全 文 ：摘要： 【目的】 建立鸡蛋花环烯醚萜含量测定方法， 优选其提取工艺。 【方法】 采用紫外分光光度法， 以梓醇为对照品， 经
2，4-二硝基苯肼显色后， 在 463 nm 处测定其含量， 并利用单因素结合正交设计优选最佳的提取工艺。 【结果】 该显色方法稳
定， 梓醇浓度在 0.0220 ~ 0.0882 mg/mL 范围内线性关系良好 ， 回归方程为 Y=10.18 X-0.020， R2=0.999， 平均回收率为
99.72%， 相对标准偏差 sR=2.9% （N=6）。 优化的工艺条件是乙醇浓度 60% （体积分数）， 液料比 25 ∶ 1， 超声提取 60 min。
【结论】 该方法准确， 简单， 稳定性良好， 工艺稳定可行， 可为鸡蛋花生产工艺及质量控制提供参考。
关键词： 鸡蛋花/化学； 总环烯醚萜/分析； 正交设计； 分光光度法， 紫外
中图分类号： R284.2 文献标志码： A 文章编号： 1007－3213 （2015） 02 － 0300 － 05
DOI： 10． 13359 ／ j． cnki． gzxbtcm． 2015． 02． 026
鸡蛋花总环烯醚萜的含量测定及提取工艺
黎珊 1， 陈康 1， 张林杰1， 陈燕霞 2
（1. 广州中医药大学中药学院， 广东广州 510006； 2. 广州中医药大学第一附属医院， 广东广州 510405）
收稿日期： 2014－05－12
作者简介： 黎珊 （1990－ ）， 女， 硕士研究生； E－mail： 495568967＠qq．com
通讯作者： 陈康 （1961- ）， 男， 教授， 硕士研究生导师； E－mail： chenkang@gzucm.edu.cn
基金项目： 广州市荔湾区科技攻关计划项目 （编号： 20122214066）
鸡蛋花[1] （Plumeria rubraL.var.acutifoliaBailey) ，
别名缅栀、 蛋黄花， 是夹竹桃科鸡蛋花属落叶小乔
木或灌木。 原产于南美洲， 现广泛种植于世界各热
带地区， 我国主要分布在广东、 广西、 福建、 云南
等地 [ 2 ]。 鸡蛋花中含有多种化学成分， 迄今从中已
分离的有环烯醚萜类、 三萜类、 黄酮醇类等成分［3-5］。
其所含有的环烯醚萜类化合物由于具有很强的抗真
菌和抗肿瘤活性作用而受到广泛关注 ［6］， 但目前关
于鸡蛋花总环烯醚萜的提取方法及含量测定报道鲜
少。 因此有必要对鸡蛋花中总环烯醚萜进行研究，
为其质量评价与控制提供参考依据， 现报道如下。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 MP200B 电子天平 （上海精科天平有
限公司）； 8453E 紫外可见分光光度计 （美国 Agi-
lent科技公司）； KQ-300 超声波清洗器 （东莞市科
桥超声波设备有限公司）。
1. 2 试药 梓醇对照品 （四川省维克奇生物科技
有限公司 ， 纯度 ： ≥980 mg/g， 批号 ： 130408）；
2,4 -二硝基苯肼 （广州化学试剂厂 ， 批号 ：
20120301-2）； 鸡蛋花分别购于各药店及饮片公
司， 经广州中医药大学炮制教研室陈康教授鉴定为
夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花 （Plumeria rubra L. var.
