全 文 ：·287·中国实用医药2015年3月第10卷第9期　China Prac Med, Mar 2015, Vol. 10, No. 9
参 考 文 献
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［收稿日期：2015-01-15］
薯莨正丁醇部位洗脱液对人型支原体
培养基 pH 值的影响
朱蕾　钟超
【摘要】 目的 探讨薯莨抗人型支原体的作用机制。方法 人型支原体液体培养基中加入 25% 乙
醇洗脱流分的薯莨正丁醇部位作为实验组 , 加入 0.9% NaCl 溶液作为对照组 , 检测两组菌落数及培养
基 pH 值。结果 加入实验组菌落数及培养基 pH 值均低于对照组 , 差异具有统计学意义 (P<0.05)。
结论 薯莨提取物可能通过降低培养基的 pH 值抑制人型支原体。
【关键词】 薯莨正丁醇部位洗脱液 ；人型支原体培养基 ；pH 值
DOI ：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.211
作者单位：518106　深圳市光明新区人民医院妇科 ( 朱蕾 ), 药
剂科 ( 钟超 )
泌尿生殖道支原体感染是妇科常见病 , 应用抗生素是
主要的治疗手段 , 但泌尿生殖道支原体耐药性也日益明显。
本课题组的早期研究发现薯莨具有抗泌尿道人型支原体的
作用［1］, 但其机制尚不清楚 , 现将本实验结果报告如下 , 为
研究薯莨体外抗抗泌尿道人型支原体的作用机制提供理论
依据。
1　实验材料
1. 1　培养基的配制　人型支原体的液体培养基参照吴移谋
等［2］的方法。20% 新生小牛血清、10% 新鲜酵母菌液、0.002%
酚红、1∶1牛心组织消化液、含有青霉素20000 U/L。使用0.1%
的精氨酸溶液将液体培养基的 pH 值调定到 6.5［3］。
1. 2　原株的获取　临床患者阴道分泌物的标本培养得到
30 株 , 鉴定传代培养 3 次后 , 于 -70℃保存备用。在常温条
件下融化前期制备的原株菌液 , 以 1∶100 稀释液体培养基 ,
37℃ , 24~48 h 培养后达到 106 颜色变化单位 /0.1 ml 作为实
验用的接种物。
1. 3　原药处理　薯莨正丁醇部位洗脱液采用前期实验的方
法取得。
2　实验方法
2. 1　实验组选用固体培养基 , 37℃恒温箱复温 10 min, 培养
基中央滴入正丁醇部位 25% 洗脱部位的 1% DMSO 溶液 (1%
二甲基亚砜无抗人型支原体的作用 )50 μl, 倒置 10 min, 无菌
接种环在药液区内均匀接种原株 , CO2 培养箱培养 ；选择滴
入同剂量的 0.9% 的 NaCl 溶液的培养基做为对照组。两组培
养基培养96 h后 , 取出培养基 , 倒置 , 在 10倍物镜显微镜下 ,
观察视野中煎蛋样菌落 , 顺时针方向取 5 个视野 , 记录菌落
数［4］。0.1 g/ml 阿奇霉素溶液作为阳性对照。
2. 2　pH 值的测定　将实验组和对照组的培养基溶液经蒸馏
水稀释至 0.2 g/ml 用 Bechman ∮61 型 pH 计进行检测。
2. 3　统计学方法 采用 SPSS15.0 统计学软件对数据进行统
计分析。计量资料以均数±标准差 ( x-±s) 表示 , 采用 t检验；
计数资料采用χ2 检验。P<0.05 表示差异具有统计学意义。
3　结果
3. 1　经正丁醇部位 25% 洗脱部位处理的培养基的菌落数明
显低于同剂量的 0.9% 的 NaCl 溶液处理培养基的菌落数 , 差
异具有统计学意义 (P<0.05)。见表 1。
3. 2　pH 值测定　薯莨正丁醇部位洗脱液组的 pH 值与阿奇
霉素组相近 , 且其低于同剂量 0.9% 的 NaCl 溶液培养基的
pH 值 , 差异具有统计学意义 (P<0.05)。见表 2。
表 1　三组培养基菌落数测定结果 ( x-±s, n=30)
培养基 菌落数 ( 个 )
薯莨正丁醇部位洗脱液 4.06±1.15a
阿奇霉素 (0.1 g/ml) 1.25±0.46
0.9%NaCl 573.85±62.73
注：以阿奇霉素为阳性对照 , 与同剂量的 0.9%的NaCl 溶液比较 ,
aP<0.05
表 2　三组培养基 pH值测定结果 ( x-±s, n=30)
培养基 pH 值
薯莨正丁醇部位洗脱液 5.01±0.05a
阿奇霉素 (0.1 g/ml) 4.88±0.03
0.9%NaCl 7.12±0.04
注：以阿奇霉素为阳性对照 , 与同剂量 0.9% 的 NaCl 溶液培养
基比较 , aP<0.05
4　讨论
人型支原体是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一 , 可
引起盆腔炎、急性肾盂肾炎等多种生殖道疾病和创伤感染、
支原体血症等生殖道外感染 , 目前治疗人型支原体的药物均
已显示不同程度的耐药性 , 例如红霉素、链霉素、卡那霉素、
氯霉素等常用抗生素。中药薯莨对人型支原体的抑制作用本
