全 文 ：, 北美圆柏组织培养不定芽形成及生长研究
山东农业大学 梁玉堂 邢世岩
摘 要
北美团柏幼 苗茎段组织培养中 , 影响不定
芽产生数童及芽诱导率 高低的因 子 大 小 顺序
是 : 外植体> 培养基 > B A P > N A A , 最佳组合
为外植体一培养基* N A A o B A P 和 1 / Z S H十刚
出土幼 苗 (或 7 天幼 苗 ) 十 B人 P l . 13 十 N A A
。 . 01 ( m创O 。 激素浓度以稀为佳 。
主压词 北美圈柏一组织培养一研究不定芽一
诱导因素
北美圆柏又叫铅笔柏 ( S a b i n a v i r g i n i。 n a ) ,
适应性强 , 生长速度快 , 是珍贵的观赏及造林
树种。 为加速这一树种的发展 , 采用组织培养
方法攀殖较好 。 本文对不定芽诱导及生长因子
进行了研究 , 以便为利用成龄材料进行离体培
养提供理论依据。
~
、 材料和方法
19 8 6年 n 月取北美圆柏 1 一 3 年生幼苗移
栽于温室中 , 每周喷一次多菌灵 50 倍 液。 取
当年生长 1 . 0士 。 . 05 厘米带刺叶或鳞叶茎段 作
为外植体。 从 20 年生树上采纯净种子 (发芽率
7 0纬 ) 混沙层积 (0 一 5 “ C ) 60 天 , 然后播种到灭
菌土坡的花盆中 (5 一 10 粒 ) ,出苗后分别取新出
土苗 、 7 天苗 、 “ 夭和 21 天苗作为外植体 , 灭
菌后接种到培养基上 。 培养基 为 M c M 、 s .H
和 e n 。 B ^ P 浓度为 0 . 0 5一 5 . 0 (单 位 m g / l ,
下同 ) , N A A O一 0 . 5 , L H (水解乳蛋 白 ) 10 0
一 5 0 0。 基本碳源和氨基酸分别为蔗糖 ( 3 . 0% )
和氨基酸 ( 2 . 0) 。 同时还进行了混合 碳 源 、
氮基酸及维生素对芽诱导及生长影响的试验研
究 。 培养基的 p H 值 5 . 8 , 培养温度 2 3士 2 ’ C,
光照强度 2 5 0 0勒克司 , 每 日光照 16 小时。 外植
困 1 析出土幼苗外植体下胚轴上
再生不定芽及墩茎
农 1 不同外植体芽诱导率
外 植 体 芽数 /株 (段 )(小一中一大 )
诱导率 }接种株
( % ) 1 (段 )
叫阳一新出土幼苗
1 年生苗茎段
3 年生幼树茎段
2一 10 . 0士 6 . 7 8一 5
1一 2 . 3 3士 1 . 5 2一 4
l 0
1 0
0一 0 . 8 8士 0 . 5 0一 3
注 : 培养基为 G n + B A P z . 0 + N A A o . o l , 培养6 0
夭 。
体每月继代培养一次 。 培养 30 一60 天后 , 调查
统计外植体的芽数及芽诱导率 , 并进行方差分
析。
二 、 试验结果
1
. 不同外植体对芽诱导的影响
幼苗接种后 10 天 , 下胚轴增粗 , 30 天后在
紧靠培养基 ( G D + B A P Z . 2 5 + N A A o . o l ) 的 下
胚轴上出现刺状突起 , 50 天后即可形成正常不
定芽 (见图 1 ) 。 取 1 一 3 年生幼苗 卜刺叶茎
段培养 2 周后轮生刺叶基部芽开始萌发 , 2 个
月后开始伸长 , 鳞叶茎段反应则迟缓 , 芽诱导
效果差 。
正交试验结果表明 , 外植体是重要因子 ,
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复犁花 山肠出生川蔽育
. 花矿于亩一苏沂不落厂 布 一万专犷飞护~ 不茄厂 芯` .甲. . ~ 目一一 . ~ 叫 . ~ ~ ~目州 、 ~ 州一 . ~ 一沪 ` ~ 一~ 一 , 洲. J卜入 A — 外垃体~目 2 正交试脸结果 圈 3 刺叶鉴段再生的有效茎段