acutifolia Bailey）； 无水乙醇为分析纯； 水为蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 总环烯醚萜含量测定
2. 1. 1 对照品溶液的制备 取梓醇对照品适量，
精密称定， 置 25 mL 容量瓶中， 加体积分数 60%
乙醇至刻度， 摇匀， 制成 0.220 4 mg/mL 的对照品
溶液Ⅰ。 精密量取对照品溶液Ⅰ4 mL， 置 10 mL
容量瓶中， 加体积分数 60%乙醇至刻度作为对照
品溶液Ⅱ。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取样品粉末约 1.0 g，
精密称定， 置于 100 mL 锥形瓶中； 加体积分数
60%乙醇 25 mL， 超声提取 60 min； 冷却后， 补足
质量差异， 过滤； 取滤液 1 mL 于 10 mL 容量瓶
中， 加体积分数 60%乙醇至刻度， 摇匀， 作为供
试品溶液。
2. 1. 3 吸收波长的选择 分别精密量取对照品溶
液Ⅱ、 供试品溶液 1 mL于 10 mL 具塞试管中, 加入
1 mol/L的 HC1溶液 2 mL， 摇匀； 水浴反应 15 min，
放冷， 加二硝基苯肼乙醇试液 0.5 mL， 摇匀； 90℃
水浴反应 25 min， 放冷； 加 1 mol/L NaOH 体积分
数 60%乙醇溶液 3 mL， 摇匀， 室温下放置 2 h。 于
200 ~ 800 nm 范围内进行扫描， 在 463 nm 处有最
大吸收。 结果见图 1。
广州中医药大学学报
Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
2015 年 3 月第 32 卷第 2 期
March 2015，Vol． 32，No． 2300
2. 1. 4 标准曲线的绘制 分别精密吸取梓醇对照
溶液Ⅰ1、 1.5、 2、 3、 3.5、 4 mL 于 10 mL 容量瓶
中， 加体积分数 60%乙醇至刻度。 分别量取 1 mL
各浓度的标准液于具塞试管中， 按 2.1.3 项方法显
色， 以随行溶剂为空白， 在 463 nm 处测定吸光
度。 以对照品浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标， 绘
制标准曲线， 得回归方程 Y=10.18 X-0.020。 其中
Y 为吸光度， X 为梓醇浓度， R2=0.999。 梓醇在
0.022 0 ~ 0.088 2 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2. 1. 5 精密度试验 取对照品溶液Ⅱ， 按 2.1.3
项方法显色后于 463 nm 处测定吸光度， 连续测定
6次， 相对标准偏差 sR=0.05%， 精密度良好。
2. 1. 6 稳定性试验 取 2 号样品， 按 2.1.2 项方
法制成供试品溶液， 按 2.1.3 项方法显色， 每隔 30
min测定 1次， 测定 6次， sR=2.4%， 稳定性良好。
2. 1. 7 重复性试验 精密称取 6 份同一样品粉
末， 按 2.1.2项下方法制成供试品溶液， 按 2.1.3项
方法显色测定 ， 计算环烯醚萜含量 ， 结果 sR=
3.1%， 重复性良好。
2. 1. 8 加样回收试验 精密称取已知含量的鸡蛋
花样品 6 份， 每份 0.5 g， 分别加入一定量的标准
品， 按 2.1.2项方法制备供试液， 按 2.1.3项方法显
色后于 463 nm 处测定吸光度， 回收率为 99.72%，
sR=2.9%。
2. 1. 9 各批次总环烯醚萜含量测定 取各批鸡蛋
花粉末约 1 g， 精密称定， 按 2.1.2 项方法制成供
试品溶液， 精密吸取样品溶液 1 mL， 置 10 mL 容
量瓶中， 按 2.1.3 项方法显色， 测定其吸光度， 并
按回归方程计算总环烯醚萜含量。 表 1 结果显示，
各批次的鸡蛋花总环烯醚萜的含量差异较大。
2. 2 提取工艺
2. 2. 1 单因素实验
图 2显示： 鸡蛋花总环烯醚萜提取率随着乙醇
体积分数的增加而降低， 当其体积分数超过 70%
时降低缓慢。 图 3显示： 液料比随着乙醇用量的增
加而升高， 当液料比达到 25 mL∶1 g 后， 提取率增
加缓慢。 图 4 显示： 超声时间从 20 min 增加到 40
min 时， 总环烯醚萜提取率增幅较大， 之后随着时
间的继续增加， 增幅不明显。
2. 2. 2 因素水平 本研究考察了乙醇浓度 （A）、
提取时间 （B）、 液料比 （C） 等因素对总环烯醚萜
提取率的影响， 根据单因素试验的结果确定各因素
的合理水平， 采用 L9（3）4正交设计， 筛选鸡蛋花最佳
提取工艺， 因素及水平设置见表 2。
1.000
0.750
0.500
0.250
0.000
200.00 400.00 600.00 800.00
λ /nm
215.00
245.00
272.00
335.00
342.00
464.00
463.00
2
1
1. 梓醇标准品； 2. 鸡蛋花样品
图 1 梓醇标准液和鸡蛋花提取液全波长扫描图
Figure 1 Full wavelength scanogram of catalpol reference and extract of Flos Plumeriae Acutifoliae
表 1 各批次鸡蛋花总环烯醚萜含量 （x ± s， N=3）
Table 1 Comparison of total iridoid content from
different batches of Flos Plumeriae Acutifoliae
编号 药店/饮片公司 产地 w/(mg·g-1）
1 广州市采芝林 1 广东 14.82 ± 0.33
2 广州市采芝林 2 广东 11.01 ± 0.09
3 广州至信药业 越南 11.08 ± 0.19
4 广州市民益堂大药房 越南 10.07 ± 0.15
5 广东大参林连锁店 广西玉林 14.05 ± 0.21
6 广东大翔药业 印尼 9.74 ± 0.25
7 广东省药材公司 印尼 10.51 ± 0.13
黎珊， 等． 鸡蛋花总环烯醚萜的含量测定及提取工艺第 2 期
Abs
301
18
16
14
12
10
p 提
取
/%
图 2 不同体积分数乙醇对鸡蛋花总环烯醚萜提取率的影响
Figure 2 Influence of ethanol volume fraction on
the extraction rate of total iridoid content
Flos Plumeriae Acutifoliae
20
18
16
14
12
60 70 80
φ乙醇/%
p 提
取
/%
2. 2. 3 正交试验 结果见表 3。
由于因素 C 的偏差平方和小于空白项的偏差
平方和， 为防止因子显著性的误判， 提高方差分析
的准确度， 故将 2项合并作为误差项。
表 4 方差分析结果表明： 因素 B提取时间对总
环烯醚萜提取率有极显著性影响 （P <0.01）， 因素