·288· 中国实用医药2015年3月第10卷第9期　China Prac Med, Mar 2015, Vol. 10, No. 9
课题在之前已有报道 , 但具体作用机制不清。
作者在前期实验中发现薯莨的正丁醇部位经 D101 大孔
树脂梯度洗脱后 , 其 25% 乙醇洗脱流分在体外条件下具有一
定的抗人型支原体生长的作用。如果标本中有较高比例的大
肠埃希氏菌、变形杆菌、假单胞菌、葡萄球菌等产脲酶细菌 ,
而不能被抑菌剂抑制 , 它们就能迅速生长繁殖 , 在生长过程
中分解尿素 , 产氨和二氧化碳 , 使液体 pH 值升高 , 液体培养
基就会变红且混浊［5］说明支原体对生长环境的 pH 值非常敏
感 , 培养过程中产生的酸性物质加速其死亡。本实验发现滴
入薯莨正丁醇部位洗脱液培养基的 pH 值与对照组相比有明
显降低 , 显示酸性 , 类似于女性阴道的正常酸性环境 , 而酸
性环境可能是抑制支原体生长的因素之一。
临床上治疗人型支原体感染多应用抗生素如阿奇霉素
等。但是抗生素引起的病原体变异和副作用也是影响治疗效
果的难题［6］, 本实验结果为研究中药薯莨的药理作用 , 尤其
是抗人型支原体的机制提供了重要参考依据。
参 考 文 献
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［收稿日期：2014-12-22］
1　材料与方法
1. 1　主要试剂
四氯化碳由成都科龙化工试剂厂生产 , 批号 ：150508。
内毒素 (lipopolysaccharide, LPS) 试剂盒为南京建成科技
有限公司的产品。
1. 2　分组与处理
雄性 SD 大鼠 , 36 只 , 清洁级 , 体重 (200±20)g, 购自中
科院实验动物中心 , 饲养在上海中医医院实验动物中心。所
有动物在有恒温、恒湿及昼夜光线变化的房间里饲养 , 自由
进食、进水 , 适应性饲养一周后开始实验。
造模 ：本实验选用四氯化碳法造模 , 将大鼠按体重分数
予以 40%CCl4 溶液腹腔注射 , 0.3 ml/100 g 体重 , 首剂加倍 ,
隔日 1 次 , 造模 90 d 形成肝硬化模型。
分组 ：将 36 只大鼠随即分为 4 组 , 正常组、模型组、
肝脾舒组、杜秘克组 , 每组 9 只。
给药 ：各组在造模同时给药 , 肝脾舒组 20 ml/kg 灌胃 ,
正常组、模型组则用同等容量的生理盐水灌胃 , 杜秘克组按
每日 0.01mg/kg 体重灌胃 , 各组连续给药 90 d, 自由饮水 , 普
通饲料喂养。
检测指标 ：实验 90 d 后 , 即用乌拉坦 (1.25 g/kg) 行腹腔
麻醉 , 取血检测血浆中内毒素水平 , 取肝左叶于 10% 中性甲
醛固定后行 HE 染色。
1. 3　检测方法　①血清指标检测 检测血浆中内毒素水平 操
作步骤按试剂盒说明书严格进行 采用 723 型分光光度计检
测②肝、回肠组织 HE 染色 经甲醛固定后取肝组织及回肠组
织石蜡包埋 切片脱蜡水化 常规 HE 染色后普通光镜下观察
肝组织及回肠组织病理变化。
1. 4　统计学方法　所有数据均采用 SPSS16.0 统计学软件
分析。多组间比较以均数 ± 标准差 ( x-±s) 表示 , 采用单因
素方差分析 , 两两比较方差齐时用 LSD-t 法 , 方差不齐时用
DunnettsT3 法。P<0.05 表示差异有统计学意义。
2　结果
2. 1　与正常组相比 , 模型组血浆内毒素水平升高 (P<0.05),
与模型组相比 , 肝脾舒组血浆内毒素水平降低 (P<0.05), 而杜
秘克组血浆内毒素水平与模型组相比 , 虽有所降低 , 但差异
无统计学意义 (P>0.05)。各组大鼠血浆内毒素水平见表 1。
表 1　各组大鼠血浆中内毒素水平 ( x-±s)
组别 只数 LPS
正常组
模型组
肝脾舒组
杜密克组
9
9
9
9
0.075±0.022
0.145±0.048a
0.088±0.028b
0.102±0.042
注：与正常组对照相比 , aP<0.05 ；与模型组相比 , bP<0.05
2. 2　肝组织 HE 染色结果 正常组大鼠肝组织结构完整、
肝脾舒对肝硬化大鼠内毒素血症的影响
刘晓琳
【摘要】　目的　探讨肝脾舒对肝硬化大鼠血浆内毒素是否有调节作用。方法 雄性 SD 大鼠 36 只 ,
随机分为正常组、模型组、肝脾舒组、杜秘克组 , 每组 9 只。正常组：每日腹腔注射生理盐水 , 模型组：
采用 40%CCl4 橄榄油溶液腹腔注射制备肝硬化模型 , 肝脾舒组在此基础上每日给予肝脾舒灌胃 , 杜秘克
组在模型组基础上每日给予杜秘克灌胃。取血检测血浆内毒素 (LPS) 水平。结果 3 个月后模型组大
鼠血浆内毒素水平较正常组升高 (P<0.05) ；与模型组相比 , 肝脾舒组血清内毒素水平降低 (P<0.05)。
结论 肝脾舒对肝硬化大鼠血浆内毒素水平有调节作用。
【关键词】　四氯化碳 ；肝硬化 ；肝脾舒 ；内毒素
DOI ：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.212
作者单位：200071　上海市中医院消化科
通讯作者：潘相学