-21) ,33. 2 (C-29) ,32. 7 (C-7) ,32. 5 (C-17) ,
31. 1 (C-20) ,28. 6 (C-28) ,28. 1 (C-23) ,23. 6
(C-27 ) ,23. 4 (C-2 ) ,23. 2 (C-30 ) ,21. 3
(-COCH3),18. 6 (C-26) ,17. 2 (C-6) ,16. 8 (C-
24) ,16. 2 (C-25) ,6. 4 (C-15) ,6. 1 (C-16)。以
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第 22 卷第 12 期
2016 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 22,No. 12
Jun.,2016
上数据与文献[18]报道一致,故确定该化合物为
3β-acetoxy-12-oleanen-11-one。
化合物 12 白色粉末(二氯甲烷)。1H-NMR
(500 MHz,CDCl3)δ:5. 28 (1H,t,J = 4. 0 Hz,H-
12),2. 84 (1H,dd,J = 14. 0,4. 0 Hz,H-18) ,
2. 57 (1H,ddd,J = 16. 0,11. 0,6. 0 Hz,H-2) ,
[1. 18,1. 08,1. 05,1. 02,0. 98,0. 93,0. 89 (each
3H,s) ];13C-NMR (125 MHz,CDCl3)δ:220. 6 (C-
3),181. 5 (C-28) ,145. 0 (C-13) ,123. 4 (C-12) ,
56. 3 (C-5) ,48. 3 (C-4) ,48. 1 (C-9) ,47. 4 (C-
17) ,47. 1 (C-19) ,43. 3 (C-14) ,42. 6 (C-18) ,
40. 4 (C-8) ,40. 0 (C-1) ,37. 8 (C-10) ,35. 2 (C-
2) ,34. 8 (C-21) ,33. 7 (C-22) ,33. 4 (C-29) ,
33. 2 (C-7) ,31. 8 (C-20) ,28. 6 (C-15) ,27. 2 (C-
23) ,26. 1 (C-27) ,24. 8 (C-11) ,24. 2 (C-16) ,
23. 8 (C-30) ,21. 8 (C-24) ,20. 6 (C-6) ,17. 5 (C-
26) ,15. 6 (C-25)。以上数据与文献[19]报道一
致,故确定该化合物为 oleanonic acid。
化合物 13 白色粉末(二氯甲烷)。ESIMS m/z
499[M + H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5. 49
(1H,dd,J = 16. 0,8. 1 Hz,H-23),5. 35 (1H,d,
J = 16. 0 Hz,H-24) ,3. 09 (-OCH3),4. 46 (1H,
dd,J = 11. 0,4. 0 Hz,H-3) ,2. 15 (1H,d,J =
14. 0,8. 0 Hz,H-22) ,0. 86 (3H,d,J = 6. 3 Hz,
H-21) ,[1. 21,1. 20,0. 97,0. 84,0. 82,0. 80,
0. 66 (each 3H,s) ];13C-NMR (125 MHz,CDCl3)
δ:171. 2 (-COCH3),136. 9 (C-24) ,134. 5 (C-8) ,
134. 3 (C-9) ,128. 5 (C-23) ,80. 7 (C-3) ,74. 9
(C-25) ,50. 8 (C-5) ,50. 4 (-OCH3),50. 2 (C-
17) ,49. 7 (C-14) ,44. 6 (C-13) ,39. 1 (C-22) ,
37. 9 (C-4) ,36. 8 (C-10) ,36. 4 (C-20) ,35. 2 (C-
1) ,30. 8 (C-12) ,30. 6 (C-15) ,28. 1 (C-16) ,
27. 9 (C-28) ,26. 2 (C-7) ,26. 0 (C-27) ,25. 6 (C-
26) ,24. 0 (C-30) ,23. 8 (C-2) ,21. 0 (-COCH3),
20. 8 (C-11) ,19. 3 (C-19) ,18. 9 (C-21) ,18. 0
(C-6) ,16. 8 (C-29) ,15. 6 (C-18)。以上数据与文
献[20]报道一致,故确定该化合物为 3β-acetoxy-25-
methoxylanosta-8,23-diene。
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[责任编辑 邹晓翠]
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第 22 卷第 12 期
2016 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 22,No. 12
Jun.,2016