A乙醇体积分数对总环烯醚萜提取率有显著性影响
（P <0.05）， 因素 C 液料比对提取率无显著性影响
（P>0.1）， 影响的顺序为： B>A >C。 不同水平影响
顺序： A2>A3>A1， B3>B2>B1， C2>C1>C3。 考虑成本
控制， 确定的优化条件为： A2B3C1， 即体积分数
60%乙醇 25倍量， 超声提取 60 min。
表 2 因素水平表
Table 2 Factor and levels of the orthogonal design
水平 φ乙醇/%（A） t提取/min(B) p 液料比/（mL·g-1)(C)
1 50 40 25
2 60 50 30
3 70 60 35
表 3 鸡蛋花环烯醚萜提取正交试验结果
Table 3 Orthogonal design for the extraction
of total iridoid content from
Flos Plumeriae Acutifoliae
实验号 A B C D(空白) p提取/%
1 1 1 1 1 9.54
2 1 2 2 2 11.94
3 1 3 3 3 12.76
4 2 1 2 3 12.88
5 2 2 3 1 13.77
6 2 3 1 2 14.81
7 3 1 3 2 10.99
8 3 2 1 3 13.91
9 3 3 2 1 14.14
K1 34.24 33.41 38.25 37.45
K2 41.46 39.61 38.96 37.74
K3 39.03 41.71 37.52 39.54
R 7.22 8.30 1.44 2.09
表 4 方差分析结果
Table 4 Variance analysis results for the extraction
of total iridoid content from Flos Plumeriae Acutifoliae
因素 偏差平方和 自由度 均方 F 值 P 值
A 9.003 2 4.501 14.904 <0.05
B 12.425 2 6.212 20.570 <0.01
C 0.346 2 0.173 0.573 >0.1
空列 0.863 2 0.432
误差 1.209 4 0.302
总计 22.637 8
注： F0.05（2，4）=6.94， F0.01（2，4）=18.00
图 4 提取时间对鸡蛋花总环烯醚萜提取率的影响
Figure 4 Influence of extraction time on the
extraction rate of total iridoid content from
Flos Plumeriae Acutifoliae
20 40 60
提取/mint
14
12
10
8
6
20 25 30
图 3 液料比对鸡蛋花总环烯醚萜提取率的影响
Figure 3 Influence of liquid-material ratio
on the extraction rate of total iridoid
content from Flos Plumeriae Acutifoliae
液料比/（mL·g-1)p
p 提
取
/%
广州中医药大学学报 2015 年第 32 卷302
（Continued on page 307）
2. 2. 4 验证实验 根据正交试验得出的最佳工艺
A2B3C1， 即乙醇体积分数 60%， 提取时间 60 min， 液
料比 25∶1， 取 1 号样品粉末进行验证， 平行 3 份，
测得总环烯醚萜的平均含量为 14.82 mg/g， sR值为
0.12%， 表明该提取工艺条件稳定、 可行。
3 讨论
本研究利用环烯醚萜 A 环酸解后暴露出的半
缩醛与 2，4-二硝基苯肼生成 2，4-二硝基苯腙， 碱
性环境下显棕色这一原理 ［7］， 建立了鸡蛋花中环烯
醚萜的含量测定方法， 其中梓醇与总环烯醚萜的最
大吸收波长一致 ， 故可以梓醇为对照品 ， 采用
2，4-二硝基苯肼显色法 ［8-9］进行鸡蛋花总环烯醚萜
苷的含量测定， 所建立的含量测定方法准确， 简
单， 稳定性良好， 可为鸡蛋花的质量控制提供参考。
鸡蛋花含有鸡蛋花素、 异鸡蛋花素、 鸡蛋花苷等
环烯醚萜类， 具有抗真菌、 抗肿瘤活性及抑制 HIV
病毒等作用［10-12］， 为其重要药效成分类型之一。 本
研究对 7 批药材样品测定的含量结果约为 9.74 ~
14.82 mg/g， 最高的为产地广东购自广州市采芝林
1 号的鸡蛋花， 最低的为产地印尼购自广东大翔药
业的鸡蛋花， 说明不同产地来源的鸡蛋花质量存在一
定的差异， 这可能与生态环境、 采收加工等相关。
本研究所采用的含量测定方法中 “室温下放置
2 h” 这一过程的温度变化对结果的影响较大。 为
保证温度的一致性， 静置时放于 30℃的恒温水浴
锅上方， 有效地解决了温度造成的差异。 进一步的
研究可探讨温度对此方法的影响或探索新一种稳定
可靠的含量测定方法 ［13］。
本研究通过正交设计， 确定鸡蛋花最佳提取工
艺为： 25 倍量体积分数 60%乙醇， 提取时间 60 min，
提取率 14.82%， 且 3 批验证结果较为接近， 说明
该提取工艺稳定， 可为后期的生产工艺研究奠定基
础。
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【责任编辑： 黄玲】
Content Determination and Extraction Process of Total
Iridoid in Flos Plumeriae Acutifoliae
LI Shan1， CHEN Kang1， ZHANG Linjie1， CHEN Yanxia2
(1. School of Chinese Herbal Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006 Guangdong， China；
2. The First Affiliated Hospital， Guangzhou University of Chines Medicine， Guangzhou 510405 Guangdong， China)
Abstract: Objective To set up a method for the determination of the total iridoid in Flos Plumeriae Acutifoliae,
and to optimize the extraction process. Methods With catalpol as the reference, the total iridoid in Flos
Plumeriae Acutifoliae was determined by ultraviolet ( UV) spectrophotometry at wavelength of 463 nm after