、以新出土幼苗和生长 7 天小苗 培 养效 果最好
(见表 l ) , 随着苗龄增长 , 芽诱导率逐渐下
降 。 其次是培养基 , 最佳培养基为 G D 和 1 22
S H
。
2
. 植物激素对茅诱导的影响
B A P 单独使用培养 , 每株苗诱 导 芽 1 . 35
个 , 诱导率18 . 25 % , 而与 N A A 配合 使 用 ,
则诱导芽为 1 . 86 干; 诱导 率为 3 1% 。 B A P 和
N A A 诱导芽的最佳浓度分别为 2 . 25 和 0 . 1 0 ,
诱导率的最佳浓度分别为 1 . 13 和 0 . 01 ( 见 图
_
2 )
。 浓度大则抑制芽的产生和诱导 。
从试验结果分析表明 , 各因子对芽诱导影
响大小顺 序 是 : 外 植体 、 培 养 基 * B A P +-
N A A , 最佳组合为 : G D 十新出土 幼 苗 十 B A P
·
2
.
2 5 十 N人 A O . l o 。 对于芽诱导率大小 , 则是外
植体一培养基一 N A A * B A P 和 1 / sZ H + 新 出
土幼 苗 (或 7 天 小 苗 ) 十 B A P 1 . 13 + N A A
0
.
0 1
。
为了促进芽的生长 , 丛生芽必须转移到低
浓度激素 ( B A P O . 0 2 + N A A O 。 0 0 1)的 1 / ZG D 培
农 2 不同徽紊浓度对芽延长的效应
激素组合 ( p p m )
不可丽{亘亚巫
每茎段产生有效嫩茎数
( > 2 0 m )
接种
茎段数
0
.
0 0 1
0
.
0 0 1
0
,
0 25
0
.
1
2
.
5士 o ` , `
1
’ 。
0
.
SB土 0 . 3 8 } 10
“ 2 0士 0 ` ’ 3
1
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1
.
1 7土 0 . 18 1 1 0
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OI川」
养基上培养 , 可促进芽的生长 。 如产生丛生芽
的一年生的刺叶茎段在低浓度培养墓上培养 30
天 , 就生出有效茎段 (见图 3 ) 。 浓度不同 ,
所产生的嫩茎数不同 (见表 2 ) 。
3
. 不同糖源 、 氨基酸及维生素对芽诱导
及生长的影响
试验表明 , 将甘氨酸 ( 2 . 0) 和蔗糖 ( 3 . 0% )
配合使用 , 促进了芽的诱导及生长 , 但分别加
入多种糖及氨基酸的混合物 , 明显提高了有效
嫩茎数 ; 如果将两者混合后加人到培养基中 ,
财抑制了芽的延长 。 加入多种维生素的混合物
衰 3 多 种 维 生 素 等 对 芽 诱 导 的 影 响
处 理 { 徽 素 种 类 每 段 芽 数(小一中一大 ) 每 段 有 效 嫩 茎 数 { 接种茎段数
甘氮酸 十 蔗糖
权签酸混合物
. 褚混合物
氮基酸 十 箱混合物
维曳素混合物
l一 3 . 1 8士 1 . 8 6一 5 2 . 4 6士 1 . 7 8
l一 2 . 3 3士 1 . 5 2一4 2 . 0 0土 1 . 2 6
2一3 . 1 1士 0 . 8 4一4 2 . 5 6士 0 . 4 4
1一 2 . 7 5士 2 . 4 3一 6
2一4 . 5士 1 . 3 6一6
O
0
.
84士 0 . 3 0
12
1 2
则促进了芽的诱导( 4. 5个芽/ 段) 。 用 G D +
BAI P
.
0 月N A A0. 0 1作培养鹰 , 除处理 1 外 ,
匆其余均加有甘氨酸 2 . 0和蔗糖 3 . 0% , 对一年生
苗茎段接种后 , 60 天诱导结果见表 3 。
4
.