coloration with 2， 4- dinitro-phenylhydrazine. The experiment was carried out by orthogonal design， and single
factor analysis was used to optimize the extraction process. Results The results of the coloration were stable.
黎珊， 等． 鸡蛋花总环烯醚萜的含量测定及提取工艺第 2 期 303
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（Continued from page 303）
Catalpol showed good linearity in the range of 0.022 0 ~ 0.088 2 mg/mL (R2=0.999)， regression equation was
Y=10.18 X-0.020， the average recovery was 99.72%， and relative standard deviation (RSD) was 2.9% （N=6）.
The optimized proces condition was ethanol concentration being 60%， ultrasonic extraction for 60 minutes and
the liquid -solid ratio being 25 ∶1. Conclusion The established method is accurate, simple and stable. The
extraction process is stable and feasible, and can supply evidence for the quality control and production process
of Flos Plumeriae Acutifoliae .
Key words： Flos Plumeriae Acutifoliae/chemistry
Total iridoid/analysis；
Orthogonal design；
Spectrophotometry， ultraviolet
Isolation and Determination of Catechin from Leaves of Artocarpus
Nitidus Subsp. lingnanensis
CAO Hongxia， LIN Li， ZHANG Xiuna， YE Qiang，
KUANG Weicong， WU Zeqing
(School of Chinese Herbal Medicine， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006 Guangdong， China)
Abstract： Objective To establish a method for the isolation and determination of catechin from leaves
of Artocarpus nitidus Subsp. lingnanensis. Methods Silica gel column chromatography and recrystallization
method were applied for the isolation of catechin， and then the structure of catechin was elucidated by spectro-
metric methods. High performance liquid chromatography (HPLC) was used for the determination of catechin，
and the chromatography was performed on a Phenomenex prodigy C18 column （250 mm × 4.60 mm， 5 μm），
using an isocratic gradient elution with acetonitrile- 0.4% (in volume fraction) aqueous phosphoric acid solution
as the mobile phase. The flow rate was 1.2 mL/min and the detection wavelength was set at 280 nm. The
column temperature was 35℃ ， and the injection volume was 10 μL. Results The compound obtained from
leaves of Artocarpus nitidus Subsp. lingnanensis was elucidated as catechin by spectrometric methods with purity
higher than 980 mg/g. The linear range of catechin was 20.04 ~ 120.24 μg/mL ( r =0.999 8). The mean
content of catechin was 0.58 ~ 1.85 mg/g from various batches of Artocarpus nitidus Subsp. lingnanensis leaves
samples， and the average recovery of catechin was 98.07% （SR=1.84%）. Conclusion Catechin has been firstly
confirmed as the active component of leaves of Artocarpus nitidus Subsp. Lingnanensis. The established HPLC
determination method is simple， rapid and accurate， and can be used for the quality control and resource
development of Artocarpus nitidus Subsp. lingnanensis leaves.
Key words： Leaves of Artocarpus nitidus Subsp. lingnanensis/isolation & purification；
Leaves of Artocarpus nitidus Subsp. lingnanensis/chemistry；
Catechin/analysis；
Chromatography， high performance liquid
曹虹霞， 等． 桂木叶中儿茶素的提取分离与含量测定第 2 期 307