L H 对芽诱导及生长的影响
L H 的浓度与芽数和每段有效嫩钱数分别
成显著的正相关和负相关 。 高浓度的 L H , 虽
然抑制了有效嫩茎的形成 , 但 促 进 了 芽的诱
导 。 J刊 G D + B A P I . 0 斗一 N A A 0 . 0 0 1 + 蔗 糖
3
.
0%
, 培养一年生苗茎段 ; 60 天后的 统 计结
果见图 选 。
月 产/ 仁到、 一少叮 {育
旷 、 、 ~
J口 O
田 4
曰 1 .长 r工 〔 l’ J门
L H 对 芽诱导及生长的影响
、 小结
. 芽的诱导表明 , 新出土和生长 7 天的
幼苗比其它供试外植体更易形成不定茅。 芽诱
导率最高的 则是新出上的幼苗 ,随 片苗龄增加 ,
诱导率逐渐下降 。
2
. 细胞分裂素与生 长素配合使用 , 可提
高芽的诱导率 。 其中 B A P 比 N A A 对诱导芽
数的作用大 , 而对诱导率的作 J目却相反 。 进 一
步证 I川了 T h 。 m a s ( 19 5 2 )的观点 : 当11胞 分裂素
决定 一了每个外植体上的芽数 , 而生 长素决定 r
芽诱导率 。 试脸结果发现 , 诱 导培养基中低浓
度的激素组合 ( B A P O . 1 + N A A O . 0 0 1) 对 后 期
芽的延长有利 ; 高浓度的激素组合 , 特别是生
长素 , 对芽的延长有明显的抑制作用 。 此外 ,
芽诱导及生长不仅受外源激素的绝对 员影响 ,
也与其相对比值有关 , B A :P N A A = 20 :1 一 1 20
: 1效果最好 。
3
. 培养基 M C M 、 G D 及 S H 稀释 后 可
明显提高芽诱导率 ( 1 / Z S H )及 有率嫩 茎的产生
( 1 / Z G D )
。 组织培养时 , 一般不提倡使用天然
复合物 , 但对于不易分化的外植体 。 中加入适
量的天然复合物 ( L H )则有利于不定芽的诱 异 。
( 责任编批 吴 兼`江)
高毒力苏云金杆菌株的筛选
中国林业科学研 究院林业 研究所 戴莲韵 王 学胯
摘 要
为选育叶 目的害虫毒力高 , 生产性能稳定
的 菌株 , 收 集 了 10 1个苏云金杆菌株 , 经初选 、
复 筛 和营 养 细胞醋酶分析 , 从中选 出 82 0 3 8
( g a l l e r i a e 酉旨晦型 ) 、 8 3 0 0 2 ( d e n d r o l i m u s 酉旨
酶塑 ) 、 5 3 0 26 ( g a l l e r i a e 酉旨酶型 ) 3 株 优 良
菌株 。 用 3 菌株与生 产菌株 7 21 6 一 13 对 舞 毒
蛾 、 杨尺镬 、 柳毒蛾和杨扇舟峨进行毒力测定
表明 , 除对杨扇舟峨毒力较低外 , 对其它几种
害虫均有 8 0 % 以上的杀虫效果 。
主题词 菌株一筛选一苏云 全杆菌 (高毒力 )
微生物 杀 虫 剂一药效 测定
目前 , 在苏云金杆菌制剂生产和应川过程
中 , 存在的主要问题是产 .甘;质让不稳定 , 成本
偏高 。 因此在稳定产沉:质赁 中 , 选育对「1的害
虫毒力高 , 生产性能稳定的生产 菌株是一项 玉
要的工作 。 我们从不同地区和林间 , 收集 了近
30 。个自然死亡的虫尸 , 从中分离到产 生 伴抱
晶体的苏云金杆 7 株 , 加之各兄弟单位提供的
菌株 24 株共 1 01 株菌 , 进行了摇瓶的 初 筛和父
筛。 初筛 以 菌体形态 (伴袍晶体的形状和大